灭菌技术知识点题库

为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验．

（1）配制好的培养基通常使用法灭菌．步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是．
（2）同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示．该同学的接种方法是，出现图B结果可能的操作失误是．
（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接人0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57．据此可得出每升样品中的活菌数为个．
（4）步骤⑤需要振荡培养，原因是．
（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是．

某同学配制好含琼脂的牛肉膏蛋白胨培养基后，对培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌，当培养基温度下降到50℃时，在酒精灯火焰附近倒平板，待培养基冷却至室温，按照下表进行处理：

将处理完毕的培养皿置于适宜温度下培养2~3d，观察每个培养皿中的菌落特征和数目。请回答下列问题：

（1）实验中E组的作用是，若该组的培养基表面没有菌落生长，这说明。
（2）牛肉膏蛋白胨培养基可用于培养(填“酵母菌”“细菌”或“乳酸菌”)，培养基中的蛋白胨主要为微生物生长提供。
（3） “在酒精灯火焰附近”进行相关操作是为了。实验结束后，对使用过的培养基应。
（4）该实验的单一变量(自变量)是。

下列有关微生物培养与应用的说法正确的是（）。

A . 培养基是指直接取自自然界不需加工的营养基质 B . 接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理 C . 大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段 D . 分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源

蓝白斑筛选是基因工程中筛选重组目的基因常用的一种方法，表现为培养基上出现蓝白颜色的菌落，可以通过颜色为依据直接筛选重组菌。用于筛选的菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株，这种宿主菌中编码β-半乳糖苷酶的部分缺失，不具有生物活性。用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌β-半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，在这段序列中还含有多个限制性酶切位点，便于插入目的基因。β-半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物X-gal，使其变成蓝色物质。回答下列问题：

（1）玻璃和金属材质的实验器材利用方法灭菌。
（2）培养基灭菌后，需要冷却到℃左右时，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒扣，原因是。
（3）为防止杂菌污染，培养基中要添加。蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了。
（4）最终培养基出现的白色的菌落是（）

A . 目的基因和载体结合 B . 只含目的基因 C . 只含载体
（5）需要长期保存该菌种，可采用的方法是。

酵母菌的蛋白质可作为饲料蛋白的来源，有些酵母菌能以工业废甲醇作为碳源，研究人员拟从土壤样品中分离出可利用工业废甲醇的酵母菌，这样既能减少污染又可变废为宝。下图为主要操作流程示意图。

回答下列问题：

（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的，及时对培养基进行分装，并进行高压蒸汽灭菌：在加热排除高压锅内原有的后，将高压锅密闭，继续加热，通常在的条件下，维持15-30min，可达到良好的灭菌效果。
（2）取步骤②中梯度稀释后的适量液体加入无菌培养皿，然后将高压蒸汽灭菌后的培养基冷却至（25℃/50℃/80℃）左右时倒入培养皿混匀（步骤⑧），冷凝后将培养皿倒置，在适宜的条件下培养一段时间。
（3）挑取平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线纯化，下列叙述合理的是。
a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌

b.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量

c.划线时不能划破培养基表面，以确保能正常形成菌落

d.第二区以后的划线起始端要与上一区的划线的末端相连接，最后一区的划线末端不能与第一区的划线相连
（4）步骤⑤的培养中，应加入作为碳源，并加入适量的氮源、无机盐和水等成分。为监测发酵罐中酵母菌活细胞的密度，取2mL发酵液稀释1000倍后，加入等体积台盼蓝染液染色，用如图所示的计数室规格为25x16型的血细胞计数板计数，要达到每毫升4x10⁹个活酵母菌细胞的预期密度，理论上，图中标号①～⑤五个中格里的呈色的酵母菌细胞总数应不少于个。

下列有关无菌技术的叙述错误的是（）

A . 对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒 B . 用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基要进行灭菌 C . 高压蒸汽灭菌锅需将冷空气彻底排除后才能将锅密闭 D . 使用后的液体培养基在丢弃前要用煮沸消毒法进行处理

大肠杆菌是人和动物肠道寄生菌，在一定条件下会引起胃肠道等局部组织感染。检验水样中大肠杆菌数目是否符合生活饮用水卫生标准，常用滤膜法测定，其操作流程如图。大肠杆菌的代谢产物能与伊红美蓝（EMB培养基的指示剂）反应，菌落呈黑色。下列对实验操作的分析，不正确的是（）

A . 测定前，滤杯、滤膜和滤瓶均可用干热灭菌法灭菌处理 B . 配制好的培养基一般倒置，防止冷凝水滴至培养基造成污染 C . 配制EMB培养基时，需考虑大肠杆菌所需要的营养物质及pH等条件 D . EMB培养基属于选择培养基，只有大肠杆菌能正常生长并形成黑色菌落

酒精是高中生物实验中常用的实验试剂。下列关于酒精使用的叙述，错误的是（）

A . 检测脂肪的实验中，需要用50%的酒精洗去浮色 B . 提取光合色素时，需要用无水乙醇溶解色素 C . 制作植物细胞有丝分裂的临时装片时，需用95%的酒精进行漂洗 D . 探究植物细胞呼吸方式的实验中，可用70%的酒精对萌发种子进行消毒

回答下列（1）（2）小题

（1）苹果营养丰富，富含果胶、淀粉和纤维素等成分。请回答下列问题：
Ⅰ.苹果榨汁过滤收集得到的果汁，因含量较高而澄清度低，添加可使其沉淀。果汁保存前，通常先灭菌处理，可用（写出一种即可）方法检测灭菌的效果。
Ⅱ.可利用苹果皮渣制取果胶，为提高果胶得率，需对苹果皮渣进行热处理，其原因是。但若热处理的温度过高，果胶得率也明显下降，其原因可能是。
Ⅲ.微生物法分离果胶，其原理是利用微生物分解植物组织中的复合多糖体，从而使果胶从植物组织中游离出来，有效提取果胶。为分离此类优良菌株，将待选菌群用方法接种在以为唯一碳源的培养基中进行初步筛选并计数。
Ⅳ.进一步研究发现，筛选得到的菌株还能分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等），说明其能分泌。
（2）回答与人乳铁蛋白转基因山羊研究的相关问题：
Ⅴ.转基因动物制备过程中，受精卵与体细胞相比有更高的能力，常作为受体细胞。因哺乳动物受精卵数量有限等原因，生产研究中多用雌性山羊胚胎成纤维细胞来代替。使用时，将低温保存的雌性山羊胚胎成纤维细胞后，接种到装有细胞培养液的卡式瓶中，再将卡式瓶放入中进行原代培养，以获得更多数量的细胞。
Ⅵ.通常将乳铁蛋白基因与载体构建形成重组DNA分子后，用显微注射法导入雌性山羊胚胎成纤维细胞，转化成功率与（写出两点即可）有关。为方便筛选含乳铁蛋白基因的转基因细胞，所构建的重组DNA分子上应有。
Ⅶ.将转入乳铁蛋白基因的胚胎成纤维细胞，与羊的卵细胞构建成，利用胚胎工程技术生产转基因山羊。为检测转基因山羊中乳铁蛋白基因的表达情况可采用的方法是（写出一种即可）。

回答下列(1)、(2)小题：

（1）红曲霉合成的红曲色素是可食用的天然色素，具有防腐、降脂等功能。研究者进行了红曲色素的提取及红色素的含量测定实验，流程如下：

Ⅰ.取红曲霉菌种斜面，加适量洗下菌苔。制成菌悬液并培养，解除休眠获得菌种。经液体发酵，收集红曲霉菌丝体，红曲霉菌丝体与70%乙醇溶液混合，经浸提、，获得的上清液即为红曲色素提取液。为了进一步提高红曲色素得率，可将红曲霉细胞进行处理。

Ⅱ.红曲色素包括红色素、黄色素和橙黄色素等，红色素在390nm、20nm和505nm波长处均有较大吸收峰，用光电比色法测定红曲色素提取中的红色素含量时，通常选用505nm波长测定的原因是。测定时需用作空白对照。

Ⅲ.生产上提取红曲色素后的残渣，经处理后作为饲料添加剂或有机肥，这属于废弃物的无害化和

处理。
（2）我国在新冠疫情防控方面取得了显著的成绩，但全球疫情形势仍然非常严峻，尤其是病毒出现了新变异株——德尔塔、奥密克戎，更是威胁着全人类的生命健康。
Ⅰ.新冠病毒核酸定性检测原理是：以新冠病毒的单链RNA为模板，利用酶合成DNA，经PCR扩增，然后在扩增产物中加入特异的，如果检测到特异的杂交分子则核酸检测为阳性。

Ⅱ.接种疫苗是遏制新冠疫情蔓延的重要手段。腺病毒疫苗的制备技术要点是：将腺病毒的复制基因敲除；以新冠病毒的基因为模板合成的DNA插入腺病毒基因组，构建重组腺病毒。重组腺病毒在人体细胞内表达产生新冠病毒抗原，从而引发特异性免疫反应。在此过程中，腺病毒的作用是作为基因工程中目的基因的。将腺病毒复制基因敲除的目的是。

Ⅲ.单克隆抗体有望用于治疗新冠肺炎。单克隆抗体的制备原理是：取免疫阳性小鼠的细胞与骨髓瘤细胞混合培养，使其融合，最后筛选出能产生特特定抗体的杂交瘤细胞。与植物组织培养相比，杂交瘤细胞扩大培养需要特殊的成分，如胰岛素和。

为提高一株石油降解菌的净化能力，将菌涂布于石油为唯一碳源的固体培养基上，以致死率为90%的辐照剂量诱变处理，下列叙述不合理的是（）

A . 将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低培养基污染的概率 B . 涂布用的菌浓度应控制在30~300个/mL C . 需通过预实验考察辐射时间对存活率的影响，以确定最佳诱变时间 D . 挑取培养基上长出的较大单菌落，给纯化后进行降解效率分析

某些土壤细菌可将尿素分解成CO₂和NH₃ ，供植物吸收和利用。科研人员分离培养尿素分解菌的流程如图所示。回答下列问题：

（1）实验时，培养基通常采用的方法进行灭菌。A培养体系内的培养基中提供氮源的物质是。
（2）尿素分解菌可以葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是和。用移液管吸取1 mL样液后，注入①号试管中，使样本与稀释液充分混匀，依次操作后，④号试管中的细胞浓度是样本中的倍。
（3）在培养过程中，空白对照组一个平板上出现个别菌落，说明在此次培养过程中出现了现象。单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同的微生物，原因是。

下图为纤维单胞菌（能产生纤维素酶）的获取过程。下列有关叙述错误的是（）

A . ①②③④培养基都应以纤维素为唯一碳源 B . 图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌 C . 若需对微生物进行计数，可以选择④中的5划线区域的菌落进行计数 D . 依据图④中的划线结果判断，在操作过程中接种环共需灼烧6次

某研究小组分离提纯葡萄皮上的野生酵母菌时，选取了从自然界中采集到的葡萄，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中进行培养。回答下列问题：

（1）配制酵母菌培养液时，需控制培养液的浓度，浓度过高则会导致另需加入一定剂量的青霉素等抗生素，其目的是，对培养液进行灭菌时，切断高压蒸汽灭菌锅热源后，须待观察到时，才能打开放气阀以释放锅内余气，最后开启锅盖取出培养液。
（2）该研究小组成功分离出某品种的酵母菌后，用等量菌液分别接种于3个盛有等量液体培养基的锥形瓶中，并分别置于转速为150r/min、200r/min、250r/min的摇床上培养，检测结果如图1所示，摇床转速为250r/min的酵母菌种群密度最大的原因是。
（3）图2是采用血细胞计数板直接计数和稀释涂布平板法计数两种方法计数培养液中酵母菌数量时得到的结果，其中采用稀释涂布平板法计数得到的是曲线，下列判断依据中正确的有。
①稀释涂布平板法只计数活的酵母细胞，死细胞无法形成菌落
②采用血细胞计数板直接计数时，可能会将死细胞与活细胞一起计数
③采用稀释涂布平板法计数时，两个或多个细胞连在一起长成一个菌落
④采用稀释涂布平板法计数时，因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
（4）通过如图3所示的方法进行纯化培养时，用移液枪取最终的酵母菌稀释液0.1mL滴在培养基表面，然后将沾有少量酒精的涂布器后再进行涂布。在恒温培养箱中培养一段时间后，其中某组的4个平板上菌落数分别为69个、52个、44个、26个，则可以推测原酵母菌液中每毫升含菌数为个。

微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，请分析下列操作，正确的有几项（）

①培养基、锥形瓶都要进行干热蒸汽灭菌

②加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌

③家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌

④干热灭菌可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢

⑤涂布平板时所用的涂布器需酒精浸泡后灼烧灭菌

⑥家庭制作泡菜并无刻意的灭菌环节，发酵初期乳酸菌产生的乳酸可以抑制其他微生物的生长

A . 一项 B . 二项 C . 三项 D . 四项

广东特产陈皮具有理气健脾、燥湿化痰之功，其所含黄酮类物质起重要作用，而黑曲霉（一种无害霉菌）可以引起其含量的变化。为了研究黑曲霉对不同年份陈皮黄酮类成分的影响，某研究小组从江门市新会区收集一批陈皮样品进行实验。回答下列问题：

（1）对于前期培养的黑曲霉，可利用法得到单菌落，并通过显微镜检测鉴定，获得纯的目标菌种，收集它的孢子制备悬浮液。
（2）分别称取8克陈化2年、6年、10年的陈皮样品粉末平铺于培养皿，用紫外线对样品进行正反面照射各30min。用紫外线照射样本的目的是。

（3）将经紫外线照射过的每种年份的陈皮样品都分为两组，一组各加入1mL无菌水，分别标记为XH₂-0、XH6-0、XH10-0．另一组各加入，不同年份的样品分别标记为XH₂、XH6、XH10．陈皮为黑曲霉的生长提供等营养成分。置于恒温恒湿条件下培养一段时间后，取不同接种天数的样品检测黄酮类成分的含量。实验结果如下表所示。据表分析，实验结果表明：（答出2点即可）。

编号	第5天	第7天	第9天	第11天	第13天
XH₂	8.32	8.77	9.74	13.11	14.33
XH₂-0	7.42	7.39	7.36	7.68	7.98
XH6	8.72	9.73	9.91	10.93	10.82
XH6-0	8.33	8.82	8.63	8.82	9.15
XH10	9.24	10.95	12.48	14.26	12.61
XH10-0	10.27	9.84	9.35	9.51	9.54

下列关于“分离以尿素为氮源的微生物”实验的叙述，正确的是（）

A . 在尿素固体培养基上生长的细菌都是以尿素为氮源的细菌 B . 液体培养基振荡培养的目的是使微生物均匀分布以便涂布 C . 对含有尿素的培养基进行灭菌时，需降低高压蒸汽灭菌的压力与温度 D . 称取土壤、稀释土壤溶液、涂布平板这些操作都需要在酒精灯火焰旁进行

大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，主要生活在大肠内。下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请回答下列问题：

成分	蛋白胨	乳糖	蔗糖	K₂	HPO₄	显色剂	琼脂
含量	10.0g	5.0g	5.0g	2.0g	2.0g	0.2g	12.0g

（1）将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL，根据用途划分该培养基属于（填“选择”或“鉴别”）培养基。该培养基中的碳源是。
（2）培养基灭菌常采用的方法是。玻璃和金属材质的实验器具（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
（3）下图是采用两种方法纯化培养微生物的效果：
某同学利用显微镜直接计数法统计了培养基中大肠杆菌的数量，该方法统计出的结果比实际数值扁（填“大”或“小”），理由是。获得图B效果的接种方法是，该方法在第二次划线及其后划线总是从上次划线的末端开始的原因是。

无菌操作是微生物培养过程中的关键环节，下列叙述错误的是（）

A . 煮沸可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，达到消毒目的 B . 培养真菌时，在培养基中加入青霉素可抑制某些细菌的生长 C . 在酒精灯火焰旁操作可以减少空气中微生物落入培养基的可能性 D . 含葡萄糖的培养基需在121℃（1kg/cm²）条件下高压蒸汽灭菌20分钟

碰碰香叶片中的挥发油具有广泛的食用，药用等价值。为验证碰碰香挥发油对细菌的抑菌活性，进行了如下实验：

步骤一：配置LB培养基（胰蛋白胨10g，酵母浸膏5g、氯化钠10g、琼脂粉l5g、蒸馏水960mL），灭菌后倒平板，静置备用；

步骤二：制备大小相同的滤纸片，灭菌后烘干；

步骤三：将滤纸片分别浸于10mL碰碰香挥发油提取液中处理，晾干后备用；

步骤四：用移液枪取20μL的大肠杆菌悬液加入LB培养基表面，用涂布器将其均匀涂布；

步骤五：取步骤三浸泡处理过的3个滤纸片，置于LB培养基表面，并保持相互间隔一定距离，37℃倒置培养，每天观察并记录实验结果。

请回答下列问题：

（1）可利用水蒸气蒸馏法从碰碰香叶片中提取挥发油．该方法的原理是。
（2） LB培养基中，可以为微生物提供氮源的是，从物理性质分析，该培养基属于培养基，对该培养基灭菌应采用法。
（3）步骤五需增设对照组，对照组的处理应把滤纸片置于中浸泡。
（4）实验结果：经碰碰香挥发油浸泡过的3个滤纸片周围都出现了抑菌圈（透明圈），其中一个抑菌圈如图所示，请分析其形成原因：。

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