第三章基因工程知识点题库

限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。下列有关说法错误的是（）

A . 在相同的DNA分子中a酶的识别位点一般明显要比b酶多 B . 能被a酶识别并切割的序列也能被b切割 C . a酶与b酶切断的化学键相同 D . 将大量a酶和b酶切割后的片段混合，重新连接后的DNA片段不一定全都能被b切割

两个具有相同黏性末端的DNA片段，在条件适宜时，经酶的作用合成一个重组DNA分子．该酶是（）

A . DNA聚合酶 B . RNA聚合酶 C . DNA连接酶 D . 限制性内切酶

有关基因工程的叙述正确的是（）

A . 限制酶只在获得目的基因时才用 B . 重组质粒的形成是在细胞内完成的 C . 质粒都可作为运载体 D . DNA连接酶使黏性末端之间形成磷酸二酯键

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制性核酸内切酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^t为抗氨苄青霉素基因），其中①∽④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：

（1）在构建重组DNA时，可用一种或多种限制性核酸内切酶进行切割，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实验中应该选用限制性核酸内切酶分别对、进行切割，切割后产生的DNA片段分别为、种．
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使I重组DNA中含有作为标记基因．
（3）研究人员通常采用法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内．

萝卜贮藏根组织细胞中是否存在蛋白质和DNA？某生物小组对此进行研究，他们从网上查阅资料得知：①蛋白质在10%NaCl溶液中可沉淀析出；②在蛋白质溶液中，加入双缩脲试剂，溶液呈现特有的颜色；③DNA溶于10%NaCl溶液但在95%酒精中呈白色絮状沉淀，析出．

实验材料：白萝卜．

实验用具：粉碎机、烧杯、漏斗、试管、滤纸、玻棒、镊子、载玻片、天平、纱布．

药品及试剂：蒸馏水、NaCl、95%酒精、甲基绿染液（遇DNA呈蓝绿色）、双缩脲试剂、蛋白质标准样品．

请你根据所提供的条件参与实验设计并完成实验．

（1）材料处理：称取50g 冼净切块，加水30mL，粉碎机粉碎，将匀浆经纱布过滤．
（2）提取：
①向经纱布过滤得到的滤液中加入，直至沉淀析出．经滤纸过滤，将滤纸上的沉淀物放入试管中，加入1mL蒸馏水，振荡，用于鉴定．
②除去蛋白质的滤液中，加入，用玻棒轻轻搅拌，见有白色絮状沉淀产生，经滤纸过滤，用镊子将滤纸上的絮状沉淀置于载玻片，用于鉴定．
（3）鉴定及结果：
①在用于蛋白质鉴定的试验试管中，加入双缩脲试剂，产生呈色反应，同时将和1mL蒸馏水放入另一试管，加入双缩脲试剂产生呈色反应．观察到两试管中颜色基本一致，说明．
②在用于DNA鉴定的载玻片上，滴加甲基绿染液，白色絮状沉淀呈现蓝绿色，说明．
③通过对白萝卜贮藏根匀浆液的检测，说明．
（4）讨论：
①蛋白质在萝卜贮藏根组织细胞中所起的作用是．
②DNA主要来自萝卜贮藏根组织细胞的．

重组人血小板生成素（rhTPO)是一种新发现的造血生长因子，如图为通过乳腺生物发生器产生rhTPO的相关过程。请回答下列问题。

（1）构建重组质粒时选用的限制酶是，原因是。重组质粒中的标记基因是，标记基因的作用是。
（2）通常采用技术将重组质粒导入受精卵，图中所示的过程与胚胎工程相关的有(至少写出两个）。
（3）若检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，检测方法是技术，其次还需检测目的基因，这是检测目的基因是否发挥作用的第一步，最后检测目的基因是否翻译成蛋白质。

请回答基因工程方面的有关问题：

（1）利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物中为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占比例为。
②在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，第四轮出现了个等长的DNA片段。
（2）设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如上图），请分别说明理由。
第一组：；
第二组：。
（3）用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点，并标注片段的长度。

将耐高温淀粉酶(Amy)基因a与载体结合后导入马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。下列叙述不正确的是（）

A . 获取基因a的限制酶的作用部位是图中的① B . 连接基因a与载体的DNA连接酶的作用部位是图中的② C . 基因a进入马铃薯细胞后，经复制可传给子代细胞 D . 通过该技术人类实现了定向改造马铃薯的遗传性状

家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。下列说法不正确的是( )

A . 家蚕细胞培养所需二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH B . 来自cDNA文库的干扰素基因片段必须插入表达载体的启动子和终止子之间 C . 采用PCR技术扩增干扰素基因的实验中是以干扰素基因为模板 D . 进行转基因操作前，需用纤维素酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞

在DNA粗提取实验中，实验前制备鸡血细胞液时，用吸管除去离心管或沉淀后的试管上层液体的主要原因是上清液（）

A . 不含DNA但含较多蛋白质 B . 含有大量血细胞 C . 上清液的存在不利于细胞的破裂 D . 上清液中有色素影响实验结果

基因工程又称为DNA重组技术，回答相关问题：

（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即和从生物材料中分离；分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是。
（2）在基因表达载体中，启动子是聚合酶识别并结合的部位；若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是；假设某种转基因作物因为受到病毒感染而减产，若要以该转基因作物为材料获得脱毒苗，应选用作为外植体进行组织培养。
（3）利用某植物的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是。

抗虫棉的培育、单克隆抗体的制备、胚胎分割技术依次所属的生物工程技术为（）

A . 基因工程、细胞工程、基因工程 B . 细胞工程、胚胎工程、细胞工程 C . 基因工程、细胞工程、胚胎工程 D . 细胞工程、基因工程、胚胎工程

从某高等动物浆细胞(L)中提取全部的mRNA，并以此为模板合成相应的DNA单链(L-cDNA)，提取来自同一个体的胰岛B细胞(P)的全部mRNA(P-mRNA)。下列叙述错误的是（）

A . P-mRNA与L-cDNA进行分子杂交，均能发生碱基互补配对 B . 限制酶能特异性识别DNA分子的某种特定核苷酸序列，破坏磷酸二酯键 C . 能与L-cDNA互补的P-mRNA中含有编码呼吸酶的mRNA D . 浆细胞不能分泌胰岛素是因为缺乏编码胰岛素的相关基因

以下是几种不同限制性核酸内切酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列的叙述中，错误的是（）

图片_x0020_1233121277

A . 以上DNA片段是由5种限制酶切割后产生的 B . 若要把相应片段连接起来，应选用DNA连接酶 C . 上述能进行连接的两个片段，其连接后形成的DNA分子是

D . 限制酶和DNA连接酶作用的部位都是碟酸二酯键

猪瘟是由于猪瘟病毒与猪细胞膜上的LamR受体蛋白M位点的氨基酸结合，继而侵入细胞引起的。利用基因编辑技术改变LamR基因，使该受体蛋白不能与猪瘟病毒结合，但生理功能正常，从而培育抗猪瘟病毒猪。该技术主要由Cas9蛋白与向导RNA的复合物共同完成（如图1所示），其中向导RNA可识别LamR基因中的特定序列。图2是利用生物工程技术的培育流程。

（1）据图1推测，Cas9蛋白与向导RNA的复合物功能类似于酶；图1中还需用到的酶有。
（2）图1中LamR基因被切断后，重新连接前，会切掉或增加几个碱基对，此过程导致的变异属于。改造前后的两种LamR基因之间的关系是（等位基因/非等位基因/互相连锁）。
（3）图2中的成纤维细胞经基因编辑后需进行筛选，筛选出的细胞

A . 正常生理功能未受影响 B . LamR基因的碱基序列未改变 C . LamR受体蛋白M位点的氨基酸改变 D . 抑制猪瘟病毒侵入的能力增强
（4）图2的1-4号猪中，具有抗猪瘟能力的是号。图2培育流程中除基因编辑技术外，还运用了
A.细胞核移植技术 B.动物细胞培养技术

C.动物细胞融合技术 D.干细胞技术

大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。图表示转基因操作过程。下列有关叙述错误的是（）

图片_x0020_100008

A . 应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养 B . 若大肠杆菌的菌落为蓝色，则导入的是普通质粒 C . 作为受体的大肠杆菌应含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选 D . 选择培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素

蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过 (基因修饰/染色体变异)或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造种新的 (蛋白质/氨基酸)，以满足人类的生产和生活的需求。

“筛选”是生物工程中常用的技术手段，下列关于筛选的叙述错误的是（）

A . 基因工程中一般通过标记基因进行筛选 B . 在诱变育种中需通过筛选才能得到数量较少的有利变异 C . 植物体细胞杂交过程中，原生质体融合后不需要筛选就能获得所需杂种细胞 D . 设计试管婴儿过程中，植入前需通过遗传学诊断对胚胎进行筛选

[生物—选修3：现代科技专题]

水熊抗辐射能力是人类的千倍之多。研究发现水熊体内含有抗辐射基因Dsup，指导合成的Dsup蛋白可将X射线引起的DNA损害降低大约40%。研究者将Dsup基因转入模型动物细胞，以研究动物具有的抗辐射能力的机理。请回答下列问题：

（1）若要获得Dsup基因，可以用从水熊体细胞中提取的作为模板，在的催化下
合成cDNA，再利用PCR技术，专一性地扩增出Dsup基因的cDNA，PCR反应体系的成分中能够决定扩增特定 DNA片段的是（填“模板”、“引物”、“Taq酶”）。
（2）构建基因表达载体的目的是。基因表达载体进入受体细胞，并在细胞内维持稳定表达的过程称为。
（3）目的基因导入受体细胞常用质粒做运载体。下图1表示质粒载体，图2表示插入了Dsup基因的重组质粒，可利用标记基因从细胞水平初步检测目的基因是否导入受体细胞，根据图中信息写出检测思路。

某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合表达蛋白M和tag标签的质粒，请结合实验流程回答下列问题：

（1）目的基因的扩增
①提取真菌细胞，经逆转录获得cDNA，进一步获得基因m片段。

②为了获得融合tag标签的蛋白M，设计引物P2时，不能包含基因m终止密码子的编码序列，否则将导致。

③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有

A．Taq酶最适催化温度范围为50～60℃

B．与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物

C．两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸

D．PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性
（2）重组质粒的构建
①将Sma I切开的载体A与添加同源序列的m混合，用特定DNA酶处理形成黏性末端，然后降温以促进，形成A-m结合体。将A-m结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA聚合酶及酶等，完成质粒的环化。

②若正确构建的重组质粒A—m仍能被Sma I切开，则Sma I的酶切位点可能在。
（3）融合蛋白的表达
①用含有尿嘧啶的培养基培养URA3基因缺失型酵母，将其作为受体菌，导入质粒A-m，然后涂布于无尿嘧啶的培养基上，筛选获得目的菌株，其机理是。

②若通过抗原一抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含lag标签，说明，后续实验可借助tag标签进行蛋白M的分离纯化。

第三章 基因工程 知识点题库

第三章基因工程知识点题库