尿素分解菌的分离与计数 知识点题库

（1） 从土壤中筛选酸性脲酶生产菌，其培养基的主要成分有葡萄糖、尿素、琼脂等，从功能上分析，该培养基属于培养基。该培养基的氮源来自。

（2） 筛选和纯化酸性脲酶生产菌常用的两种接种方法是和。配制浓度梯度为10^-1的系列稀释液时，需用移液管将1mL菌液移入盛有mL蒸馏水的试管中。

（3） 对同一浓度的酸性脲酶生产菌稀释液，分别用血球计数板计数和稀释涂布平板法计数，若不存在实验误操作，则前者的数量（多于／等于／小于）后者，其原因是。

（4） 若用海藻酸钠固定含酸性脲酶的细菌时，应将海藻酸钠溶液和细胞混合滴入溶液中。右表是不同浓度海藻酸钠形成的凝胶珠状况，从表中看出，海藻酸钠的浓度应选用g／dL。若利用固定化酶技术，它的优点是。

海藻酸钠质量浓度（g/dL）	凝胶强度	凝胶气泡量	成球难度	凝珠形状
1.0	中	没有	较易	扁圆形
2.0	中	少量	易	圆球形
3.0	强	较多	稍难	有托尾
4.0	强	大量	难	难成球形

（1） 图中选择培养基应以为唯一氮源；鉴别培养基还需添加作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色．

（2） 在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191．

该过程采取的接种方法是，每克土壤样品中的细菌数量为×10⁸个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较．

（1） 下图是利用法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。

（2） 分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O。若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述成分，并加入物质，以补充源。

（3） 纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 、。

（1） 要从土壤中分离目标菌，最关键的实验操作步骤是，这样做的理由是。

（2） 为筛选尿素分解菌而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外，还包括水、碳源和。

（3） 接种尿素分解菌后的培养基需要倒置培养，原因是。三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则1g土壤样本中的活菌数为个。

（4） 鉴别培养基中是否存在尿素分解菌时，可在培养基中加入|指示剂；如果有尿素分解菌存在，则培养基中该菌落的周围会出现色。

（1） 材料Ⅰ：随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。请回答：

①从物理状态来看CMC平板属于培养基。富集培养后的菌种常采用稀释涂布平板法或法接种于CMC平板，培养一段时间后，可根据菌落特征初步鉴定并挑取产纤维素酶菌株XZ33。

②诱变选育高产纤维素酶的菌株时，通过向培养基中加入刚果红染液筛选出与菌落直径比大的菌落。

③下图是筛选获得菌株UV－Co16过程中⁶⁰Co－γ辐照剂量与致死率和正突变率(符合生产需要的突变菌数占诱变后活菌数的比例)的关系。实验结果表明，用⁶⁰Co－γ射线诱变处理时合适的辐照剂量为。

（2） 材料Ⅱ：尿素是一种重要的农业氮肥、但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某课题小组从土壤中分离能够分解尿素的细菌并进行计数的过程如下图1所示，图2是乙中的培养基配方。

④图2所示培养基为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是。图1中甲培养基与乙培养基的成分相比，唯一的区别是甲中培养基无琼脂。在涂平板前需要对甲中的菌液进行稀释，如何确定样品的稀释操作是否成功？。

⑤甲、乙培养基都是选择培养基，如何确定该培养基能够对土壤中微生物起到筛选作用？。

⑥称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌个。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，除了上述的活菌计数法外，也是测定微生物数量的常用方法。

（1） 土壤中的细菌之所以能将尿素分解，是因为细菌能合成。因此， 图中选择培养基应以为唯一氮源，尿素会被分解成，使培养基的碱性增强。鉴别培养基还需添加作指示剂，分解尿素的细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色。

（2） 制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后、分装前，要进行的是和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是。

（3） 为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是。

（4） 现将 10mL 的尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取 0.1mL 稀释倍数为 10⁵的样液接种到 5 个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为 39、41、42、43、45，则 1mL 悬液中活菌数量为个。