第二节 获取纯净的微生物培养物 知识点题库

（1） 霍乱弧菌能穿透粘液层（分布于小肠黏膜细胞表面）通常借助于__________。

（2） 用含硫代硫酸钠、柠檬酸钠、胆酸钠、蔗糖的TCBS培养基（pH8.6）能从天然样品中有效地分离出霍乱弧菌。这种TCBS培养基属于______

（3） 研究显示、霍乱肠毒素为蛋白质，其编码基因位于CTX噬菌体基因组中．无毒型霍乱弧菌经CTX噬菌体感染后，会转变为产毒素的菌株，且其子代细菌即便在无噬菌体感染的条件下，同样能稳定维持其产毒素特性。造成霍乱弧菌这一特点的机制可能是______。

（4） 不食不洁生水和生贝壳类海产品是防止霍乱发生措施之一，这属于传染病预防措施中的 。

（5） 下列各图中，能准确反映霍乱弧菌疫苗接种者血清中抗霍乱弧菌抗体的浓度随时间变化趋势的是_____。

（1） 在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是 ． 若培养基需调节pH，则应在灭菌之（填“前”或“后”）调节．

（2） 为防止外来杂菌入侵，对等可采用干热灭菌法进行灭菌．

（3） 如图为平板划线法接种后的示意图．在划线接种的整个操作过程中，对接种环至少需进行次灼烧灭菌．接种后盖上皿盖，将平板放入恒温箱中培养，这样放置的目的是 ．

（4） 用稀释涂布平板法统计活菌数目时，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取作为结果，这样可以防止因培养时间不足而遗漏菌落的数目．

（1） 由题意可知，除用选择培养基外，还有操作起到筛选作用．

（2） 上图的划线操作中，培养基从物质状态分类上属于，接种环用法进行灭菌，划线过程中第一区和最后一区的划线（能/不能）相连．

（3） 用稀释涂布平板法在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁴的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为13.160，532，175和187．每毫升样品中的细菌数量为个．

（4） 用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目，原因是．

（1） 富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加．培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上，其目的是．

（2） 进行分离、纯化培养时，要先将培养基倒入培养皿中，制成平板．此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，其中添加了一定量的．倒平板时，要待高压灭菌后的培养基，再在附近操作．平板冷凝后，需置于恒温箱中1﹣2天后再用于接种，目的是．

（3） 分离纯化培养后，得到8种形态特征有所不同的单菌落．经染色鉴定，其中3种能产生PHB．那么如何进一步筛选出高产PHB的菌种呢？请说出你的实验思路．．

（1） 在调查和分离湖水中耐盐细菌的实验中先将10升湖水水样浓缩至10毫升，然后各取浓缩水样1毫升，涂布到多个培养皿中培养。请回答：

①可以通过提高培养基中的浓度，筛选被调查细菌，这种培养基被称为培养基。

②要提高实验结果的可靠性，排除培养基未彻底灭菌的可能性，应该设置的对照组是。为检验(1)中筛选方法的效果。

③在微生物的培养过程中，实验室对培养基灭菌常用的方法是。为防止冷凝水影响细菌的生长需将培养皿培养。

 ④根据培养皿上菌落的平均数，可以计算湖水中该种细菌的密度，但计算的数据要比实际活菌的数目少，原因是。

（2） 生物技术已经渗入到了我们生活的方方面面，比如：

①目前临床用的胰岛素生效较慢，科学家将胰岛素B链的第28和29个氨基酸调换顺序，成功获得了速效胰岛素。生产速效胰岛素时需要对(胰岛素/胰岛素mRNA/胰岛素基因/胰岛)进行定向改造。

 ②科学家利用人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，制作出了早早孕试纸。要获得人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，需要先将注射到小鼠体内，培养一段时间之后，将从小鼠脾脏中提取出的和小鼠的骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞。

③许多不孕不育的夫妇受益于试管婴儿技术，在体外受精前，要对采集到的精子进行处理，才能与卵子受精。受精后形成的受精卵要移入培养液中继续培养一段时间，再移植到母亲体内，早期胚胎发育到阶段的某一时刻，会冲破透明带，称之为“孵化”。

④生态工程是实现循环经济最重要的手段之一。在进行林业工程建设时，一方面要号召农民种树，保护环境。另一方面要考虑贫困地区农民的生活问题，如粮食、烧柴以及收入等问题，其主要体现的生态工程的基本原理是(只填一个)。

（1） 回答与制作果酒和果醋有关的问题

①欲纯化野生酵母，最简单的分离方法是，若用果汁酿造果酒，可在果汁中加入果胶酶和果胶甲酯酶将果胶分解成，从而提高果汁的出汁率。影响果酒风味的主要因素，除了温度、pH、氧气等环境因素外，还有（答出2点即可）。

②在果醋发酵过程中，可将醋化杆菌培养物和适量的酒一一水混合物（果酒和蒸馏水按比例混合）混匀后，调pH至再与的锯末等吸附物混匀，进行发酵。

③下列有关果酒和果酷制作过程中，叙述正确的是。

A.若利用果酒进行果醋发酵，需将气体出口开放以排除发酵产生的CO₂

B.果酒和果醋发酵过程中，充气口处均需通入无菌空气

C.在使用高产醋化醋杆菌生产果醋时，可以直接加入果汁

D.若果酒发酵结束后进行果醋发酵，需升高发温度

（2） 回答与基因工程和克隆技术有关的问题：

①目前将目的基因导入植物细胞常用的方法是土壤农杆菌转化法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，转移到受体细胞，并将其插人到受体细胞基因组中。若受体细胞是叶肉细胞，则再通过技术获得转基因植株。

②为解决人类治疗时出现如被人体免疫系统识别而产生人抗鼠抗体等问题，科学家们通过构建人免疫蛋白（Ig）转基因小鼠来生产单克隆抗体。构建人免疫蛋白转基因小鼠时，选择自身g基因缺陷的小鼠的受精卵作为受体细胞，导入重组载体，将经筛选好的受体细胞进行培养，，经代孕母鼠分娩后培育、筛选获得人免疫蛋白（g）转基因小鼠。为了获得更多这样的转基因小鼠，采用技术，该技术用显微操作去掉卵细胞的；制备单克降抗体时，用的方法筛选能够产生特定抗体的杂交细胞。

（1） 用培养基培养微生物时，除考虑各种营养条件外，还要考虑和渗透压等条件（至少写两个），并进行灭菌。

（2） 纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。从物理状态来看，应属于培养基。

（3） 将接种后的平板置于培养箱中培养时需倒置,原因是。

（4） 在对酵母菌的扩大培养过程中，为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经台盼蓝染液（体积忽略不计）染色，用25×16型血细胞计数板（体积为0.1mm³）计数5个中格中的细胞数，理论上色细胞的个数应不少于，才能达到每毫升4×10⁹个活细胞的预期密度。

（1） 为从胃炎患者的胃粘膜提取稀释液中分离得到幽门螺旋菌，应将稀释液样品接种在以为唯一氮源的（填“固体”或“液体”）培养基上，以法接种后置于培养箱中培养。

（2） 如欲检测是否存在幽门螺旋菌，可向培养基中添加，在培养过程中如出现红色环带的菌落，表明该菌落为幽门螺旋菌菌落。

（3） 现将上述实验分离得到的幽门螺旋菌进行扩大培养，采用布式肉汤基础培养液进行培养，培养液中需加入用紫外线处理1小时的6%马血清和混合抗生素（包括万古霉素、两性霉素B等）。使用混合抗生素的目的是，选择紫外线而不用高压蒸汽灭菌的方法处理马血清的原因是。

（4） 若利用活菌计数法统计幽门螺旋菌的数量，计得的微生物数量往往比实际数，原因是。

（1） 要从土壤中分离目标菌，所用培养基应以为唯一碳源除此之外，培养基上还应提供的基本营养物质有 (答出3种)等，此培养基称作 (填用途)培养基。

（2） 要想将土壤稀释液均匀地涂在平板上，应该使用法进行接种。

（3） 在从土壤中分离目标菌时，发现培养基上三种细菌都能生长并形成菌落(如上图)。细菌III没有产生透明圈的原因可能是 。如果要得到分解淀粉能力最强的目标菌，应选择细菌 (填“ I”“II”或“III")的菌落进一步纯化 ，选择的依据是

（1） 造纸厂排放的污水中含大量木质素，某些真菌能分泌漆酶，催化木质素的降解。研究人员从不同环境地表上采集土壤接种到含有木质素及必需无机盐的培养基中，经过如下图所示的分离纯化过程，最终筛选出了高产漆酶的白腐真菌。请回答下列问题:

Ⅰ.将土壤样品接种到含有木质素及必需无机盐的培养基中振荡培养若干天的目的是。培养若干天后，应选择培养瓶中木质素含量的培养液，接入新的培养液中连续培养。

Ⅱ.在固体培养基上分离纯化目的菌时，若需统计菌落种类和数量，要每隔一定时间观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止培养时间不足导致，或培养时间太长导致。

Ⅲ.分离得到的菌种在液体培养基中大量增殖，对培养液离心，从（上清液/沉淀）中收集漆酶。

Ⅳ.游离的漆酶稳定性差，在环境中易受温度、pH等因素的影响，在工业化应用时，可采用技术来解决这一问题。将用海藻酸钠包埋处理的漆酶装载成反应柱，处理污水时发现，在污水一次流经反应柱后，木质素含量还是高于标准。在不增加柱高，保证适宜的温度、pH前提下，还可以改进生产的措施是。

（2） 干扰素是机体感染病毒时，宿主细胞产生的一类糖蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤等作用，科学家通过多种生物工程技术生产干扰素。

利用乳腺生物反应器生产干扰素

Ⅰ.把成熟的精子放入一定浓度的肝素溶液中，诱导其，再与卵母细胞融合形成受精卵。图中③过程最常用的技术是。

Ⅱ.在进行过程⑤之前，需对早期胚胎进行筛选和鉴定，科研人员取囊胚的细胞，利用探针分别进行了两组鉴定:利用基因制备的探针进行分子杂交，检测目的基因是否成功导入；利用SRY基因（位于Y染色体上）探针进行检测，将检测反应呈（填“阳”或“阴”）性的胚胎进行移植。

Ⅲ.利用家蚕细胞生产干扰素

将干扰素基因导入培养的家蚕细胞时，需要载体协助，而载体一般不选择（填“噬菌体”或“昆虫病毒”），原因是。

Ⅳ.在培养家蚕细胞时通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，增大细胞贴壁生长的附着面积，避免细胞之间，从而增加培养的细胞数量。

（1） 为筛选和测定大熊猫新鲜粪便中的纤维素分解菌活菌，将1g大熊猫新鲜粪便样品用稀释10⁵倍后接种至培养基上培养，该培养基为（按功能分），该接种方法是。 若观察到五个培养基上分别形成48、15、51、9和52个菌落，则1g大熊猫新鲜粪便中的纤维素分解活菌数是。筛选到的目的菌接种液体培养基中，在摇床上控制转速和实现扩大培养。

（2） 利用玉米秸秆生产燃料酒精的大致流程为：

发酵阶段需要的菌种是。在生产酒精时，要控制的必要条件是。