一 植物细胞工程的基本技术 知识点题库

（1） 过程①是指，过程②多采用的方法是。

（2） 若从基因文库中获得基因tms，(基因组文库／cDNA文库)中获取的基因含有启动子，启动子的功能是。作为运载体的Ti质粒应含有，用以筛选含目的基因的细胞。

（3） 用PCR技术扩增目的基因，目的基因DNA受热变性后解链为单链，与单链相应互补序列结合，然后在的作用下延伸，如此重复循环。

（4） 长春碱杀死癌细胞的同时对正常细胞也有毒性作用，为降低长春碱对正常细胞的毒性，可以利用制备技术制成“生物导弹”进行靶向治疗。

（1） 塑料中含有的双酚A（BPA）可在生物体内富集，导致生物体内分泌系统失衡和紊乱。漆酶是一类蓝色胞外含铜多酚氧化酶，能使愈创木酚氧化产生红褐色物质，能有效降解BPA，广泛分布于白腐真菌中。科研人员欲从土壤中筛选和分离出高产漆酶的菌株，构建高效的BPA处理方法，实验思路如下。

Ⅰ.培养基的配制∶

PDA培养基∶土豆20%+葡萄糖20%+琼脂2%+水∶

G-PDA培养基∶ PDA培养基+0.04%愈创木酚+100μg/mL氨苄青霉素；

Ⅱ.菌种的分离∶

采集林下土样加入制成土壤悬液，利用法接种于G-PDA培养基平板上，将其于30℃恒温培养箱中培养，每隔24h观察等指标来衡量产漆酶的能力。

Ⅲ.粗酶液的制备∶

将分离出的菌株接种于液体产酶培养基中，30℃恒温振荡培养7d，培养液经离心后取作为粗酶液。漆酶的产量受发酵液初始pH、培养温度、 （至少两点）因素的影响．

Ⅳ.酶的应用∶

游离的漆酶的催化活性易受环境因素等影响，且难以，利用技术，可显著增强漆酶的利用率和对废水中BPA的去除效益。

（2） 自然界中只有极少数原核微生物能固氮，而大多数农作物不具备固氮能力，近些年来人们尝试通过植物细胞工程的两条途径来培养固氮植株。

Ⅰ.途径一∶

①获得目的基因∶若固氮基因片段是已知的，可用或者方法获得。

②形成重组DNA分子并导入受体细胞∶将固氮基因与载体DNA连接在-起，常选用作为该基因的载体使用，之后把形成的重组DNA分子导入植物细胞∶

③筛选与表达∶若受体细胞转入培养基中仍能继续生长发育，说明固氮基因已在受体细胞中表达；

④植物组织培养∶分离上述成功表达固氮基因的单个植物细胞，经过培养基中成分诱导，可发生类似受精卵经过卵裂、分化、和形态建成而发育成胚的过程，之后培养获得具有固氮能力试管苗．

Ⅱ.途径二∶将植物细胞经酶处理得到的原生质体与去壁后的固氮菌进行，再通过培养获得具有固氮能力的试管苗。

Ⅲ.上述两条途径获得的试管苗数量不够，需在初代培养后连续数代扩大繁殖，即过程。

（1） 过程①常用的酶是，细胞融合完成的标志是。

（2） 番茄和马铃薯的原生质体能发生融合的生物学原理是，诱导融合常利用的化学试剂是。

（3） 植物原生质体诱导融合后，在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察，根据细胞表面荧光的不同可观察到种不同的原生质体（只考虑细胞两两融合的情况），当观察到时可判断该原生质体是由番茄和马铃薯融合而成的。

（4） 若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞内有n条染色体，则“番茄—马铃薯”细胞在有丝分裂后期含条染色体。

（1） 核酸检测方法：目前，新冠病毒的实验室检测主要依赖核酸检测，包括以下两种方法：

①全基因组测序：病原体宏基因组测序(mNGS)是目前临床实践中最常用的病原体基因测序方法。mNGS技术首先需要将病毒RNA制备成测序仪可以识别和分析的DNA文库，需要将RNA产生的多种互补DNA片段，与连接后储存在中。然后使用测序仪对核酸序列进行检测。检测结果经生物信息学软件处理，最终展现出与病毒序列相关的信息。

②荧光PCR法：在常规PCR检测的基础上加入了荧光物质，通过监测发光信号来进行分析的一种方法。PCR利用的原理，实现目的基因的扩增，该过程首先需要设计引物，国家微生物科学数据中心公布了新冠病毒S蛋白的引物序列，已知其中一段引物的序列为CCCAACTTCTCCTCCTAGAAT，能否根据该引物序列设计出另一段引物的序列？（填“能”或“不能”），原因是。目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是。TaqMan是最为常用的一种具有荧光标记的核酸探针，能与目标基因特异性结合，利用原理是。

（2） 免疫学检测法：该技术基于血清中抗原和抗体的特异性结合进行检测。

①制备抗体：可以用到单克隆抗体的相关技术，其过程是取产生免疫反应的细胞与骨髄瘤细胞混合培养，使其融合，最后筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞可以在体外进行大规模培养或注射到，杂交瘤细胞的培养液中需要特殊的成分，通常需要加入等一些天然成分。

②制备抗原：对新冠病毒的主要结构蛋白基因进行扩增与克隆，构建基因的，导入大肠杆菌得到大量相关蛋白，纯化后就可以作为抗原进行检测。