动物细胞培养技术 知识点题库

（1） 实验步骤：

a．取洁净的培养皿一个，加入适量培养液，从小鼠肝部切取肿瘤组织，剪碎，并用胰蛋白酶处理，使其分散开来，置于培养皿中培养；

b．取洁净的试管5支，加人等量培养液，编号1，2，3，4，5，并在1﹣4号试管中加入等量的不同液度的二氯二乙胺溶液，5号试管中加入 ；

c．从培养皿中吸取等量的培养液置于1﹣5号试管中，振荡后，在适宜条件下培养一段时间；

d．从静置的5支试管中吸取适量的培养液置于血球计数板上，在显微镜下计数，记录数据．

实验分析，

①该实验的实验组是号试管．上述实验步骤d中测量到的数据是否准确，请判断并作出解释 ．

②另有同学按照正确的方法进行实验，得到如图结果：

根据以上实验结果，你能得出的结论有：二氯二乙胺能抑制癌细胞增殖，且在一定范围内，随二氯二乙胺浓度的增大，抑制作用  ．

（1） 在进行细胞培养时，要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分散处理，形成单个细胞，这个过程中需要利用酶处理。

（2） 用于核移植的供体细胞，一般都选用传代10代以内的细胞，原因是。

（3） 在进行原代培养时，细胞增殖的方式是，此外，细胞增殖还表现出和接触抑制等特点。

（4） 将进行培养的供体细胞注入去核的卵母细胞中，去除卵母细胞细胞核的目的是。

（5） 将重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛后，该母牛就会生出与供体奶牛遗传物质相同的犊牛，但也不是100%的复制，原因最可能是。

（6） 上述动物细胞工程中涉及的技术有。转基因奶牛的克隆成功，说明了动物具有全能性。

（1） 将蛛丝蛋白基因和载体通过甲过程形成的X为，该过程通常用相同的限制酶进行切割，原因是。

（2） 为了获得蛛丝蛋白，图中的受体细胞应该选择羊（填性别）的ES细胞，这是因为ES细胞在功能上具有。

（3） 受体细胞在体外培养时，采用的培养基是（固体、液体）培养基，并在培养环境中的空气必须加5%CO₂ ， 目的是。

（4） 转基因山羊的性状出能产生蛛丝蛋白外，与提供ES细胞的个体不完全相同的原因有。（答出两点即可）

（1） 制备单克隆抗体常用的动物细胞工程技术有和。

（2） 过程A是指将(填“抗原”或“抗体”)类物质注入小鼠体内，一段时间后，取小鼠的脾脏组织，剪碎后用处理使其分散成单个细胞，以获得相应的细胞；图中细胞B一般选用细胞。

（3） 如果仅考虑两两融合的细胞，则最多可形成种类型的细胞C，需用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞；再对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的细胞D，该种细胞的特点是。

（4） 杂交瘤细胞的体外培养时，在5%培养箱中培养，为防止培养过程中的污染，培养基中需要加入适量的。

（5） 与传统方法生成的抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是。

（1） 获取let-7基因后，进行基因扩增应采用技术，该技术依据的原理是。在操作步骤中需要加热至90～95℃使，然后降温至55～60℃，使。

（2） 在进行肺癌细胞培养时，对培养液要进行无菌处理，通常还添加一定量的，以防止培养过程中的杂菌污染；使用合成培养基时，通常加入等一些天然成分。

（3） 根据图示分析，可从细胞中提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中（填“RASmRNA”或“RAS蛋白”）含量减少引起的。

（1） 完成实验思路：

①。

②取培养瓶4个，编号为A、B、C、D，。

③ ，在D培养瓶中加入等量的生理盐水。

④在各培养瓶中加入适量且等量小鼠肝癌细胞悬液，摇匀，在二氧化碳培养箱中培养，计时。

⑤分别在培养24、48、72小时时，。

⑥对获得的数据进行统计分析处理。

（2） 设计一张表格，用于记录各组细胞存活数。

（3） 本实验的可变因素是；如果用细胞的存活率作为衡量药物X的作用效率，利用实验组和对照组的数据，细胞存活率可表示为（数学表达式）；假设实验的结果表明，一定浓度的药物X对肝癌细胞体外培养有抑制作用，推测药物X起作用的原因可能是。

（1） 新冠病澎是RNA病毒，在提取新冠病毒的RNA后，可在酶的作用下，合成一段DNA分子。以新冠病毒的RNA为模板合成的DNA分子中含有编码新冠病澎表面刺突蛋白(简称为“S蛋白”)的S基因，可用特定的酶将该基因从DNA分子上切割下来。

（2） 用与切割S基因相同的酶切割腺病毒的DNA，以便获得，然后可用酶将两者“缝合”在一起形成一个重组DNA分子。将重组DNA分子与腺病毒蛋白质外壳重组形成重组病毒，重组病毒感染人体细胞后可使人体细胞合成S蛋白，重组病毒感染人体细胞的过程相当于基因工程的过程。 

（3） 图中生产腺病毒载体疫苗的扩增细胞源自人胚胎的肾细胞，请写出该细胞原代培养的主要实验步骤。

（4） 科学家采用了非复制型腺病毒作为S基因的载体，你认为科学家选它的理由有、等(写出2点)。

 

（1） Vero细胞培养的原理是，培养应在培养箱中进行，箱内的气体环境条件为。

（2） Vero细胞的传代培养过程中需要使用使细胞分散，并在合成培养基中加入等天然成分。此外，在培养过程中，应定期更换培养液，目的是。

（3） 灭活疫苗制备成功之后先进行动物试验，一段时间后检测试验动物是否产生抗体，检测的方法是。

（4） 某科研团队想利用可增殖的Vero细胞系制备新冠病毒的单克隆抗体用于诊断试剂，请写出相关的实验思路。

（1） 容器A中放置的是动物器官或组织，它一般取自动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，原因是。

（2） 容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用胰蛋白酶处理，可以使细胞分散开。以上两步处理的目的是在B瓶中培养时。

（3） B瓶中的培养基成分有葡萄糖、氨基酸、无机盐、动物血清、等。在此瓶中培养一段时间后，当细胞贴壁分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的。贴满瓶壁的细胞经过处理后，让细胞继续增殖培养的过程通常称为。

（4） 细胞在C瓶中正常培养了一段时间后全部死亡，根本原因可能是。