纤维素分解菌的分离 知识点题库

（1） 分离纤维素分解菌，宜从的土壤中取样。纤维素分解菌之所以能够利用纤维素，是因为其细胞内含有。

（2） 培养基除含有碳源、氮源、水和多种无机盐外，还应含有。其中，碳源主要为。对配制的培养基采用高压灭菌，目的是。

（3） 纤维素分解菌纯化培养中常用的接种方法。在添加刚果红的培养基上，可通过是否产生来筛选纤维素分解菌。

（4） 从纤维素分解菌中提取纤维素酶，可采用方法，如果采用法对该细胞菌进行固定，也可不经过酶的提取和分离等繁杂操作即可实现纤维素发酵。

（1） 分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶．其中的葡萄糖苷酶可将分解成．

（2） 在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成色复合物．用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的．

（3） 为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：

	酵母膏	无机盐	淀粉	纤维素粉	琼脂	CR溶液	水
培养基甲	+	+	+	+	﹣	+	+
培养基乙	+	+	+	﹣	+	+	+

注：“+”表示有，“﹣”表示无．

据表判断，培养基甲（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是；培养基乙（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是．

（1） 对培养基进行灭菌的常用方法是 ． 为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用法进行接种．

（2） 先将样品悬液稀释后涂在放有滤纸条的固体培养基上进行筛选得到初筛菌株．再将初筛菌株接种到以为唯一碳源的培养基培养2～5天，加入溶液后，依据出现的颜色反应进行筛选，观察菌落特征并测量 ． 同时将初筛菌株制备成的菌液放入加有滤纸条的液体培养基中，恒温振荡培养8天，观察滤纸条的破损情况．结果见表．由表可知，8种菌株中1，3，7号菌株产酶能力较强，你的解释是 ．

菌株编号 检测指标	1号	2号	3号	4号	5号	6号	7号	8号
DP	5.91	1.73	6.54	1.53	3.23	1.76	7.29	1.34
滤纸破损	+++++	+++	+++++	++	++++	+++	+++++	++

注：①D_P=（D/d）² ， 其中d表示菌落直径（cm），D表示水解圈直径（cm）②“+”为滤纸边缘膨胀；“++”为滤纸整齐膨胀并弯曲；“+++”为滤纸不定形；“++++”为成团糊状；“+++++”为半清状

（3） 为进一步研究1，3，7号菌株对秸秆降解的效果．分别用这三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定．结果见如图．

由图分析可知，三种菌株对的降解最强，与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中的降解率变化最大．

（1） 玉米秸杆经预处理后，应该选用酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖．

（2） 从以下哪些生物中可以提取上述酶（多选）．

A．酿制果醋的醋酸菌 B．生长在腐木上的酶菌

C．制作酸奶的乳酸菌 D．生产味精的谷氨酸棒状杆菌

E．反刍动物瘤胃中生存的某些生物

（3） 若从土壤中分离产生这种酶的微生物，所需要的培养基为（按功能分），培养基中的碳源为．

（4） 发酵阶段需要的菌种是，在产生酒精时要控制的必要条件是．

（1） 该技术需要从土壤中获得纤维素分解菌，获得该菌的方法是在含有纤维素的培养基上，加入染料，筛选周围有的菌落．其产生的分解纤维素的酶至少包括三种组分，在这三种酶协同作用下，纤维素最终被水解成．

（2） 用获得的糖液发酵生产乙醇，常用的微生物是，在条件下的发酵液中，该菌可以继续生长繁殖，而绝大多数微生物受到抑制．

（3） 从以下哪些微生物中可以提取上述酶？　          　（多选）

（1） 为了制成固体培养基，除了水、碳源、氮源和无机盐等基本配方以外，培养基中通常还需加入。微生物吸收的无机盐的作用是（答出两点即可）。

（2） 步骤②、③中，若将稀释后且富含多种类型微生物的土样培养液直接涂布于同一个以纤维素为唯一碳源的固体培养基上，可能导致错过优势纤维素分解菌的发现，原因是。某研究人员将1mL培养液稀释100倍后，在4个平板上分别接入0.1mL的稀释液，经适当培养后，4个平板上的菌落数分别是15、151、155、159，据此可得出1L培养液中的活菌数是个。

（3） 步骤③中，刚果红可以与纤维素形成色复合物。接种在培养基上初筛分离得到的4个菌株的观察结果如下表。据表分析，哪号菌株产生的纤维素酶活性最高或其纤维素酶量最大？理由是什么？

菌株编号	菌落直径d（cm）	透明圈直径D（cm）	D/d
1	0.3	0.9	3.00
2	0.3	0.6	2.00
3	0.3	1.3	4.33
4	0.6	2.0	3.33

（1） 为了保持菌种的纯净，可将菌种接种到试管的培养基上临时保藏，在合适的温度下培养，当菌落长成后，将试管放入℃的冰箱中保藏。

（2） 在筛选纤维素分解菌的过程中，常用的方法是。但这只是分离纯化的第—步，为了确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行的实验。

（3） 对亚硝酸盐含量测定的原理是：亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与结合形成色染料。测定亚硝酸盐含量的操作流程是：配置溶液→制备→制备样品处理液→比色。其中，使滤液变得无色澄清透明的是。

（1） 某些微生物能分解纤维素，因为他们能产生纤维素酶，纤维素酶是种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成。

（2） 实验室中筛选微生物的原理是。若要测定培养液中选定菌种的菌体数可选用法统计活菌数目。

（3） 用刚果红染色法对分离出的微生物进行筛选，刚果红可以与纤维素形成，当纤维素被纤维素酶分解后，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的。从培养基的用途上分类，刚果红培养基属于培养基。

（1） 常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是（填编号）。

编号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	培养皿	涂布器
灭菌方法	高压蒸汽	火焰灼烧	干热	臭氧

（2） 称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1 mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌个。

（3） 为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。

（4） 在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如下图。据图分析，应选择菌株进行后续相关研究，理由是。

（1） 取新鲜牛粪样品10g，加入装有90 mL无菌水的锥形瓶中，将锥形瓶固定在上，在37℃下振荡培养2～3d，进行选择培养。选择培养的目的是。

（2） 吸取锥形瓶中的培养液1 mL，加入盛有mL无菌水的试管中混匀进行稀释，依次稀释到10⁸倍稀释度。取不超过mL的10⁵、10⁶、10⁷倍稀释度的稀释液分别涂布于羧甲基纤维素钠培养基上，于37℃恒温培养箱中培养24h。

（3） 用接种环挑取颜色、形态不一的单菌落，使用法接种到羧甲基纤维素钠培养基上继续培养，重复2～3次，直至得到较纯的菌株。再挑选单菌落于增菌培养基中培养24h，吸取2µL点种到羧甲基纤维素钠平板中培养48h后，将培养基用溶液覆盖，10min后，倒去该溶液，再加入NaCl溶液，15 min后倒去NaCl溶液，测定透明圈的直径（H）和菌落直径（C），若数值大，则说明菌体增殖速率快，若比值大，则说明菌体分解纤维素的能力强。

（4） 对筛选出的菌株还要进行鉴定和酶活力测定，1个酶活力单位是指在温度为25℃，其他条件均为最适的情况下，。

（1） 为获得能分解易腐垃圾的微生物，应从的环境中处去寻找。

（2） 从化学组成上看，厨余垃圾的主要成分包括纤维素、 淀粉、脂肪和蛋白质等。为了筛选能同时降解这四种成分的微生物，某兴趣小组提供了如下实验思路：首先，将微生物样品接种在以纤维素为唯一碳源的培养基上，多次接种培养筛选出纤维素分解菌；其次， ，筛选出能同时降解纤维素和淀粉的菌种；以此类推，最后筛选获得能同时降解四种成分的

微生物（假设为菌种A）。

  ①  从功能上划分，该兴趣小组使用的培养基应属于培养基。

  ②  在筛选纤维素分解菌的过程中，需要在培养基中加入刚果红染料，以便能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选，该方法中刚果红能与培养基中的纤维素形成 。在筛选纤维素分解菌时，科研人员通过观察产生透明圈的菌落认为该土壤中存在多种纤维素分解菌，

其依据是。为了进一步确定得到的是纤维素分解菌，还要进行的实验。

（3） 若要利用（2）中筛选的菌A就近就地处理厨余垃圾，在确定处理厨余垃圾的方案时，通常需要考虑的因素有（至少答2点）。