第1节重组DNA技术的基本工具知识点题库

Ti质粒上有T-DNA，这种DNA可以转移到受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。这种质粒存在于 ( )

A . 大肠杆菌 B . 土壤农杆菌 C . 酵母菌 D . 苏云金芽孢杆菌

基因工程中用来修饰改造基因的工具是（）

A . 限制酶和DNA连接酶 B . 限制酶和水解酶 C . 限制酶和运载酶 D . DNA连接酶和运载酶

对下图所示黏性末端的说法正确的是

A . 甲、乙、丙黏性末端是由两种限制性核酸内切酶作用产生的 B . 图乙中的酶切位点在A与G之间 C . 如果甲中的G发生突变，限制性核酸内切酶可能不能识别该切割位点 D . 构建重组DNA分子所用限制性核酸内切酶和DNA连接酶分别作用于a处和b处

若某种限制性核酸内切酶的识别序列是CCTAGG，它在A和G之间切断DNA。下图表示用该酶处理某基因后产生的片段。下列有关叙述正确的是（）

A . 该正常基因中有4个CCTAGG序列 B . 产生的DNA片段可用核糖核酸连接酶连接起来 C . 用该酶处理得到图示基因片段要水解3个磷酸二酯键 D . 若该基因某处有一个CCTAGC突变为CCTAGG，用该酶处理后将产生5个片段

科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白．以下有关基因工程的叙述错误的是（　　）

A . 在基因工程中，PCR技术可用于任何目的基因的获取，且能迅速获得大量目的基因 B . 基因表达载体中的启动子对于目的基因在块茎中的表达是不可缺少的 C . 应用DNA探针技术，可以检测转基因马铃薯植株中目的基因的存在及其转录产物 D . 用同一种限制酶，分别处理质粒和含目的基因的DNA，可用DNA连接酶连接形成重组DNA分子

回答利用农杆菌转化法培育转基因植物的相关问题：

（1）培育转基因植物过程的核心步骤是构建基因表达载体，其目的是使目的基因在受体细胞中，并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用．

（2）构建基因表达载体时，可利用DNA连接酶连接被限制酶切开的键．

（3）组成基因表达载体的单体是．基因表达载体中的启动子是识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过（填过程）合成mRNA．

（4）用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．若利用该片段构建基因表达载体，应选用下图中的何种Ti质粒？

（5）将受体细胞培养成植株需要应用技术，该技术的理论依据是

人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL﹣2）．该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解．研究人员将1L﹣2基因与人血清白蛋白（HAS）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有1L﹣2生理功能、且不易降解的1L﹣2﹣HSA融合蛋白，其技术流程如图．请回答：

（1）图中③过程的模板是．表达载体1中的位点应为限制酶Bg1Ⅱ的识别位点，才能成功构建表达载体2．

（2）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与1L﹣2蛋白对应的碱基序列不能含有，才能成功表达出IL﹣2﹣HSA融合蛋白．启动子是识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA．

（3）培养人外周血单核细胞时，需要将温度控制在 ℃，此外还需要通入（气体）．

（4）应用技术可检测酵母菌是否表达出IL﹣2﹣HSA融合蛋白．

（5）如果基因表达载体2导入的是优质奶牛的受精卵细胞，经胚胎培养后移入受体母牛子宫内可以存活的生理学基础是

有关基因工程的叙述中，错误的是（）

A . DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B . 限制性内切酶用于目的基因的获得 C . 目的基因须由运载体导入受体细胞 D . 人工合成目的基因不用限制性内切酶

在DNA测序工作中，需要将某些限制性内切酶的限制位点在DNA上定位，使其成为DNA分子中的物理参照点．这项工作叫做“限制酶图谱的构建”．假设有以下一项实验：用限制酶HindⅢ，BamH I和二者的混合物分别降解一个4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如图所示．

据此分析，这两种限制性内切酶在该DNA分子上的限制位点数目是以下哪一组？（）

A . HindⅢ1个，BamHⅠ2个 B . HindⅢ2个，BamHⅠ3个 C . HindⅢ2个，BamHⅠ1个 D . HindⅢ和BamHⅠ各有2个

下列四条DNA分子，彼此间具有互补粘性末端的一组是（　　）

A . ①② B . ②④ C . ③④ D . ②③

下面是3种限制性核酸内切酶对 DNA 分子的识别序列和剪切位点图（箭头表示切点）。相关叙述错误的是（）

A . 不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点，体现了酶的专一性 B . 限制酶 2 和 3 识别的序列都包含 6 个碱基对 C . 限制性酶 1 和酶 3 剪出的粘性末端相同 D . 能够识别和切割 RNA 分子内一小段核苷酸序列的酶只有限制酶 2

作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件之一及理由是（）

A . 具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达 B . 具有标记基因，以便为检测目的基因的表达提供条件 C . 能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选 D . 能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因

下列有关“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是（）

A . 菜花和哺乳动物成熟的红细胞均可作为提取DNA的材料 B . 向切碎的植物组织中加入适量清水，可获得含大量DNA的溶液 C . 将提取的丝状物溶解后，加入二苯胺试剂沸水浴，冷却后呈蓝色 D . 用玻棒快速搅拌滤液会使DNA获得量增加

薄荷可产生蚜虫报警信息素EβF，用于驱散蚜虫并吸引蚜虫的天敌。通过基因工程可制备含EβF合成酶基因的转基因抗蚜麦。请回答问题：

（1）若利用PCR技术获取EβF合成酶基因，在PCR反应体系中需加入、、原料及两种引物。提取到薄荷细胞中EβF合成酶的mRNA，则可用方法获取目的基因。
（2）研究者利用4种限制酶切割目的基因和质粒，各限制酶的识别序列和切割位点如下图所示。酶切后的产物连接时，目的基因上SalⅠ切割产生的末端应与质粒上切割产生的末端相连接。连接完成后，该连接点（能/不能）被这两种限制酶中的某一种切割。
（3）欲从个体水平上检测转基因抗蚜麦是否培育成功，常用的方法是。
（4）下列属于转基因抗蚜麦推广种植后引发的安全性问题的是（多选）。

A . 小麦不再感染蚜虫 B . 目的基因向其他生物扩散 C . 减少杀虫剂对环境的破坏 D . 改变现有生态结构

下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制备“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法错误的是（）

图片_x0020_100012

A . 制备“工程菌”时，将质粒A或重组质粒导入细菌B常用的方法是Ca²⁺处理法 B . 细菌B接种在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌 C . 细菌B涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 D . 目的基因成功导入的标志是受体细胞能够产生人的生长激素

科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin-Ⅱ）通过农杆菌导杨树细胞，培育成了抗虫杨树。图中Ap^r表示氨苄青霉素抗性基因，Ne^r表示新霉素抗性基因，箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。回答下列问题：

图片_x0020_100007

（1） EcoRⅠ识别的碱基序列是GAATTC，该序列中有个嘌呤。切割图中的目的基因时不能选择BamHⅠ，理由是。
（2） Ti质粒是基因工程中常用的运载体，从图中可以看出其作为运载体具备的条件有：（答出两点）；为确保目的基因的完整性及与载体连接的方向性，过程①最好选（限制酶）作用于含目的基因的DNA和Ti质粒，然后在DNA连接酶的作用下形成重组质粒。
（3）在过程③之前需要对农杆菌进行筛选，成功导入重组质粒的农杆菌表现为：在含有（抗生素）的培养基中能正常生长，在含有（抗生素）的培养基中不能正常生长。
（4）从过程④到⑤需要更换培养基，其主要原因是两者培养基所需成分中的比例不同。
（5）过程⑥可以从个体生物学水平对转基因杨树进行鉴定，鉴定方法是．

苯丙酮尿症是由pH基因编码的苯丙氨酸羟化酶异常引起的一种遗传病。已知人群中染色体上pH基因两侧限制性内切酶MspⅠ酶切位点的分布存在两种形式（图1）。一对夫妻婚后生育了一个患有苯丙酮尿症的孩子，②号个体再次怀孕（图2）。为确定胎儿是否正常，需要进行产前诊断，提取该家庭所有成员的DNA经Msp I酶切后进行电泳分离，并利用荧光标记的pH基因片段与酶切片段杂交，得到DNA条带分布情况如图3。下列叙述正确的是（　　）

A . ①号个体23Kb的DNA条带中一定含有正常pH基因 B . ②号个体23Kb的DNA条带中一定含有正常pH基因 C . 推测④号个体一定不是苯丙酮尿症患者 D . ④号个体为pH基因杂合体的概率为2/3

丙肝病毒（HCV）是一种RNA病毒，可用基因工程制备第三代HCⅤ抗体检测试剂，融合HCV抗原进行病原体感染检测。请回答下列问题

（1）将HCV多个抗原基因构成融合基因，进而构建融合抗原重组质粒，构建过程中需要的酶是。
（2）用处理大肠杆菌获得感受态细胞，然后将重组质粒转化进去。通过应用技术来检测细菌中是否产生，从而确认转基因过程是否成功。
（3）如果进行HCV核酸检测，需要使用HCⅤ特异性引物和HCV特异性荧光探针。检测过程是先将RNA合成cDNA，此时需要酶；然后通过技术扩增DNA片段，获得大量探针，从而检测出HCV—RNA。

科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草．下图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关的酶切位点．请分析回答下列问题：

（1）在该过程中，研究人员首先获取了抗盐基因（目的基因），并采用PCR技术对目的基因进行扩增，该技术需要的条件是引物、酶、原料、模板，该技术必须用Taq酶；然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具有目的基因、启动子和终止子之外，还需具有。目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是。
（2）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是，图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用酶对外源DNA，质粒进行切割。
（3）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是

大肠杆菌质粒DNA是基因工程的常用载体，其结构如图所示。下列叙述正确的是（）

A . ①②③共同组成胞嘧啶核糖核苷酸 B . 质粒的碱基含量遵循卡伽夫法则 C . 质粒分子中有2个游离的磷酸基团 D . 限制性核酸内切酶破坏化学键④

第1节 重组DNA技术的基本工具 知识点题库

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