第3节 发酵工程及其应用 知识点题库

（1） 从自然界获得纯种酿酒酵母菌的基本程序：配制培养基→接种→培养→观察记录→纯化培养。

采用平板划线法接种，开始接种时要灼烧接种环，目的是。

若葡萄汁中含有醋酸菌，在葡萄酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将酒精转变成醋酸？，原因是。

（2） 在腐乳的制作过程中，有多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是。产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的，可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。

（3） 利用纤维素解决能源问题的关键是高性能纤维素酶的获取。科学家利用培养基从土壤中选择出能分解纤维素的细菌，经过大量培养后可以从中提取纤维素酶。土壤中富含各种微生物，将土壤浸出液接种到特定培养基上，可得到能分解纤维素的细菌，实验室中获取纯净菌的常用方法有和。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、。

（1） 筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供 ，培养基灭菌采用的最适方法是 法．

（2） 图3是采用纯化微生物M培养的两种接种方法接种后培养的效果图．则获得图A效果的接种方法是 ， 图B效果的接种方法是  ．

（3） 若需人工大量克隆脂肪酶基因，可应用 技术，该过程需要的特殊酶是 ．

（4） 常用血球计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm）分两类，一类是每个计数室包括16个中格，每个中格包括25个小格，这种计数板抽样计数时只要统计四 个顶角的中格即可；另一类是每个计数室包括25个中格，每个中格包括16个小格，这种计数板抽样计数时除了统计四个顶角的中格外还要计数中央的一个中格． 在实验中如需定期测定培养液中微生物M的细胞数量，则在取出的样液中要立即加入固定液，其目的是 ．如果将样液稀释100倍，采用血球计数板计数时，观察到的计数室中细胞分布如图2所示，则培养液中微生物M的 细胞密度为 个/L．

（5） 研究人员拟将某目的基因导入微生物M 细胞中，为此需要选择合适的质粒作为运载体．图4所示X﹣1、X﹣2、X﹣3、X﹣4为四种相关质粒，其中Tc^r表示抗四环素的抗性基因，Ap^r表示青霉素抗性基因，E1和E2表示两种限制酶的识别位点．基因工程中限制酶作用的化学键是  ． 若将这四种质粒分别导入微生物M，然后将微生物M菌液分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上培养．则在这两种培养基上均不能生长的M细胞类型有 ．

（6） 已知Tc^r长度为1.5kb（1kb=1000个碱基对），Ap^r长度为0.5kb．如果X﹣1用E1酶切，产生0.5kb碱基片段和8.5kb碱基片段，那么质粒X﹣2用E2酶切后的片段长度为 对碱基

（1） 回答与微生物培养及应用有关的问题：

①对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从时开始计时。对于不耐热的液体培养基，一般可将其转人G6玻璃砂漏斗中，采用方式可较快地进行过滤灭菌。

②酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加的过程。某醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是。

③为筛选胞外A–淀粉酶分泌型菌种，一般从（A．果园树下   B．肉类加工厂周围   C．米酒厂周围  D．枯树周围）获得土样，用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加碘液，可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种，需挑选若干个比值大的菌落，分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心，取用于检测酶活性。

（2） 某农业生态工程示意图如下，回答下列问题；

①该农业生态工程体现的生态工程原理主要是。对该工程的经济效益分析，可从系统内部的投入和产出、、系统的有效贡献等三方面进行核算。

②若要提高该工程的经济效益，可采用农业生产的技术在桑基上再种植大豆，也可采用农业生态工程的技术放养适量的鸡鸭等动物以调整该工程的产业结构。

③某小组应用基因工程方法开展适用于该生态工程的抗虫植物改良研究。为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑的主要因素有（答出2点即可）。农杆菌介导法是目前植物转基因的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，，并将其插入到受体细胞的基因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中。

（1） 用葡萄制做的果酒酒味纯正，放置一段时间后，发现果酒带有明显的酸味，原因是。果酒发酵结束后，为方便后续使用，可将菌液转移到甘油中，与之充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中长期保存，此方法叫。

（2） 泡菜酸甜香脆，但其腌制过程中会产生亚硝酸盐。测定泡菜中亚硝酸盐含量的操作包括：配制溶液、制备、制备、比色。

（3） 制作果汁时常加入果胶酶，因为果胶酶可以将果胶分解成可溶性的使果汁澄清。由于溶液中的酶很难回收，为了降低成本，使果胶酶能被再次利用一般采用物理吸附法或法将其固定。

（4） 科研人员发现某种微生物中富含活性高的果胶酶，获得酶溶液后一般用法粗分离、用凝胶色谱法进行纯化，测定该果胶酶分子量最常用的方法是。

（5） 上图是纯化时样品的加入与洗脱示意图，从图中可以看出，正确的加样操作是用吸管小心的将样品加样，正确的操作次序是（填序号）。