第1节 重组DNA技术的基本工具 知识点题库

（1） PstⅠ的识别序列为﹣G^↓ACGTC﹣．如果用此酶切割DNA，则形成的能“粘连”起来两段DNA片段为．

（2） 构建重组Ti质粒时，需要酶和酶参与．将重组Ti质粒转入农杆菌时，可以用处理农杆菌，使重组Ti质粒易于导入．

（3） 培养基中的青霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长．若利用该培养基筛选己导入抗病基因的香蕉细胞，应使重组Ti质粒中含有，重组质粒中抗生素抗性基因可作为标记基因，原因是．

（4） 由导入目的基因的细胞培养成转基因抗病香蕉，采用的是技术．将培育的转基因抗病香蕉进行无性繁殖，在产生的后代中检测各单株的抗病性，结果发现有少数植株表现为不抗病，造成这一结果最可能的原因是．

（1） 步骤①和②中常用的工具酶是。

（2） 经过①和②步骤后，有些质粒上的基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。

（3） 步骤③是的过程。为了促进该过程，应该用处理大肠杆菌。

（4） 步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选。能在C中生长的大肠杆菌有种。

（5） 步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）上，请在图中相应的位置上圈出来。        

（1） 已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为。

（2） 若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶和切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到 酶。

（3） 应选择（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。

（4） 以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为工程。

（1） 图1为某DMD家系谱，相关基因用D、d表示。

①据图1判断DMD的最可能的遗传方式是。

②家系图中一定是致病基因携带者的是，理由是。

（2） 研究表明Ⅲ代患者的D基因部分碱基缺失，这种变异类型属于。为确定该家系Ⅳ代是否患DMD，可以采用的方法确定胎儿是否患有此种遗传病。研究还发现，多个DMD患者家系中D基因不同位置发生碱基替换、重复或缺失，说明此变异类型具有的特点。

（3） 真核生物基因的编码区中对应成熟RNA的序列被称为外显子，每个基因有多个外显子。大约13% DMD患者的D基因在外显子45和50之间的区域有突变，这会使外显子51及之后的序列表达异常，从而阻止正常D蛋白的产生。研究人员为探索这类DMD的临床治疗方案，对一种DMD模型犬进行基因编辑。该DMD模型犬缺失外显子50（△Ex50）导致外显子51中出现终止密码对应的序列。研究人员利用基因编辑技术CRISPR/Cas9对DMD模型犬外显子51进行切割，以期跳过外显子51，产生一个缩短但仍有功能的D蛋白，如图2。

①CRISPR/Cas9复合体由两部分组成，一部分是可以切割基因的“手术刀”Cas9蛋白，另一部分是gRNA。由图2可知，Cas9蛋白催化断裂的化学键是，gRNA的主要功能是通过原则特异性结合。

②将带有CRISPR/Cas9相应DNA序列的腺病毒注射进DMD模型犬的骨骼肌中，6周后，取注射过的肌肉组织进行检测，结果如图3，结果显示：。对肌肉进行检测发现，基因编辑犬的肌肉萎缩症状明显减轻，其他病症也显著缓解。

③研究人员的最终目的是修正全身的肌肉组织，需通过静脉注射将CRISPR/Cas9相应DNA序列的腺病毒运送到全身，CRISPR/Cas9相应DNA序列使用肌肉特异性启动子驱动表达，原因是。