微生物的分离和培养 知识点题库

（1） 某兴趣小组欲检测某果汁类食品中含有葡萄球菌，请帮他们完善下列步骤．

①配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨．NaCl、琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后调节PH，分装到锥形瓶后进行 ， 在无菌状态下加入卵黄液（100mL10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀）摇匀后立即倒平板．

②接种：取待检测果汁2.5ml加入22.5mL灭菌生理盐水中，制成接种样液．

实验组：将接种样液用法接种在含卵黄的固体培养基上．

对照组：将用划线法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作为对照．

将上述接种后的培养皿同时放在36℃的恒温箱中培养48h．

③观察：观察培养基表面 ．

（2） 培养基中的牛肉膏和蛋白胨为葡萄球菌生长和繁殖提供 ．

葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl溶液，所以在配制培养基时加入高浓度的NaCl溶液可以将它分离出来，此培养基属于培养基．

（3） 若要统计某土壤样品中该活菌数目，宜采用法．

（1） 家庭酿制葡糖酒所用的微生物主要是；家庭腌制泡菜的过程中，用水封坛的作用是．

（2） 实验室中配置的培养基在使用前需用法进行灭菌；在配置筛选耐盐细菌的选择培养基时，除加入基本营养物质外还需加入．

（3） 某兴趣小组调查某品牌1g牛奶中细菌数量时，若统计出在稀释倍数为10³的实验组的平板上平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0.2ml，则每克牛奶样品中的菌落数为．若空白对照组的一个平板上出现了7个菌落，这种结果说明在此实验中出现了现象；为获取可靠实验数据，需．

（1） 为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是．制备的培养基常用法进行灭菌．

K2HPO4	MgSO4	NaNO3	FeSO4		琼脂
0.1g	0.5g	3g	0.01g	2g	15g	加至1L

（2） 科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液．为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行，用法接种于固体培养基上．接种后的培养基状态放人培养箱．

（3） 选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落直径的比值，筛选果胶酶高产菌株．

（4） 将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的（填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将与等量果胶溶液混合，作为实验的对照．

（1） 过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要经过灭菌处理的是。与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行。

（2） 待测水样过滤完之后，还有部分细菌吸附在滤杯杯壁上，将这部分细菌也尽可能集中到滤膜上的操作为。

（3） 将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的操作。从功能上看，EMB培养基属于培养基。

（4） 无菌操作下将90mL无菌水加入到10mL待测水样中，这样就将待测水样稀释了倍，将稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数为45，黑色菌落为5，则1升待测水样中的大肠杆菌数目为个。

（5） 若要测定待测水样中酵母菌的数目，应更换上述过滤装置中的滤膜，选择孔径(填“更大”或“更小”)的滤膜。

（1） 为确保从样品中成功分离出酵母菌菌株,常常取10克土壤样品加入盛有mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀；测定酵母菌数量时,一般先选用倍稀释，再进行的接种操作。

（2） 为了筛选出高产果酒的酵母菌菌株，需配制以葡萄糖为唯一碳源的培养基，从功能上看，此培养基为培养基。通过向菌落上滴加酸性重铬酸钾溶液，选取色深的菌落，就可获得酒精产量高的菌株。从微生物培养的角度分析，苹果汁能够为酵母菌的生长提供水、无机盐、。在酒精发酵旺盛时，醋酸菌（填“能”或“不能”）将果汁中的糖发酵成醋酸。在酿制果酒的过程中，要每隔12小吋左右将瓶盖拧松一次，而不是完全打开，其目的是。

（1） 在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是（填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO₃”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是。硝化细菌在没有碳源的培养基上（填“能够”或“不能”）生长，原因是。

（2） 用平板培养细菌时一般需要将平板（填“倒置”或“正置”）。

（3） 单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是。

（4） 有些使用后的培养基在丢弃前需要经过处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。

（1） 为了提高处理效率，必须进行微生物的纯化，试举出两种常用的微生物分离技术、。

（2） 在微生物分解有机物的过程中，固体物质变成可溶于水的物质在体外进行，该反应能在微生物体外进行的关键是微生物向环境中。

（3） 固定化微生物技术是将微生物固定在上，这些微生物在适宜条件下可以，在保持生物功能的同时使细胞密度增加。在固定化细胞技术中，包埋法技术成本低，操作更容易，但存在的缺点。包埋法常用的包埋材料有（写出两种即可）。

（1） 筛选产乳糖酶的微生物L时，培养基中的唯一碳源应该是，在实验室培养微生物L时，一方面需要为L提供合适的营养和环境条件，另一方面需要，以获得纯净的培养物。

（2） 将微生物L研磨破碎得到提取液后，可采用凝胶色谱法分离纯化其中的乳糖酶分离过程中，比乳糖酶相对分子质量小的蛋白质，在凝胶中的移动速度比乳糖酶（填“快”或“慢”），原因是。

（3） 工业生产中，若要将乳糖酶固定化，一般（填“适宜”或“不适宜”）采用包埋法原因是，与使用游离酶相比，工业生产中使用固定化酶的优点是。

（1） 配制的培养基一般都含有水、无机盐、。常采用法对培养基进行灭菌，灭菌前需将pH调至。

（2） 为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板（填正置或倒置）。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用法接种。接种时，实验操作应在酒精灯火焰附近进行的原因是。

（3） 将1m L西瓜浸出液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1m L稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为26、28和27。据此可得出每升西瓜浸出液中的活菌数为，这种方法的统计结果比活菌的实际数目。

（1） 图1所示操作后,待培养基冷却凝固,然后,防止。 

（2） 图2所示接种方法是。在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液,经适当培养后,3个平板上菌落数分别是38、42、40个,则1 g土壤中的活菌数约为个。 

（3） 固体培养基中难溶性磷酸盐在菌株Q的作用下溶解,会在菌落周围形成透明圈(如图),透明圈直径(D)与菌落直径(d)的比值(D/d)代表微生物溶解难溶性磷酸盐的能力大小。下表是初步筛选出的三种优良解磷菌株。

菌　株	透明直径(D)	菌落直径(d)
M-3-01	18.8	12.3
B3-5-6	20.7	8.0
T-4-01	9.1	6.5

根据实验结果分析,溶解难溶性磷酸盐能力最强的菌株是。 

（1） 从厨余垃圾中分离纯化能高效降解垃圾的菌株时，应该选用 （填“固体”或“液体”）培养基，理由是。

（2） 对分离出的菌株进行临时保藏，应该接种到（填“斜面”或“平板”）培养基上，在合适温度下培养，当菌落长成后在（填“-20℃”或“4℃”或“37℃”）的温度下保存。

（3） 纤维素是厨余垃圾中占比较多的一种成分，纤维素分解菌能产生纤维素酶。科研工作者从纤维素分解菌中提取出纤维素酶后，采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对提取的纤维素酶进行纯度鉴定，鉴定时在凝胶中加入SDS一方面能使蛋白质完全变性，另一方面可消除蛋白质分子自身所带电荷对迁移速率的影响，其原因是，因而掩盖了不同种蛋白质所带电荷量的差别，使电泳迁移率完全取决于蛋白质分子质量的大小。电泳完成后，凝胶中的条带数越 填“多”或“少”），则表示提取液中纤维素酶的纯度越高。

（4） 纤维素酶是一种酶，广泛存在于土壤中的细菌、真菌和某些动物等生物体中；因此，卫生纸类垃圾可采用（选填“卫生填埋”“垃圾焚烧”或“堆肥”）方式，有效减少对环境的污染。

（1） MRS固体培养基因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产酸后会溶解碳酸钙，从而在培养基上形成，可用于鉴定乳酸菌。实验室培养乳酸菌需要控制的特殊条件是。

（2） 筛选乳酸菌菌株时，将泡菜液进行后再涂布到 MRS 培养基上，这样做的目的是。

（3） 筛选得到不同的乳酸菌菌株后，为了比较乳酸菌产谷氨酸脱氢酶的能力，应将乳酸菌接种到含有的培养液中，培养相同时间后检测。

（1） 实验室培养大肠杆菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，该培养基中牛肉膏的作用是，倒好培养基的平板需要倒过来放置，原因是。

（2） 严格进行无菌操作是大肠杆菌培养与检测的关键，对接种环等常用灭菌法进行灭菌，培养基及多种器材用灭菌法灭菌。

（3） 实验室常用法对待测样品中的大肠杆菌进行接种和计数，大肠杆菌的代谢产物能与反应，使菌落呈现黑色，据此可鉴别大肠杆菌菌落。

（4） 对于经常使用的菌种可采用接种临时保存，该保存方法的优点是操作简单、使用方便，不足之处是。