动物细胞培养技术 知识点题库

（1） 实验分组设计：

A 组：海拉细胞悬液+培养液 B 组：海拉细胞悬液+培养液+药物甲溶液

C 组：海拉细胞悬液+培养液+药物甲溶液，培养一段时间后，加入．

（2） 完善实验思路：

（3） 预测实验结果（以坐标曲线图形表示实验结果，并标出加入药物的时间）：

（4） 分析与讨论：

药物甲的作用是．

（1） 约翰格登于1962年通过实验把蝌蚪已分化体细胞的细胞核移植进入卵母细胞质中，并成功培育出“克隆青蛙”．由于动物细胞的全能性会随着动物细胞程度的提高而逐渐受到限制，直到今天也还不能用类似（某种植物细胞工程的技术手段）的方法获得完整的动物个体．因此，约翰格登培育“克隆青蛙”，实际是通过（某种动物细胞工程的技术手段）来实现的．“克隆青蛙”和“试管婴儿”所共需的胚胎工程技术有．

（2） 山中伸弥于2006年把4个关键基因通过逆转录病毒转入小鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞．在该技术中，逆转录病毒是这4个关键基因进入成纤维细胞的（基因工程的工具），它能够携带外源基因进入受体细胞，并整合到其染色体的DNA上．该操作过程中，除了需要逆转录病毒外，还需要的操作工具有、．

（3） 卡罗琳斯卡医学院2012年10月8日宣布，将2012年诺贝尔生理学或医学奖授予约翰格登和山中伸弥，以表彰他在“体细胞重编程技术”领域作出的革命性贡献．所谓“体细胞重编程技术”即将成年体细胞重新诱导同早期干细胞状态，即获得iPS细胞，iPS细胞与胚胎干细胞一样，具有发育的，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞．目前获得iPS细胞的方法除上述两种之外，常见的还有以下两种：一是诱导成年体细胞与胚胎干细胞产生四倍体细胞；二是应用技术（动物细胞工程的技术手段）将生殖细胞置于特定条件下进行培养．

（1） 将人正常肺上皮 BEAS-2B 细胞培养于添加了的中。

当细胞处于快速生长期时，用将细胞消化并悬浮培养。

（2） 实验结果如下图所示：

由此可以得出的结论是。

（1） 取人体新鲜牙周膜组织块，用处理制成细胞悬液，置于含的37℃恒温培养箱中培养，获得4～10代牙周膜细胞。

（2） 取牙周膜细胞加入P菌后共培养，电镜观察发现P菌能侵入牙周膜细胞并在细胞内存活。测定细胞增殖活性，结果如下图：

实验结果显示：P菌感染人牙周膜细胞后，与对照组相比，牙周膜细胞（填“发生”或“未发生”）明显的增殖改变。

（3） 体外诱导牙周膜细胞成骨分化的过程中会形成矿化结节。为了研究P菌对人牙周膜细胞成骨分化的影响，研究者利用被P菌感染的牙周膜细胞进行矿化诱导处理，分别于7d、14d、21d染色检测牙周膜细胞矿化情况，结果如下图：

（A：对照组；B：实验组；7、14、21表示天数；黑点表示矿化结节）

①正常牙周膜细胞能不断分化为骨纤维细胞、成骨细胞等多种细胞，这是基因的结果。

②对照组的处理是。

③研究发现，成骨分化与一种特异性转录因子Runx2有关，P菌感染人牙周膜细胞后，该转录因子的表达水平明显下调，由此推测，Runx2的作用是。

（1） 采集“苹果”的耳部皮肤组织块后，用处理获得分散的成纤维细胞，通常将其置于含95%空气和5%CO₂的混合气体培养箱中培养。放置在混合气体环境培养的目的是。

（2） 采集和选取处在（填时期）的卵母细胞用于核移植。用于核移植的供体体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，主要原因是。

（3） 为获得更多的具有相同遗传背景的动脉粥样硬化基因编辑狗，在利用体细胞克隆技术的同时，常采用的方法是对早期胚胎进行。

（4） “龙龙”与“苹果”的性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是。

（1） 途径I和II都需要通过动物细胞培养获得足够数量的病毒株。除对培养液和培养用具进行灭菌外，在动物细胞培养中，通过来保证培养液的无菌、无毒。此外还要定期用酶处理细胞，使的细胞脱落形成细胞悬液。途径I与途径II生产的疫苗安全性更高的是途径。

（2） 途径Ⅲ中，用到的酶至少有和Taq酶等4种酶的参与。为检测步骤⑦所表达的蛋白与病毒抗原蛋白是否有相同的免疫反应特性，可用工程菌表达的蛋白与进行杂交实验。

（3） 途径IV生产的DNA疫苗直接注入人体后，在人体细胞中表达出的会引起机体产生免疫应答。该疫苗的产生主要应用的现代生物工程技术是。

（1） 取小鼠子宫时，为避免细菌污染，手术器具应进行处理；子宫取出剪碎后，用处理一定时间，可获得分散的子宫内膜组织细胞，再分离获得基质细胞用于培养。

（2） 培养基中营养物质应有（填写两种）；培养箱中CO₂浓度为5%，其主要作用是。

（3） 在含PDCD4基因的表达载体中，启动子的作用是。为了证明PDCD4基因对基质细胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表达载体和基质细胞的混合培养为实验组，还应设立两个对照组，分别为。经检测，实验组中PDCD4表达水平和细胞凋亡率显著高于对照组，说明该基因对基质细胞凋亡具有（填“抑制”或“促进”）作用。