二 微生物的选择培养和计数 知识点题库

（1） 方法步骤：

①倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在操作．

②制备土壤稀释液：取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．用无菌吸管吸取上清液1mL，转至9mL的无菌水的大试管中，依次稀释到10⁷倍稀释度．

③涂布：按照由101～108倍稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布个子板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布．

④培养：放入恒温箱内，在28～30℃下培养3～4d．

⑤细菌的计数：培育过程中，每隔24小时统计一次菌落数目，当时，选取茵落数在的平板进行计数．

（2） 预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数（填“多于”或“少于”）无氮培养基上的数目，原因是．

（1） 家庭酿制葡糖酒所用的微生物主要是；家庭腌制泡菜的过程中，用水封坛的作用是．

（2） 实验室中配置的培养基在使用前需用法进行灭菌；在配置筛选耐盐细菌的选择培养基时，除加入基本营养物质外还需加入．

（3） 某兴趣小组调查某品牌1g牛奶中细菌数量时，若统计出在稀释倍数为10³的实验组的平板上平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0.2ml，则每克牛奶样品中的菌落数为．若空白对照组的一个平板上出现了7个菌落，这种结果说明在此实验中出现了现象；为获取可靠实验数据，需．

（1） 从酵母菌中分离纯化的酶A可以用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量。

（2） 为了从自然界中获得分解木糖的酵母菌，首先要配制的选择培养基。

（3） 甲同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是。

（4） 测定微生物数量常用的方法有稀释涂布平板法计数法和，统计菌落数目时，要选取菌落数目稳定时的记录作为结果，理由是。

（5） 乙同学提取了含酵母菌的木糖培养液80g，加入无菌水稀释至1000mL。3个适宜的培养基中分别接种0.1mL上述稀释液，然后置于适宜的条件下进行培养，最后统计出3个平板上酵母菌菌落数分别为116、118、126，则1g原木糖培养液中酵母菌数量约为个。应用稀释涂布平板法统计样品中活菌数目的原理是。

（1） 请回答与微生物培养和筛选有关的问题：

聚乙烯（PE）由乙烯（CH₂=CH₂）聚合而成，是农用地膜的主要成分，因其难以被降解，废弃物常造成污染。下图为研究人员筛选PE降解菌的实验流程图。

Ⅰ.该实验应从的土壤中采样，并使用对土壤进行稀释，A组中添加PE为唯一碳源，选择培养的目的是。

Ⅱ.进行扩大培养时，将培养瓶应置于上进行培养，随后进行划线时，发现某个平板第四划线区域无菌落出现，其原因可能有。

Ⅲ.研究小组中有成员建议将筛选得到PE降解菌菌种与特定介质进行结合，形成固定化菌株，优点有（答出两点即可），由于微生物体积较大，不容易被吸附，固定该菌株一般采用法。

（2） 请回答与基因工程有关的问题：

Ⅰ.在转基因操作中，一般需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，是为了保证目的基因在受体细胞中。

Ⅱ.现发现有某种新型抗虫性强的玉米植株，通常采用的方法获取抗虫基因。用处理农杆菌使之处于感受态，即细胞能够从周围环境中摄取DNA分子，并且不易被细胞内的识别并切割的一种特殊生理状态。然后与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成实验。要进一步筛选转基因玉米植株是否具备抗虫性强的性状，需要，若某植株已成功导入了目的基因却没有抗虫性状，可能的原因是；若让筛选获得的抗虫性强的转基因玉米植株（假设只导入了一个抗虫基因）进行自交，子一代抗虫性强的植株中能稳定遗传的占。

（1） 制备微生物培养基的一般步骤为。

（2） 从池塘底泥中分离、筛选硝化细菌时，需要配制以为唯一氮源的培养基，不能直接以牛肉膏蛋白胨培养基作为筛选硝化细菌的培养基，原因是。

（3） 采用平板划线法接种时，需要对接种工具进行处理，在第一区域的基础上进行第二区域的划线操作要求是。若将1g池塘底泥悬浮液稀释10⁴后，各取0.1mL稀释液均匀涂布在3个选择培养基表面，测得菌落数的平均值为54个，空白对照组平板上未出现菌落，则每克土壤中有硝化细菌个。

（4） 分离、纯化出能高效转化亚硝酸盐的硝化细菌后，可对菌种进行保存，临时保藏是将硝化细菌接种到试管的培养基上，该保存方法的缺点是保存时间不长，菌种易。