生物柴油是一种可再生的清洁能源,其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗.科学家发现,在微生物M产生的脂肪酶作用下,植物油与甲醇反应能够合成生物柴油(如图)

(1)用于生产物柴油的植物没不易挥发,宜选用、方法从油料作物中提取.
(2)筛选产脂酶的微生物M时,选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供 ,培养基灭菌采用的最适方法是 法.
(3)测定培养液中微生物数量,可选用 法直接计数;从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测 , 以确定其应用价值;为降低生物柴油生产成本,可利用 技术使脂肪能够重复使用.
(4)若需克隆脂肪酶基因,可应用耐热DNA聚合酶催化的 技术.


请回答:
①样品处理中红细胞的洗涤要用反复冲洗、离心,在洗涤红细胞时,离心速度过高和时间过长会使等一同沉淀,达不到分离的效果。洗涤干净的标志是。
②在的作用下,洗涤好的红细胞破裂,释放出血红蛋白。
③粗分离过程中,透析的目的是。

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割的原因是、。构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子,启动子是酶的识别和结合位点。
