二 微生物的选择培养和计数 知识点题库

（1） 幽门螺杆菌与酵母菌比较，二者的主要区别在于幽门螺杆菌 ．

（2） 为了探究幽门螺杆菌生长繁殖的因素，某研究性学习小组在培养该菌过程中，发现了在某种细菌（简称W菌）的周围，该菌的生长繁殖受到抑制．他们把W菌接种在 专门的培养基上培养，一段时间后，除去W菌，在此培养基上再培养幽门螺杆菌，结果是幽门螺杆菌仍然不能正常生长繁殖．

①据材料分析，研究小组的同学对“造成W菌周围的幽门螺杆菌不能生长繁殖”的原因的最可能假设是 ．

②试参照上述材料设计实验验证①中的假设．

A．方法步骤：

a．制备培养基：取两个培养皿，按相同的营养成分配制成甲、乙两个培养基．

b．设置对照： ．

c．接种幽门螺杆菌：在甲、乙两培养基上分别接种相同的幽门螺杆菌．

d．培养观察：条件下培养甲、乙两个培养基上的幽门螺杆菌．

B．实验结果： ．

（1） 分解尿素的细菌都能合成，该种细菌在生态平衡中起到什么作用？．写出细菌分解尿素的方程式．

（2） 根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？（能/不能），原因是．

（3） 分离得到分解尿素的细菌后，如果要扩大培养，则应选择 培养基进行培养．培养一段时间后，使用 对微生物细胞进行计数．计数过程中，下列哪种行为会影响计数的准确性       

（4） 为了提高尿素肥效，可以将分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”．为了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用技术．

（1） 土壤中的酵母菌计数：

在秋季的柿子园中，落地的柿子流出果汁的周围土壤中有酵母菌大量生长繁殖．

①用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样、并在旁称取10g土样，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．而后进行系列稀释操作；吸取锥形瓶中土壤液的上清液mL，转移至盛有9mL无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至10¹、10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀释液．

②为测定土壤中酵母菌的数量，选用第①步中所获得的10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀释液，并依次分别吸取0.1mL进行平板涂布操作．在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时，对各稀释度涂布的三个平板进行菌落计数（如表）．

序号	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ
稀释度104倍	5	8	3
稀释度103倍	178	191	156
稀释度102倍	418	511	389

则每克土壤样品中的酵母菌数量约为个．要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是．

（2） 柿子醋生产菌的制备：

为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜于℃进行纯化培养，获得图1所示菌落分布．应从（填“甲”“乙”或“丙”）区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种．

（3） 柿子酒、柿子醋的制作（发酵装置如图2所示）：

①排气口弯管设置的目的是．

②可通过装置中的对发酵情况进行及时监测．此时，若采用血细胞计数板对发酵液的酵母菌观察计数，与（1）中计数方法相比，该计数方法测得的酵母菌数目较．

③柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变进行生产．

（1） 过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要经过灭菌处理的是。与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行。

（2） 待测水样过滤完之后，还有部分纟田菌吸附在滤杯杯壁上，将这部分细菌也尽可能集中到滤膜上的操作为。

（3） 将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的操作。从功能上看，EMB培养基属于培养基。

（4） 无菌操作下将90mL无菌水加入到10mL待测水样中，这样就将待测水样稀释了倍，将稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数为45，黑色菌落为5，则1升待测水样中的大肠杆菌数目为个。

（5） 若要测定待测水样中酵母菌的数目，应更换上述过滤装置中的滤膜，选择孔径（填“更大”或“更小”）的滤膜。

（1） 该兴趣小组进行实验时所用培养基除了能为谷氨酸棒状杆菌提供碳源和氮源外，还能提供的主要营养物质是。

（2） 统计待测培养液中谷氨酸棒状杆菌的数量，可采用的方法有显微镜直接计数法和稀释涂布平板法。

①利用显微镜直接计数法统计过程：取第二组的100倍的稀释液0.1mL滴加到计数板（由25×16=400个小室组成，容纳液体总体积为0.1mm³）在计数室内共有菌体48个，则1mL的第二组发酵液中有菌体个。用该方法测定的微生物数量大于实际的活菌数，原因是。

②利用稀释涂布平板法统计的结果比实际值往往（填“偏大”或“偏小”），原因是。

（3） 根据表中信息可知，培养过程中需先将碳氮比设为4：1，目的是，然后将发酵液中碳氮比改为3：1继续培养，目的是。

（1） 在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是（填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO₃”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是。硝化细菌在没有碳源的培养基上（填“能够”或“不能”）生长，原因是。

（2） 用平板培养细菌时一般需要将平板（填“倒置”或“正置”）。

（3） 单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是。

（4） 有些使用后的培养基在丢弃前需要经过处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。

（1） 配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的基本步骤：计算→称量→溶化→灭菌→。

（2） 检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种接种方法称为。

（3） 用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组，为什么?。

（4） 如分别取 0.1 mL 已稀释 10² 倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为 52、 55 、 58 ，则每升原水样中大肠杆菌数为。 与用显微镜直接计数法相比，此计数方法测得的细菌数目较（填“多”或“少”）。

（5） 已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？请写出大致的实验思路。

。

（1） 实验室常用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基培养细菌，牛肉膏能提供的主要营养有 。一般用琼脂培养基培养酵母菌。

（2） 如图，该小组采用的是  分离水样中的细菌。操作时，接种环通过灭菌，在第二次及以后的操作时，总是从上一次的末端开始，这样做的目的是 。

（3） 该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。根据培养皿上菌落的平均数可以计算河水中该细菌的密度，但计算的数据要比实际活菌的数目少，原因是。除了上述的活菌计数法外， 也是测定微生物数量的常用方法。

（4） 该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是： 。

（1） 食醋的天然发酵醋醅中存在多种醋杆菌，拟从中分离出高产酸醋杆菌。取10g醋醅样品加入装有90mL的锥形瓶中，混匀后用法接种于培养基（用溴甲酚紫做指示剂，根据有无变色圈判断是否产酸）上，适宜条件下培养48h，挑取的菌落，纯化培养。

（2） 醋醅中常混入一些麸皮、谷糠来增加疏松程度，其作用是。除醋杆菌外，醋醅中还有红曲霉菌等微生物，这些微生物赋予了食醋独特的风味。若要分离出其中的红曲霉菌，可用（A．LB培养基   B．MS培养基   C．土豆培养基   D．牛肉汤培养基）培养。红曲霉菌具有的酯化酶、糖化淀粉酶等，除能赋予食醋独特的风味，还能，以增加产量。

（3） 使用果胶酶处理可使食醋澄清。为减少果胶酶的使用量，常用脱乙酰几丁质为载体、戊二醛为偶联剂固定果胶酶，这种固定化方法属于。为了解固定化果胶酶的特性，科研人员进行了相关实验得到如下结果。据图分析，固定化果胶酶的优点是。

（1） 在进行实验前需要配制培养基，通常包括计算、称量、溶解、调pH、分装、灭菌等环节，其中调pH的过程（填“需要”/“不需要”）在酒精灯火焰旁进行。为检验培养基是否灭菌彻底，可。

（2） 为统计洗手前手部细菌的数量，应选择的接种方法是（填“稀释涂布平板法”或“平板划线法”）。除该方法外，还可使用血细胞计数板计数，但所得数据往往比前者。

（3） 根据上图所示的步骤得出的实验结果可信度较低，为了提高实验结果的可信度，请给出两点建议：①，②。

（4） 培养一段时间后可根据（至少填两项）等菌落特征初步判断培养基上菌种的类型。为了计算洗手前手部单位面积的细菌数量，除上图所给的信息外，还需要知道。

（1） 配置培养基时，应以尿素作为唯一，该培养基属于选择培养基，原因是。

（2） 根据培养基中的菌落数推测样品中的活菌数时，需要先用对样品进行一定倍数的稀释，目的是保证。

（3） 为了鉴定培养基中生长的菌落是否是目标菌，需要向培养基中加入指示剂，若，则可初步确定所得微生物为目标菌。