灭菌技术知识点题库

蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株，做了如下实验步骤(配制了下列培养基，在适宜条件下培养)：

（1）为实现筛选目的，步骤Ⅰ所使用的培养基配方中，应去除并加入高浓度的。该培养基从功能上看属于培养基。
（2）灭菌是否彻底或是否被污染需要检测，检测方法是。
（3）为实现目的菌的分离和计数，步骤Ⅱ所使用的培养基中还应加入制成平板，采用的接种方法是。
（4）步骤Ⅲ的目的是。

下列有关微生物发酵技术的叙述，错误的是（）

A . 传统的发酵过程受技术条件限制，通常不进行无菌操作 B . 成品腐乳表面的皮膜是由毛霉等真菌的菌丝形成的，对人体无害 C . 制备果酒、果醋和腐乳时，都是以建立种群优势作为发酵的基本条件 D . 果醋的制备可以建立在果酒发酵的基础上，也可以直接利用葡萄汁发酵

苯酚是染料、农药和医药等行业的重要生产原料和中间体，是工业废水的常见污染物之一。某研究小组为了处理高浓度含苯酚废水，从处理废水的活性污泥中分离筛选得到能高效降解苯酚的细菌，如图为实验过程部分图示。

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（1）实验用的培养基和培养皿采用的灭菌方法是；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该。
（2）为了筛选降解苯酚的细菌，本实验所选用的培养基必须以为唯一碳源。从上图分析本实验选用获得降解苯酚的单菌落。
（3）分离纯化得到能高效降解苯酚的细菌，应对其进行培养，培养后若要测定培养液中该菌的数目，可在显微镜下用直接计数，该方法的测量值比活菌的实际数目。最后应将菌种划线接种在斜面上，37℃培养 24h 后，置于保存。

下列关于微生物培养的叙述，错误的是（）

A . 通过消毒不能杀死物体内所有的微生物 B . 倒平板时培养基倒入培养皿后，要立即倒置放置 C . 平板划线法和稀释涂布平板法常用于微生物的接种 D . 自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是碳源

杀虫脒，又名氯苯脒，是一种有机氮农药，具有高效广谱杀虫杀螨的作用，但长期使用容易导致土壤污染，为探究能降解杀虫脒的细菌进行了以下实验。

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、、水、无机盐四类，该实验所用的培养基只能以杀虫脒作为唯一氮源，其原因是，从功能上讲，该培养基属于培养基。
（2）微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法在功能上的区别是稀释涂布平板法还能，此外，也是测定微生物数量的常用方法。
（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力。
（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和。培养基一般不使用干热灭菌的原因是。

木糖醇可作为甜味剂，还具有抗龋齿的特性。常被用来作为食品甜味剂或医疗上给糖尿病患者作糖的替代品。用微生物生产木糖醇副产物少且含量低，易于分离提纯。为了筛选木糖醇高产菌株，某研究小组设计了下表所示的培养基。请分析回答：

营养

物质

木糖

蛋白胨

酵母膏

MgS0₄ •7H₂O

CaCl₂ • 2H₂O

KH₂PO₄

(NH₄)₂SO₄

水

含量(g)

0.5

0.2

0.1

定容至1000 mL

（1）按照物理性质划分，该培养基为培养基。若要利用该培养基获得木糖醇高产菌株的菌落，则应添加的成分是。该培养基中主要的碳源和氮源分别是。
（2）为了防止杂菌污染，该培养基溶化后要进行，常用的方法是。
（3）实验菌种通常从木糖厂废水、废弃的木糖液污泥中采集，说明木糖醇高产菌株主要生活在的环境中。
（4）为了快速获得木糖醇高产菌株，通常采用摇床培养的方法，由此说明木糖醇高产菌株的异化作用类型为，此外，摇床培养的优点还有。
（5）若要检测培养液中菌体的数量，通常将菌液用接种到固体平板培养基表面，根据估算菌液中菌体的数量。

幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：

配制培养基―→灭菌、倒平板―→X―→培养―→观察

请回答：

（1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现色环带。
（2）下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是___________灭菌。

A . 高压蒸汽 B . 紫外灯照射 C . 70%酒精浸泡 D . 过滤
（3）步骤X表示。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液到培养基平面上。菌液稀释的目的是获得个菌落。
（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在中。若不倒置培养，将导致。
（5）临床上用¹⁴C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将¹⁴C标记的分解为NH₃和¹⁴CO₂。

土壤有“微生物的天然培养基”之称，生物科技小组欲从土壤中筛选淀粉分解菌，请回答：

（1）常用的微生物分离提纯的接种方法有两种，分别是和。
（2）固体培养基灭菌的常用方法是。从土壤中筛选淀粉分解菌时对选择培养基的成分特别要求是。

（3）接种培养一段时间后，培养基表面经显色，会出现以菌落为中心的透明圈（如图），实验结果见下表。

菌种	菌落直径：C（mm）	透明圈直径：H（mm）	H/C
细菌Ⅰ	5.1	11.2	2.2
细菌Ⅱ	8.1	13.0	1.6

（4）由图判断分解淀粉能力强的菌种是。理由是。

下列有关实验的操作中，错误的是（）

①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢

②接种操作要在酒精灯火焰附近进行

③植物组织培养过程中，接种的外植体要进行消毒

④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌

⑤培养基要进行高压蒸气灭菌

⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌

⑦接种环应采用火焰灼烧的方式灭菌

A . ①③ B . ②④ C . ⑤⑦ D . ④⑥

下列有关细菌纯化培养的说法，不正确的是（）

A . 培养基的灭菌最常用的方法是高压蒸汽灭菌法 B . 每次划线后接种环要在酒精灯火焰上灼烧灭菌 C . 培养基上的单个菌落都是一个细菌细胞的克隆 D . 菌液梯度稀释后用涂布法接种，得到单菌落便于计数

甲醛是一种来源广泛的挥发性有机污染物，具有强烈的致癌和致畸作用，可利用微生物降解甲醛来治理甲醛污染，具有高效、环保、无二次污染等优点。如图甲是采集活性污泥作为优良菌源，通过筛选分离出能以甲醛为唯一碳源的高效降解菌的实验过程。分析回答下列问题：

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（1）上述实验材料中，不需要进行灭菌处理的是，培养基灭菌的常用方法是。该实验③过程所用的选择培养基只能以甲醛作为唯一的碳源，其原因是。
（2）由③→④的分离活性污泥中的细菌的接种方法（如图乙）为法，接种时，对接种环应采用方法进行灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始，这样做的原因是。
（3）为研究甲醛初始浓度对菌株降解能力的影响，进行了相应实验。当甲醛的初始浓度小于1200mg/L时，菌株可以完全降解甲醛：当甲醛的初始浓度增高至1600mg/L时，48小时后菌株对甲醛的降解能力很弱，甚至失去降解能力，其原因可能是。

下列微生物培养的实验操作中，错误的是（）

A . 高压蒸汽灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B . 倒平板时，应将打开的皿盖放到实验操作台一边，以免培养基溅到皿盖上 C . 等待平板冷却凝固后要将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上 D . 为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

下列关于无菌操作的叙述,错误的是(　　)

A . 煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 B . 加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌 C . 耐高温的、需要保持干燥的物品,可用干热灭菌法进行灭菌 D . 接种时灼烧接种环要冷却后再对菌种划线

随着新冠疫情的持续，人类消耗了大量的一次性口罩，这些口罩不及时处理会对环境造成一定的污染。某科研人员欲筛选出能高效降解一次性口罩（主要成分是由C、H两种元素组成的聚丙烯纤维）的细菌，设计了如图所示的流程。回答下列问题：

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（1）土壤是微生物的天然培养基，该培养基能为微生物的生长提供的四大营养物质分别是碳源、。
（2）通过相关实验选择较合适的土壤样品时，该实验的自变量是，选择最合适土壤样品的指标是。
（3）图中“甲”指的是，使用的是（填“固体”或“液体”）培养基，目的是提高聚丙烯纤维降解菌的比例和密度。培养基和培养皿常分别采用、灭菌方式。
（4）分离纯化聚丙烯纤维降解菌时，为了使培养皿上出现的菌落尽可能都是单菌落，应采用的接种方法是，采用该方法的原因是。
（5）将分离纯化得到的不同菌种分别接种到添加了显色染色剂的培养基上，该培养基称为培养基。

《本草纲目》记载：“橘皮，苦能泄、能燥。”柑橘的果皮不仅可以用于中药材，还可以用于提取芳香油，果肉可以吃、榨汁。回答下列问题：

（1）中药服用前至少经过15分钟以上沸水煎煮，该过程也起到（填“消毒”或“灭菌”）作用。实验室常用的灭菌方法有（写出两种即可）。
（2）腐烂的橘皮表面呈现青绿色，是因为表面长出了青霉的菌落。若要对青霉进行分离纯化，应该选用的接种方法更简便的是。纯化培养基中除碳源外，还需要添加的物质有（写出三种即可）。
（3）用柑橘果肉榨取果汁，加入适量果胶酶的目的是。探究果胶酶的用量实验中，判断果胶酶用量是否合适的因变量是。
（4）提取橘皮精油不宜采用的方法，以免原料焦糊和有效成分水解。压榨过程中，为了使橘皮油易与水分离，需要分别加入相当于橘皮质量0.25%的NaHCO₃和5%的，并调节pH为7~8。

下列关于无菌操作的叙述，正确的是（　　）

A . 制备培养基时，灭菌后需调节pH B . 加入培养基中的指示剂不需要灭菌 C . 在超净台操作时需打开紫外灯和过滤风 D . 对动物培养基中的血清进行过滤除菌

以下有关生物技术实践的叙述中，正确的是（）

A . 煮沸杀菌是生活中常用的灭菌方法，常用于培养皿、牛奶等的灭菌 B . 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基时操作顺序为计算、称量、熔化、灭菌、调pH、倒平板 C . 用稀释涂布平板法测定某土壤浸出液中活菌数目时，测定值可能比实际值大 D . 以尿素为唯一氮源并加入酚红指示剂的培养基可分离并鉴定土壤中分解尿素的细菌

某同学发现超市里袋装牛奶的灭菌方式有两种：一种是巴氏灭菌，保质期时间短；一种是超高温灭菌，保质时间长。该同学想通过实验的方法验证超高温灭菌的牛奶所含的细菌比巴氏灭菌的牛奶少（不考虑奶牛品种、产地等因素），以下是相关检测实验，回答下列问题：

（1）一般来说，培养基中的营养成分应含有。（写出四种）
（2）对培养基进行灭菌的方法是，在对培养基进行灭菌后，待培养基冷却至50℃，需要在附近倒平板，平板冷凝后，要将平板，这样放置的原因是：。
（3）待测牛奶在涂布前需进行系列稀释，原因是。

（4）下表为一些实验工具和灭菌方法，涂布牛奶稀释液应选择的工具是（填数字），该涂布工具最适合的灭菌方法是（填字母）。

实验工具
灭菌方法	A．高温高压灭菌	B．火焰均烧	C．紫外线照射	D．酒精擦拭

（5）实验结束后，统计的菌落数目比实际活菌的数目要（填“多”或“少”）。
（6）实验结果表明，超高温灭菌的牛奶形成的菌落数要比巴氏灭菌的少，从细菌中酶的角度理解，这体现了酶的的特性。

研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在“科学号”考察船对南中国海科考中，中国科学家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。

回答下列问题：

（1）研究者先制备富集培养基，然后采用法灭菌，冷却后再接入沉积物样品，28℃厌氧培养一段时间后，获得了含拟杆菌的混合培养物，为了获得纯种培养，除了稀释涂布平板法，还可采用法。据图分析，拟杆菌新菌株在以为碳源时生长状况最好。
（2）研究发现，将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可能是。（答一点即可）
（3）藻类细胞解体后的难度解多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态系绘组成成分的角度考虑，拟杆菌对深海生态系统碳循环的作用可能是。
（4）深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的拟杆菌所分泌物各种多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能还有。

菜籽粕含有35%~45%蛋白质，是畜禽饲料的重要原料，但其中的单宁等抗营养因子限制了菜籽粕的应用。研究者将不同菌种接种到菜籽粕与麸皮制成的固体培养基中发酵48h，测定菜籽粕中单宁的含量，结果如图。下列相关叙述错误的是（）

A . 菜籽粕与麸皮为微生物提供碳源和氮源 B . 接种后需对培养基进行高压蒸汽灭菌 C . 黑曲霉菌对单宁的去除效果最为理想 D . 实验所用菌种均有细胞壁但成分不同

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