动物细胞培养技术知识点题库

动物细胞培养和植物组织培养的主要区别是（）

A . 动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同 B . 动物细胞培养是培养单个细胞，植物组织培养是培养组织 C . 动物细胞培养可以传代培养，而植物组织培养不能传代培养 D . 动物细胞培养过程中可发生遗传物质的改变，而植物组织培养不能

严重复合型免疫缺陷症的基因治疗方法是：先从病人体内获得淋巴细胞进行体外培养，然后将腺苷酸脱氨酶基因利用逆转录病毒作为运载体转移到淋巴细胞，再筛选成功转移的细胞增殖培养，最后重新输入患者体内．回答下列问题：

（1）体外培养淋巴细胞，应保证处于环境，在合成培养基中通常加入适量的等天然成分，培养应在含5%CO₂的培养箱中进行，CO₂的作用是．
（2）该基因治疗过程是在逆转录病毒的作用下，使RNA逆转录为DNA，与目的基因整合后插入到淋巴细胞基因组中．基因表达载体除含有目的基因外，还必须含有等控制基因表达的信号序列．
（3）淋巴细胞主要在人体的（器官）中分化形成，并参与人体的免疫．
（4）淋巴细胞的DNA上是否插入了目的基因，一般用标记的腺苷酸脱氨酶基因作为探针，进行DNA分子杂交检测．

下列有关现代生物技术的说法正确的是（）

A . 胚胎干细胞核移植可得到一群性状完全相同的个体 B . 动物细胞培养过程中需要激素处理以提高分化率 C . 重组质粒中的抗性基因与目的基因表达时共用一套遗传密码 D . 将特定的病毒注射到相应动物细胞内进行培养可获得特定的抗体

科学家将四种遗传基因导入皮肤细胞，发现皮肤细胞可转化为具有胚胎干细胞特性的细胞即诱导多能干细胞（iPS）．回答下列问题：

（1）哺乳动物的胚胎干细胞是由早期胚胎或中分离出来的一类细胞，在功能上具有发育的．胚胎干细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构：、、．
（2）将四种遗传基因导入皮肤细胞需要用到的工具酶有、．iPS的形成说明导入的四种遗传基因能够影响皮肤细胞中基因的．皮肤细胞能够被诱导形成iPS，是因为皮肤细胞具有．
（3）在培养iPS的培养液中加入，可以诱导iPS分化成不同的组织和器官，解决器官移植中的和两大难题．培养胚胎干细胞的培养液中还必须加入、．细胞培养所需的气体主要有．

在学习“细胞工程”时，列表比较动植物细胞工程的有关内容，你认为错误的是（）

	比较内容	植物细胞工程	动物细胞工程
A	特殊处理	酶解法去除细胞壁	用胰蛋白酶处理后制成细胞悬浮液
B	融合方法	物理方法、化学方法、生物方法	物理方法、化学方法
C	典型应用	人工种子、种间杂种植物	单克隆抗体的制备
D	培养基区别	蔗糖是离体组织赖以生长的成分	动物血清不可缺少

A . A B . B C . C D . D

下列研究方案不能实现其目的是（　　）

选项	方案	目的
A	诱导人胰岛B细胞和奶牛卵细胞融合	培育转基因克隆奶牛
B	将外源基因导入受体植物叶绿体中	防止外源基因扩散
C	通过体外培养或体内培养骨髓瘤细胞	制备单克隆抗体
D	用胃蛋白酶处理剪碎的动物组织块	制备动物细胞悬浮液

A . A B . B C . C D . D

如图一是培养小鼠胚胎成纤维细胞（MEF细胞）的示意图，图二是在用MEF细胞制成的饲养层上培养胚胎干细胞（ES细胞）的示意图．

（1）图一所示，制备细胞悬液时，常用酶来消化剪碎的组织块．配制培养液时，通常需要在合成培养基的基础上添加等一些天然成分．当MEF细胞分裂生长到细胞表面相互接触时就停止分裂，这种现象称为细胞的．
（2） ES细胞是由中分离出来的一类细胞，ES细胞在功能上具有发育的．
（3） MEF细胞能够分泌某些蛋白质，该蛋白质是通过方式分泌到细胞外．在培养液中单独培养ES细胞时，ES细胞容易发生分化，结合图二可推知MEF细胞的作用是．
（4）在治疗性克隆过程中，细胞核取自患者细胞，这是为了避免向患者移入组织细胞后体内发生反应．

科学家在人体皮肤细胞中移植了胚胎干细胞（ES细胞）中能高度表达并决定其“发育全能性”的多个基因，使其成为“万能细胞”．现将上述细胞植入小鼠身体内，植入的细胞便长成了“肿瘤”．请回答下列问题：

（1）体外培养“万能细胞”需要配制营养液，通常要在合成培养基中添加等一些天然成分．当细胞分裂产生的细胞相互接触时就停止分裂，这种现象称为细胞的．研究发现，此类细胞进行体外培养不能获得动物器官，这是因为．
（2）小鼠的肿瘤中出现了多种能力的组织和器官，类似于“器官移植”．为“保住肿瘤”，需要用到去除（器官）并经射线照射的小鼠，因为该类小鼠．该过程研究的意义在于解决临床上等问题．
（3）基因工程中常采用ES细胞作为细胞，因为ES细胞在加入分化诱导因子后可培养成人体的．

下列关于生物工程的叙述中，不正确的是（　　）

A . 动物细胞培养可用于检测有毒物质 B . 经诱导融合得到的杂种细胞，需经组织培养才能获得杂种植株 C . 人工合成法获得的人胰岛素基因与体内该种基因的碱基排列顺序可能不完全相同 D . DNA探针可用于检测苯丙酮尿症和21三体综合征

如图为转基因奶牛的培育过程，①~⑨为不同的过程，a-d为胚胎的不同结构，根据所学知识回答下列问题：

（1）过程①和过程②分别是和。过程③构建基因表达载体时，所用的工具酶是。
（2）若过程⑦为体外受精，过程⑤要得到较多的卵母细胞，通常需要用激素处理良种奶牛，过程⑥得到的精子需要进行处理。
（3）过程⑧常用的培养液成分一般包括、无机盐、有机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等物质。若对该过程得到的胚胎的[]进行均等切割，将会得到多头同种基因型的转基因奶牛。
（4）为获得稳定遗传的转基因奶牛，应将抗原基因转移到受体细胞的上；一般通过DNA分子杂交技术用作为探针对目的基因检测。

科研工作人员利用胚胎干细胞（ES细胞）通过胚胎工程克隆鼠，以供医学治疗需要，其技术流程如图：

（1）图中的X细胞可以称为细胞．
（2）图中的X细胞依次经___________后由代孕母鼠产生克隆鼠．

A . 核移植、胚胎培养、胚胎移植 B . 胚激活、胚胎培养、胚胎移植 C . 胚胎培养、胚激活、胚胎移植 D . 核移植、胚激活、胚胎体外培养
（3）在克隆胚胎的培养基中以作为能源物质．
（4）为了提高已有胚胎的利用率，可釆取技术．进行胚胎移植时，代孕母鼠对移入子宫的克隆胚胎基本上不发生，这为克隆胚胎在代孕母鼠体内的存活提供了可能．
（5）若分离出内细胞团进行胚胎干细胞培养，当干细胞达到一定的密度时，需进行培养以得到更多数量的细胞．还可以对胚胎干细胞进行，通过一系列的培育过程，以获得适合人体移植的动物器官，减弱或消除排斥反应．

中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）能够高效表达外源基因。科学研究中常使用重组CHO细胞（导入了重组载体的CHO细胞）大量生产外源蛋白，一般步骤为：Ⅰ.长期传代培养，获得大量重组细胞；Ⅱ.批式培养，获得大量外源蛋白。

（1）体外培养动物细胞的基本培养液（BM）中除抗生素和一般营养物质外，还应含有。为了获得能生产抗体A的重组 CHO 细胞，需要将含有抗体A基因的重组载体通过法导入CHO细胞，经筛选获得重组CHO 细胞。
（2）研究发现，酵母抽提物（YE）在动物细胞培养和促进蛋白质表达中具有重要作用。为确定YE在不同培养阶段的使用策略，研究人员进行了下列实验。
①图1所示实验探究了在长期传代培养阶段对重组CHO细胞增殖以及抗体A表达量的影响。通过细胞计数和计算得出实验结果如图2所示，结果说明。此处理对后续批式培养中的细胞增殖及单个细胞的抗体产量基本无影响。
②进一步探究YE对批式培养阶段的影响，应在阶段Ⅰ、Ⅱ分别使用和进行培养。结果表明，抗体A的总产量随着 YE 浓度的提高而增加。
③综上所述，为提高抗体A的总产量，整个培养过程中对YE的使用策略是。

下列有关叙述不正确的是（）

A . 愈伤组织的再分化过程不需要添加植物激素 B . 原代培养的动物细胞的基因型一般不发生改变 C . 转基因植物的培育一般需要借助于植物组织培养技术 D . 单克隆抗体制备以细胞融合和细胞培养技术为基础

动物细胞培养是动物细胞工程的基础，如右图所示，a、b、c 表示现代工程技术，①、②、③分别表示其对应的结果，请据图回答下面说法正确的是（）

A . 若 a 是胚胎分割技术，则产生的①中，所有个体的基因型和表现型一定相同 B . 若 b 是体外受精技术，则形成②的过程属于克隆 C . 若 c 是核移植技术，则形成③的过程体现了动物体细胞也具有全能性 D . ①②③生产过程中的代孕母畜必须与供体母畜同期发情

已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在培养皿中混合，加促融剂促进细胞融合，获得杂种细胞，并生产单克隆抗体。回答下列问题：

（1）分析上图，制备单克隆抗体涉及的生物技术有。通过上述方法得到的抗体与常规的血清抗体相比，最大的特点是。
（2）图中，②过程还需向培养液中通入CO₂ ，其目的是；④过程表示杂交瘤细胞的扩大培养，其既可在体外培养，也可注射到小鼠内培养，体内培养与体外培养相比，其优点是。
（3）为了从培养液中分离出杂交瘤细胞，要向③过程的培养液中加入，理由是杂交瘤细胞可利用途径合成DNA，从而才能在该培养液中增殖。

回答下列(1)、(2)小题：

（1）红曲霉合成的红曲色素是可食用的天然色素，具有防腐、降脂等功能。研究者进行了红曲色素的提取及红色素的含量测定实验，流程如下：

Ⅰ.取红曲霉菌种斜面，加适量洗下菌苔。制成菌悬液并培养，解除休眠获得菌种。经液体发酵，收集红曲霉菌丝体，红曲霉菌丝体与70%乙醇溶液混合，经浸提、，获得的上清液即为红曲色素提取液。为了进一步提高红曲色素得率，可将红曲霉细胞进行处理。

Ⅱ.红曲色素包括红色素、黄色素和橙黄色素等，红色素在390nm、20nm和505nm波长处均有较大吸收峰，用光电比色法测定红曲色素提取中的红色素含量时，通常选用505nm波长测定的原因是。测定时需用作空白对照。

Ⅲ.生产上提取红曲色素后的残渣，经处理后作为饲料添加剂或有机肥，这属于废弃物的无害化和

处理。
（2）我国在新冠疫情防控方面取得了显著的成绩，但全球疫情形势仍然非常严峻，尤其是病毒出现了新变异株——德尔塔、奥密克戎，更是威胁着全人类的生命健康。
Ⅰ.新冠病毒核酸定性检测原理是：以新冠病毒的单链RNA为模板，利用酶合成DNA，经PCR扩增，然后在扩增产物中加入特异的，如果检测到特异的杂交分子则核酸检测为阳性。

Ⅱ.接种疫苗是遏制新冠疫情蔓延的重要手段。腺病毒疫苗的制备技术要点是：将腺病毒的复制基因敲除；以新冠病毒的基因为模板合成的DNA插入腺病毒基因组，构建重组腺病毒。重组腺病毒在人体细胞内表达产生新冠病毒抗原，从而引发特异性免疫反应。在此过程中，腺病毒的作用是作为基因工程中目的基因的。将腺病毒复制基因敲除的目的是。

Ⅲ.单克隆抗体有望用于治疗新冠肺炎。单克隆抗体的制备原理是：取免疫阳性小鼠的细胞与骨髓瘤细胞混合培养，使其融合，最后筛选出能产生特特定抗体的杂交瘤细胞。与植物组织培养相比，杂交瘤细胞扩大培养需要特殊的成分，如胰岛素和。

神经纤毛蛋白－1(NRP－1)是一种多功能糖蛋白，在多种肿瘤组织中呈高表达，可与血管内皮生长因子结合促进肿瘤血管的形成，使肿瘤体积增大。科研人员通过制备NRP－1单克隆抗体，开展对小鼠的乳腺癌组织进行靶向治疗的研究。请分析回答：

（1）制备单克隆抗体涉及的动物细胞工程常用技术有(写出两项)。
（2）制备时，首先给小鼠注射，分离得到B淋巴细胞。将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合后得到杂交瘤细胞，经抗体检测筛选出细胞注射到小鼠腹腔中，从腹水中提取大量的NRP－1单克隆抗体。
（3）为了论证制备的单克隆抗体的治疗效果，研究者选择生长状况一致的小鼠，分别注射等量的乳腺癌细胞悬液，经饲养后，各小鼠均形成了体积基本相同的肿瘤。
①将上述小鼠随机分成实验组和对照组，实验组和对照组分别注射、，且每隔3天重复进行相同的注射操作，一段时间后发现，实验组小鼠的肿瘤体积都小于对照组，原因可能是NRP－1单克隆抗体与NRP－1发生特异性结合，阻断了的结合，从而抑制了肿瘤血管生成。

②上述实验小鼠应选用没有(填器官)的动物模型鼠，由于这种鼠存在免疫缺陷，实验时可以避免小鼠的免疫系统对乳腺癌细胞进行攻击，从而保证实验结果更可靠。

对某种动物的肝肿瘤细胞进行细胞培养，下列说法错误的是（）

A . 在利用肝组织块制备细胞悬液时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 B . 动物细胞培养应在含5%CO₂的CO₂培养箱中进行，CO₂的作用维持培养液的pH C . 为了防止动物细胞培养过程中受污染，可向培养液中加入适量的干扰素 D . 在合成培养基中，通常需加入血清、血浆等天然成分

某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。下列有关说法正确的是（）

A . 在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理 B . 细胞培养应在CO₂培养箱中进行，CO₂的作用是刺激细胞的呼吸 C . 取单个肝肿瘤细胞进行培养，获得细胞群的方法不属于克隆培养法 D . 甲、乙细胞在原代培养过程中，最终均会出现停止增殖的现象

新型冠状病毒可通过表面的S蛋白与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体，引起肺炎。单克隆抗体可阻断病毒的粘附或入侵，抗体药物的研发已成为治疗新冠肺炎的研究热点。右图为筛选、制备抗新型冠状病毒单克隆抗体的示意图。请回答下列问题：

（1）培养新冠病毒需先培养动物细胞，动物细胞培养除对培养液和培养用具进行灭菌外，还要通过来保证培养液的无毒。
（2）若用小鼠来制备抗新型冠状病毒的单克隆抗体，制备过程中需向小鼠注射，使小鼠产生免疫反应，从小鼠脾细胞中获得相应的 B 淋巴细胞，诱导小鼠的B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，之后还需用HAT培养基筛选，筛选过程中的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞可以存活。
（3）经HAT培养基筛选得到的杂交瘤细胞的特点是。
（4）为尽快提高新型冠状病毒的检测效率，某团队紧急研发了新型冠状病毒化学发光检测试剂盒，该试剂盒以单克隆抗体为主要“部件”诊断人体是否携带新冠病毒，其诊断利用的免疫学原理是。

（5）目前接种疫苗仍是阻挡新型冠状病毒传播最有效的方式。2021年2月25日，由中国工程院院士陈薇团队领衔研发的我国重组新冠疫苗上市注册申请获得批准。现用实验动物检测疫苗接种后机体产生抗体的能力。根据下表信息，得出接种新冠疫苗的较佳方案为。

组别（40只）	浓度（单位：VP）	剂量（支）	间隔时间（周）	抗体水平（相对值％）
1	4×10⁵	2	2	94.43
2	5×10⁵	2	2	96.26
3	4×10⁵	2	4	97.56
4	5×10⁵	2	4	98.87

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