二微生物的选择培养和计数知识点题库

下列有关实验方法的叙述正确的是

A . 观察统计培养液中酵母菌数量需用到血细胞计数板 B . 调查人类遗传病时应选择单基因遗传病来调查，如白化病、先天愚型等 C . 在色素分离的层析结果中，叶绿素a条带最宽，可见其在层析液中溶解度最大 D . 可用标志重捕法调查棉花的种群密度

下列有关生物技术实践的叙述，不正确的是( )

A . 在土壤中分解尿素的细菌的分离和计数实验中，应采用平板划线法 B . 制作果醋时应不断通入无菌空气 C . 通过比色法来检测亚硝酸盐含量需要制备标准显色液 D . 利用DNA和蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同提取DNA

下面微生物的细胞壁合成会受到青霉素抑制的是（）

A . 产甲烷细菌 B . 极端嗜盐菌 C . 结核分枝杆菌 D . 酵母菌

19世纪末，继抗毒素之后，又很快发现了免疫溶菌现象．现代免疫学研究进一步证实：免疫血清中有两种不同的活性物质与溶菌现象有关﹣﹣抗体和补体（血清中能够补充抗体活性的成分）．下表为免疫学家Bordet的霍乱弧菌溶菌实验的主要过程：

组别	抗原	细菌培养基	实验处理					实验结果
			添加的绵羊血清类型			正常绵羊的（未经抗原免疫）新鲜血清	正常人的（未经抗原免疫）新鲜血清	实验结果
			未经抗原免疫的新鲜血清	经抗原免疫的抗霍乱血清	56℃保温50分钟的抗霍乱血清	正常绵羊的（未经抗原免疫）新鲜血清	正常人的（未经抗原免疫）新鲜血清	凝集	溶解
1	霍乱弧菌	含蛋白胨的碱性培养液	+					-	-
2				+				+	+
3					+			+	-
4					+	+		+	+
5							+	-	-
6					+		+	+	+

（注：上表中“+”表示“有”“﹣”表示“无”）

（1）细菌培养液中蛋白胨可为霍乱弧菌提供营养物质．霍乱弧菌在PH8.8～9.0的条件下生长良好，而其他细菌在这一PH则不易生长，故此该培养基可作为增殖霍乱弧菌的培养基．
（2）该实验设置第1组的目的是；与第4组可以构成对照实验的是第组实验．
（3）基于深入研究，Bordet认为血清杀菌作用需要的两种物质中：一种耐热，可因免疫而加强，特异地与抗原发生凝集反应，即现知的物质，分泌产生该物质的细胞在结构在具有的特点；另一种不耐热，即现知的补体，通过第6组实验与第组实验之间的对照，可以说明补体有（选填“特异性”或“非特异性”）．

下表所示为某微生物培养基的配方，下列说法中不正确的是（）

成分

NaNO₃

K₂HPO₄

KCl

MgSO₄

•7H₂O

FeSO₄

（CH₂O）

H₂O

青霉素

含量

0.5g

0.01g

30g

1 000mL

0.1万单位

A . 此培养基属于液体培养基，其中的碳源是（CH₂O） B . 配制培养基时，溶化后分装前，必须要进行的是调整pH和灭菌 C . 接种时应在酒精灯火焰附近操作 D . 若用该培养基培养纤维素分解菌，应除去青霉素，加入的是纤维素粉

下列有关生物技术实践的叙述，正确的是（）

A . 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般都相同 B . 在提取胡萝卜素时，可选用乙醇或石油醚作为萃取剂 C . 制作果酒和果醋时都可用体积分数为70%的酒精对发酵瓶消毒 D . 腐乳制作中利用的蛋白酶和脂肪酶只产自毛霉

幽门螺杆菌是栖息在胃黏膜的螺旋状短杆菌，具有很强的脲酶活性．如表是某实验小组培养幽门螺杆菌所用培养基的配方（培养细菌一般用牛肉膏蛋白胨培养基）．请分折回答下列问题：

成分	葡萄糖	KH₂PO₄	MgSO₄	NaCl	CaSO₄	CaCO₃	琼脂	蒸馏水
含量	10g	0.2g	0.2g	0.2g	0.2g	5g	3.5g	1L

（1）实验室筛选微生物通常须人为提供有利于目的菌生长的（至少答三种）等条件，抑制或阻断其他微生物的生长，能达到此目的培养基称为．在实验中，为使培养基能达到此目的，需设置对照组，对照组所用的培养基一般是培养基．
（2）将幽门螺杆菌接种到pH适宜的该培养基中，最常用的接种方法有和平板划线法．置于37℃下培养一段时间后，该培养基中幽门螺杆菌的数目比刚接种时少，主要原因是．
（3）在选择培养幽门螺杆菌时，培养基中要加入尿素和酚红指示剂，这是因为幽门螺杆菌可以合成，能分解尿素．若有幽门螺杆菌，则菌落周围会出现色环带．
（4）某小组采用平板划线法分离该细菌．在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是．

如图是筛选抗链酶素大肠杆菌的实验步骤及相关图解．

实验步骤：

①把大量对链酶素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基1的表面，进行培养．

②待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基2上，随即再影印到含有链霉素的培养基3上，进行培养．

③在培养基3上出现了个别抗链霉素的菌落，将其挑选出．

请回答：

（1）配制培养基时除了满足基本的营养条件外，还需满足微生物生长对特殊营养物质、、的要求．
（2）从功能上看，含有链霉素的培养基属于培养基．若在培养基中加入伊红和美蓝，则培养皿中长出的菌落颜色为．由图可知，1号培养基接种的方法为．
（3）对2和3进行比较，在2上找到与3上相应的菌落，挑取其中一个菌落接种到（含链霉素/不含链霉素）的培养基上，如果有较多的菌落出现，则说明该抗性基因突变发生在该菌接触链霉素之（前/后）．
（4） 3中的菌落比1，2中的菌落少很多，这说明了基因突变具有的特点．

为获得果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作．

（1）为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是．制备的培养基常用法进行灭菌．
K₂HPO₄
MgSO₄
NaNO₃
FeSO₄
琼脂
0.1g
0.5g
3g
0.01g
2g
15g
加至1L
（2）科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液．为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行，用法接种于固体培养基上．接种后的培养基状态放人培养箱．
（3）选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落直径的比值，筛选果胶酶高产菌株．
（4）将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的（填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将与等量果胶溶液混合，作为实验的对照．

用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为10⁴的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是（）

A . 涂布了1个平板，统计的菌落数是230 B . 涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C . 涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163 D . 涂布了3个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233

磷是植物生长的重要营养元素之一，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应．科研人员进行如下实验：

实验原理：固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈，透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小．

实验步骤：步骤1 取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀释液1mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h．步骤2在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3～4d后观察菌落特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如表）．

菌株	透明圈直径（D）单位：mm	菌落直径（d）单位：mm	D/d
甲	22.8	15.3	1.5
乙	20.7	7.7	2.7
丙	8.2	7.5	1.1

请分析回答下列问题：

（1）为了筛选出所需菌株，培养基中唯一的磷源应该是，步骤1中接种方法是，步骤2中接种环的灭菌方法是．
（2）土壤中的磷以形式被植物细胞吸收，吸收后可用于合成．（填出2种含磷的有机物）．
（3）根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是．为了保持所得菌种的纯净，需要进行菌种的保藏．临时保藏时，要将菌种接种到试管的培养基上，长成菌落后放入4℃的冰箱中；长期保存时可以采用的方法．
（4）实验中所用的固体培养基往往是在液体培养基中加入凝固剂制备的，培养基上出现的单一菌落可以看做一个（填“种群”、“群落”、“生态系统”）．

苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害．小明同学准备依据图1操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株．请回答下列问题：

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有。
（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐，以达到富集酚降解菌的目的。若图1平板中菌落过于密集，应进一步，以便于菌落计数与分离，制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加。
（3）图2为连续划线法示意图，在图中（填图中序号）区域更易获得单菌落。
（4）采用比色定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚中苯酚残留量，先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1~5号比色的苯酚浓度应分别为。
管号 1 2 3 4 5 6
苯酚浓度（mg/L）




1

分解尿素的微生物广泛存在于农田等土壤中，某生物实验小组尝试对分解尿素的微生物进行分离与计数，请回答下列问题：

（1）分解尿素的微生物含有的酶是，为筛选出能分解尿素的微生物，配制培养基时应以作为唯一氮源，因此该培养基属于培养基。
（2）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是。常用来统计样品中活菌数目的方法是。
（3）该小组对分解尿素的微生物进行计数时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是，然后将1mL样液稀释10000倍，在3个平板上用涂布法分别涂布0.1mL稀释液；经适当培养后，统计活菌数目，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取作为结果；3个平板的菌落数分别为39、42和45。据此可得出每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数为个。

某研究小组对野生型酵母菌进行诱变处理，得到了酒精产量高的优质酵母菌，并固定化酵母细胞用于生产。

回答下列问题：

（1）在分离纯化该优质酵母菌过程中，用(答接种方法)才能得到图示的结果，该接种过程中用到乙图所示的实验器材有(多选)。
（2）为了证明分离纯化得到的酵母菌能提高酒精产量，可将等量的和分离纯化得到的酵母菌，分别接种于含等量葡萄糖编号为1、2的两组发酵装置中，适宜条件下培养。一段时间后取样，用检测，若实验结果为，则说明该酵母菌能提高酒精产量。
（3）分离纯化得到酒精产量高的优质酵母菌，可制备成固定化细胞用于生产，该技术的优点是。在制备固定化酵母细胞过程中，配制海藻酸钠溶液时要用小火或者间断加热，原因是；若固定化得到的凝胶珠颜色过浅且呈白色，说明。

某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题：

（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了和，除此之外，培养基还必须含有的基本成分是。
（2）对培养基和培养皿进行灭菌，常采用的方法分别是。
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种作为对照进行实验。
（4）培养20小时后，观察到平板上有，如果其总数越多，则说明。
（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐细菌，这种培养基被称为。

落叶是城市绿化废弃物的主要组成部分，落叶中纤维素含量较高且难降解。科研单位以我市常见落叶树为原料，以农家鸡粪为菌剂来源对落叶进行微生物降解，用刚果红染色法分离获得利于落叶堆肥化处理的纤维素高效降解菌种。其大致过程如图一，图二为两种不同的接种方法。请回答下列相关问题。

（1）落叶中的纤维素是的主要成分。②操作所用培养基中通常不加入琼脂等凝固剂，该培养基的主要作用是。
（2） ③操作为；④操作时，为了避免降解色素的微生物造成假阳性现象，可以采用的方法是。
（3）若筛选获得的菌株可产生纤维素酶，将这些酶进行固定化，一般不采用包埋法，其原因是。
（4）若对筛选获得的菌株进行计数，应选择图二中图对应的操作方法，用此方法测定的数目，其原理是。但是，用此方法统计的菌落数比接种活菌的实际数目要低，原因是。

[选修1：生物技术实践]

葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些皮渣主要用作饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。

回答下列问题：

（1）皮渣中含有较多的天然食用色素花色苷，可用萃取法提取。萃取前将原料干燥、粉碎的目的分别是，萃取效率主要取决于萃取剂的。萃取过程需要在适宜温度下进行，温度过高会导致花色苷。研究发现，萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理可提高花色苷的提取率，原因是。
（2）为了解皮渣中微生物的数量，取10g皮渣加入90mL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平板法将0.1mL稀释液接种于培养基上。10⁴倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和95，则每克皮渣中微生物数量为个。
（3）皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH调至性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是。培养筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙醇作为。
（4）皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者菌落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌。（简要写出实验步骤和预期结果）

葡萄酒和葡萄汁都是利用葡萄加工而成的常见饮品，回答下列相关问题：

（1）葡萄酒发酵需要用酵母菌，为了提高葡萄酒的品质有时候我们需要接种纯种的酵母菌，需要我们进行酵母菌的分离和纯化，如果要将酵母菌从细菌中分离出来，可以在培养基中加入，这种培养基从功能上来讲属于。
（2）如果我们需要进一步将酵母菌分离纯化，可以挑取酵母菌菌落，在培养液中经过稀释后用法接种在培养基表面，这种方法也可以用来进行酵母菌的计数，而这种方法计数获得的结果往往比实际值偏（填“低”或“高”），原因是。
（3）在制作葡萄汁的时候，为了提高出汁率和提升果汁的品质，我们可以用处理。为了进一步节约成本，我们还可以采取固定化酶和固定化细胞的技术，酵母菌通常可以采用法固定化。我们可以将酵母菌和溶液混合来制备固定化细胞，用固定化细胞技术发酵酿酒和传统发酵技术相比具备哪些优点?。

产脲酶的细菌可分解尿素。为筛选产脲酶的菌株，科研人员开展了相关研究。

（1）为了筛选可分解尿素的细菌，配置的培养基应选择尿素作为唯一，尿素的灭菌方法是。
（2）称取1g土壤样品，加入99mL中，制备成菌悬液。若用涂布分离法计数细菌的个数，要使所得估计值更接近实际值，应严格操作，多次重复，还应保证对待测样品的比例恰当。取0.1mL10倍稀释的菌悬液涂布在固体培养基上，平均长出了25个菌落，则该样本中每克土壤约有产脲酶的细菌个。
（3）通常筛选菌种时可以通过观察特征对细菌进行初步鉴定。在筛选产脲酶的细菌时，还可以在培养基中添加作为指示剂，产脲酶的细菌在培养基中生长一段时间后，菌落周围指示剂将变成色。

双酚A（BPA）是一种含碳有机物，是重要的工业原料，在环境中不易降解，科研人员对土壤中细菌等微生物进行筛选，得到了具有降解 BPA 能力的菌株，下列有关叙述正确的是（）

A . 为了有效防止杂菌的污染，可将土壤稀释液彻底灭菌后再接种到培养基上 B . 分离 BPA 降解菌的培养基需要以BPA 为唯一碳源 C . 可用平板划线法和稀释涂布平板法对该菌进行计数 D . 培养基要维持正常的pH 和渗透压，调pH 一般应在灭菌后

管号	1	2	3	4	5	6
苯酚浓度（mg/L）						1

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