微生物的利用 知识点题库

（1） 从土壤中筛选酸性脲酶生产菌，其培养基的主要成分有葡萄糖、尿素、琼脂等，从功能上分析，该培养基属于培养基。该培养基的氮源来自。

（2） 筛选和纯化酸性脲酶生产菌常用的两种接种方法是和。配制浓度梯度为10^-1的系列稀释液时，需用移液管将1mL菌液移入盛有mL蒸馏水的试管中。

（3） 对同一浓度的酸性脲酶生产菌稀释液，分别用血球计数板计数和稀释涂布平板法计数，若不存在实验误操作，则前者的数量（多于／等于／小于）后者，其原因是。

（4） 若用海藻酸钠固定含酸性脲酶的细菌时，应将海藻酸钠溶液和细胞混合滴入溶液中。右表是不同浓度海藻酸钠形成的凝胶珠状况，从表中看出，海藻酸钠的浓度应选用g／dL。若利用固定化酶技术，它的优点是。

海藻酸钠质量浓度（g/dL）	凝胶强度	凝胶气泡量	成球难度	凝珠形状
1.0	中	没有	较易	扁圆形
2.0	中	少量	易	圆球形
3.0	强	较多	稍难	有托尾
4.0	强	大量	难	难成球形

（1） 显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用于         染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用         （填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2） 为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以         为碳源的固体培养基进行培养。

（3） 若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用         直接计数；若要测定其活菌数量，可选用         法进行计数。

（4） 为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg， 则上述三个温度中，         ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕         ℃设计后续实验。

（1） 要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明根据对的要求，到相应的环境中去寻找．

（2） 某同学根据需要，配制了纤维素分解菌的培养基如下，整个实验过程严格执行无菌操作．

纤维 素粉	NaNO3	Na2HPO4•7H2O	KH2PO4	MgSO4•7H2O	KCl	酵母膏、 水解酪素
5g	1g	1.2g	0.9g	0.5 g	0.5g	适量

如果将其中的纤维素粉换成葡萄糖，菌落数将，即可说明选择培养基的作用．

（3） 接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采用法，原因是平板划线法难以．

（1） 用于分离木霉菌种的培养基属于培养基．配制此培养基时，应加入作为唯一碳源．接种前，将培养基在适宜温度下放置适当的时间，观察培养基，以确定培养基是否被污染．

（2） 纯化木霉时，统计出0.2mL的稀释液在稀释倍数为10⁵的平板上的平均菌落数为40个，则每mL样液中的菌落数为个．用此法测定木霉数量，实际活菌数量要比统计的菌落数量，原因是．

（3） 探究pH对木霉降解毒死蜱活性的影响

①研究小组向不同pH的培养基中分别加入100mg/L 毒死蜱，5天后检测毒死蜱的残留量（图1）．由图可推知：在偏酸性的土壤中，．

②研究小组向不同pH的培养基中分别加入100mg/L 毒死蜱，再分别接种1mL木霉悬液，混合均匀，5天后检测毒死蜱的残留量（图2）．在此韭菜温室土壤中，若要提高木霉对毒死蜱的降解活性，可对土壤作何处理？．

（1） Ⅰ方法一：研究人员利用有机化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基成功筛选到能高效降解化合物A的细菌．实验的主要步骤如图所示，请分析回答：

①培养基中加入化合物A的目的是．

②“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的．实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是．

③在上述实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是．

④转为固体培养时，常采用的方法接种，获得单菌落后继续筛选．

⑤若研究“目的菌”的群体生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用显微直接计数法进行计数．若以一个大方格（体积为0.4mm³）有25个中方格的计数板为例进行计算，设五个中方格中总菌数为B，菌液稀释倍数为C，那么原菌液的菌群密度为个/mL．

（2） Ⅱ方法二：研究人员通过化学方法合成了高效降解化合物A的某种酶的基因，利用PCR扩增后，采用一定方法导入细菌细胞中，经筛选、培养获得高效降解化合物A的细菌．请分析回答：

①在利用PCR扩增该酶的基因时，在扩增缓冲液中添加4种脱氧核苷三磷酸作为原料而不是脱氧核苷酸，从而使反应体系不需要再加入ATP提供能量，请推测PCR反应合成DNA子链时能量来源于．

②假如PCR反应所用的引物含有放射性、模板不具有放射性，且引物不被切除，则经过n次循环，具有放射性的脱氧核苷酸链占总链数的比值为．

（1） 配制培养基时，灭菌、添加NaCl溶液和调节pH的先后顺序是．

（2） 步骤②平板划线操作过程中，第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是．完成图一所示操作，至少需要灼烧接种环次．

（3） 步骤④中统计活菌数目用法，该方法统计的活菌数（填“大于”、“等于”或“小于”）实际数值．直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是．若每种浓度设3个重复实验，每次统计活菌数目时需要从个培养瓶中取样．

（4） 由图二可知，该耐盐菌最适合处理含 （浓度）NaCl的废水．

（1） 土壤是散生物的天然培养基，从化工厂的污泥中能筛选出可降解苯酚的菌株的原因是。研究人员先将采集的污泥中的菌体接种到牛肉膏蛋白胨培养基上，并在适宜的条件下培养，其目的是。

（2） 将培养得到的微生物接种到以为唯一碳源的培养基上以筛选目的菌株，从功能上划分，用于筛选可降解苯酚的微生物的培养基属于培养基，纯化该菌种时常用的接种方法有。

（3） 在相同条件下，以聚乙烯醇—壳聚糖复合物为载体包埋可降解苯酚的微生物，对苯酚的降解效果明显好于游离的微生物的，可能的原因是，该过程应用的技术为。

（1） 上述实验过程中“选择培养”的目的是。

（2） 与30℃相比，37℃培养时霉菌类纤维素分解菌生长迅速，菌丝会其他菌落，对后续菌种的分离造成困扰，因此采用30 ℃培养为佳。

（3） 兴趣小组在鉴别菌种时尝试了两种方案：A. 先培养微生物，再加入刚果红染色；B. 直接在加入刚果红的鉴别培养基上培养微生物。结果发现：A方案在漂洗多余刚果红的过程中，易出现菌落浮起被带走的现象，从而造成，故答案为：方案B。由于刚果红在高温下容易被分解，应在培养基灭菌（填“前”或“后”）加入。

（4） 有小组成员根据表1结果中的，认为菌料中的目的菌分解纤维素的能力最强，其他成员对此观点提出异议。兴趣小组继续对三组样品进行透明圈直径、菌落直径和酶活力的测定，实验结果如下表2：

表2　不同H/C值纤维素分解菌酶活性的比较

组别	H（透明圈直径）（单位：cm）	C（菌落直径）（单位：cm）	H/C值	酶活力（U/mL）
1	2.06	0.48	4.3	1.7
2	1.68	0.30	5.6	2.4
3	2.62	0.41	6.4	2.9

你认为将作为判断纤维素分解菌分解能力大小的依据更合理，其大小与酶活力呈相关。

（5） 兴趣小组欲对培养液中的纤维素分解菌进行计数，具体做法是：先在培养基上加入若干质量较轻的小球，然后在平板上滴加一定体积的培养液，盖上培养皿盖后左右摇晃。试分析这样做的目的是。

（1） 微生物相关实验常常要求进行无菌操作，如在使用三角瓶时需依次用   、牛皮纸封口后进行灭菌，制备尿素固体培养基过程中采用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌法和 。

（2） 采用如图固定化装置进行葡萄糖发酵制酒精，图中 a 是  ，该实验中其可以反复利用，实验过程一定要在、无氧且温度和 pH 适宜等条件下进行。在发酵过程中 葡萄糖浓度不能过高，否则。在使用较低浓度葡萄糖溶液过柱时，反应柱流出液中仍有葡萄糖， 其原因可能是(答出 2 点)。

（3） 在果酒酿造过程中，如果果汁灭菌不严格，含有醋杆菌，酒精发酵旺盛时，醋杆菌不能将果汁中的糖发酵为酸的原因是 。为了测定酵母菌的活细胞密度，将待测菌液稀释 1000 倍后， 经等体积的染色剂溶液染色( 活细胞无色，死细胞蓝色)，用血细胞计数板计数( 规格 2mmx2mx0.1mm，有 25 个中方格)，理论上计算 5个中方格的活细胞数不应少于 才能达到每毫升 3×109 个活细胞的预期密度。

（4） 用比色计测定某种果醋中的葡萄糖含量，需要制作的标准曲线。实验中一般不能更换比色杯，若制作标准曲线时的比色杯光程小于测定样液的比色杯光程，测得的样液中葡萄糖含量 (填“偏大”、“偏小”或“无影响”)。

（1） 表的培养液pH均为7.0，若要筛选微生物L，则不能选择表中的培养液。

培养液	乳糖	乳糖酶	NaNO2	牛肉膏	K2HPO4	KCl	MgS4O•7H2O	FeSO4
A	25g/L				1g/L	0.5g/L	1g/L	0.01g/L
B			3g/L		1g/L	0.5g/L	1g/L	0.01g/L
C	25g/L	1ug/L		3g/L	1g/L	0.5g/L	1g/L	0.01g/L
D	25g/L		3g/L		1g/L	0.5g/L	1g/L	0.01g/L

（2） 为了获得能产乳糖酶的微生物L的单菌落，可采用法将初筛菌液接种在固体培养基上。

（3） 扩大培养微生物L时，通过不断增加营养物质的比例（可以/不可以）提高种群密度，分析说明原因。

（4） 常用法固定化乳糖酶。在建立和优化乳糖酶固定化酶柱时，优化酶反应时间可通过来调节。

（5） 下图是温度对乳糖酶的固化酶和游离酶活力的影响曲线，该曲线表明固化酶和游离酶的最适温度(从相同或不同选填)；低于或高于最适温度时，固化酶的酶活力(从低于、等于或高于选填)游离酶。

（1） 常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是（填编号）。

编号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	培养皿	涂布器
灭菌方法	高压蒸汽	火焰灼烧	酒精擦拭	臭氧

（2） 称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。甲、乙两位同学分别取菌悬液涂布在固体培养基上，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133。乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是：。

（3） 为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行诱变育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径的菌落，纯化后获得相应突变菌株。

（4） 在脂肪酶的分离过程中采用凝胶色谱法，此方法是根据分离蛋白质的有效方法；也采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度，通常会在凝胶中添加SDS，SDS的作用是。

（5） 在制备该酶的固定化酶时，一般不宜采用包埋法，原因是（答出1点即可）。

（1） 此培养基中(NH₄)₂SO₄能为微生物提供的主要营养为；按功能分该培养基属于培养基。

（2） 用平板划线法分离棉酚分解菌，划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有（答出一点）。在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间，这样做的目的是。

（3） 采用稀释涂布平板法接种后，菌落数随培养时间的延长而发生变化，因此需每隔24h统计一次菌落数，选择的记录数据作为结果。在37 ℃下培养48 h，若培养基上出现形状、大小、隆起程度和颜色不同的菌落，可判断培养基上有多种细菌，这里判断依据是在一定的培养条件下，同种微生物表现出。

（4） 在某次分离棉酚分解菌的实验中，大部分同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而有一位同学从培养基上筛选出大约150个菌落，这种差异产生的原因可能是 (答出1点即可)。