基因工程的基本操作程序知识点题库

人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是（）

A . 大肠杆菌 B . 酵母菌 C . T₄噬菌体 D . 质粒DNA

下列哪一种方法不能用于检测目的基因是否成功导入或表达(　　)

A . 将目的基因直接打上放射性标记，导入受体细胞后用检测仪跟踪 B . 在含某种抗生素的培养基中培养导入了重组质粒的大肠杆菌 C . 利用相应的DNA探针与受体细胞DNA分子进行杂交 D . 提取受体细胞蛋白质，利用抗原—抗体特异性反应进行检测

基因工程常用的受体细胞有 ( )
①大肠杆菌 ②枯草杆菌 ③支原体 ④动植物细胞

A . ①②③④ B . ①②③ C . ②③④ D . ①②④

我国上海研究所合成一种具有镇痛作用而又不会使病人上瘾的药物——脑啡呔多糖（类似人类中的糖蛋白）。如要采用基因工程和发酵技术让微生物来生产脑啡呔多糖，应选哪种微生物为受体细胞

A . 大肠杆菌 B . 酵母菌 C . T4噬菌体 D . 大肠杆菌质粒

基因工程的操作步骤：①使目的基因与运载体相结合，②将目的基因导入受体细胞，③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求，④提取目的基因。正确的操作顺序是(　　)

A . ③②④① 　　 B . ②④①③ C . ④①②③ 　 D . ③④①②

基因工程的正确操作步骤是（　　）

①使目的基因与运载体结合　　

②将目的基因导入受体细胞

③目的基因的表达和检测

④提取目的基因．

A . ③②④① B . ②④①③ C . ④①②③ D . ③④①②

（1）基因工程的基本步骤是

（1） a．，b．目的基因和运载体结合，c．将目的基因导入受体细胞，d．．
（2）人类遗传病是由于遗传物质改变引起的基本，包括、和．遗传病监测和预防的手段有和等．
（3）沃森和克里克提出DNA的分子结构是，克里克提出的中心法则是．
（4）神经调节的基本方式是；一个完整的反射弧包括，传入神经，，传出神经，效应器五部分．
（5）神经元兴奋是的膜电位是．兴奋在神经纤维上传导的方向是．两个神经元相联系的结构是，在该结构中传递兴奋的物质称为．

下列有关基因工程操作的叙述中，正确的是（）

A . 用同种限制酶切割载体与目的基因可获得相同的粘性末端 B . 检测到受体细胞含有目的基因就标志着基因工程操作的成功 C . 以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同 D . 用含抗生素抗性基因的质粒作为载体是因为其抗性基因便于与外源基因连接

如图中的供体DNA中含有无限增殖调控基因，该基因能激发动物细胞的分裂，图示是利用该基因制备新型单克隆抗体的过程，相关叙述正确的是（）

A . 经酶A处理后Ⅰ与质粒具有相同的黏性末端 B . 酶B是连接氢键和磷酸二酯键 C . 载体必须具有目的基因 D . 将目的基因导入动物细胞最常用的方法是农杆菌转化法

在基因工程中，若受体细胞是细菌，则用来处理该细菌以增强细胞壁通透性的化学试剂是（　　）

A . 氯化钠 B . 聚乙二醇 C . 氯化钙 D . 二苯胺

下列关于基因文库的说法，不正确的是（　　）

A . 基因文库指含某种生物全部或部分基因的受体菌群 B . 基因文库包括基因组文库和部分基因文库 C . 基因文库的构建过程中需要用到限制酶和DNA连接酶 D . cDNA文库可以进行物种间的基因交流，基因组文库不可以

下列有关基因工程技术的不正确叙述是（　　）

A . DNA重组技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体 B . 所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C . 选用细菌作为重组质粒的受体细胞与细菌繁殖快有关 D . 只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达

苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导人棉花细胞是否已表达，其检测方法是（）

A . 是否能检测到标记基因 B . 是否有抗生素抗性 C . 是否能分离到目的基因 D . 是否有相应的性状

回答下列（1）（2）小题：

（1）柑橘汁在国内外市场上是最受人们欢迎的饮料之一。其大致的生产工艺流程如下：柑橘→选果与洗净→榨汁→过滤→果汁的调和→脱油和脱气→加热杀菌→装填和冷却。
Ⅰ.为提高柑橘的出汁率，榨汁时一般采用以下两种处理方式：一是加处理，分解果肉组织中的果胶物质，提高出汁率；二是处理，使细胞原生质中的蛋白质凝固，改变了细胞的半透性，从而提高出汁率。

Ⅱ.果汁中含有3%～5%的果肉浆能给予果汁良好的色泽和浊度，但过量会使果汁粘稠化。检测柑橘汁中果肉浆含量是否合格，可采用比浊法，需要先绘制果肉浆含量与光密度值关系的，再通过测定样品柑橘汁的进行计算。

Ⅲ.工业生产中的果汁在装填之前需杀菌处理。柑橘的果汁pH一般都较低，因此杀菌时主要以为杀菌对象。在微生物的分离、计数过程中，常采用法接种，计数过程中统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为。
（2）从西非热带植物果实中提取的甜味蛋白质Brazzein是一种高甜度、低热值的新型非糖甜味剂。但是由于受到产地种植的限制等，难以实现Brazzein的大量生产。近几年人们引入生物工程方法获得甜味蛋白。如图是科学家培育能生产甜味蛋白质Brazzein乳腺生物反应器的过程，请回答相关问题：

Ⅰ.甜味蛋白质Brazzein基因，可采用PCR技术进行大量扩增，但前提是。过程①可采用动物病毒转染法，利用携带目的基因的病毒感染胚胎干细胞，实现对胚胎干细胞的。

Ⅱ.过程③通常从雌性小鼠的中获取囊胚。过程④是将胚胎干细胞显微注射到小鼠的囊胚腔内形成嵌合体囊胚，将不同来源的基因转移、组合到嵌合体中，利用这一种方法可以解决的困难。

Ⅲ.过程⑤中要对受体小鼠进行处理，得到的嵌合体小鼠的毛色为。

Ⅳ.鉴定嵌合体小鼠是否成功表达甜味蛋白质Brazzein，可以利用原理对小鼠乳汁中的特异性蛋白进行检测。

阿尔茨海默病是一种持续性神经功能障碍，患者脑部大多有β-淀粉样蛋白（Aβ）沉积形成的斑块且患者神经元会发生“过劳死”。淀粉样前体蛋白（APP）的酶切片段被分泌到细胞外发挥功能，其中一段会形成Aβ，因此以往研究更多关注在Aβ上。然而针对Aβ研发的药物在近年均被证明无效，为寻找阿尔茨海默病的新治疗途径，研究者希望通过实验了解APP其他酶切片段（比如sAPPα）的生理功能。

（1）由于APP蛋白集中表达于神经元突触部位，研究者推测，分泌的sAPPα可能与突触部位细胞表面的结合，进而影响神经调节。经过筛选，发现sAPPα能与GABA_BR蛋白结合。为确定sAPPα与GABA_BR蛋白的结合区域，研究者分别构建了含、编码GABA_BR不同亚基的目的基因、一段特殊多肽（HA）的基因以及终止子的，转入细胞。
（2）将sAPPα加入实验组转基因细胞的培养基中一段时间，去除培养基，利用特异性荧光抗体可分别标识出细胞膜上的GABA_BR蛋白不同亚基及sAPPα。虽然GABA_BR蛋白不同亚基的抗体较难获得，但研究者可用共转入细胞的标识出细胞膜上表达的GABA_BR蛋白亚基，因为。根据图1实验结果，可知sAPPα仅与GABA_BR1a亚基相结合，判断依据是。
（3）为研究sAPPα对神经元电信号的影响，在体外培养自身不表达APP蛋白的神经元，并在实验组细胞的培养基中加入sAPPα，对比神经元电信号的变化（如图2），可知。
（4）进一步研究显示，sAPPα通过图3所示途径影响神经元之间的信号传递。请结合图3内容，解释sAPPα的作用机理。

（5）最终，研究者发现sAPPα中一个由17个氨基酸组成的多肽片段（APP 17mer）就具有sAPPα的生理功能。为验证该多肽在生物个体水平是否有效，有人设计了以下实验方案：

将同一批正常小鼠分为两组，一组为实验组，一组为对照组。

组别	实验处理	检测
实验组	给小鼠喂食人工合成的该多肽片段（APP 17mer）	分别检测实验组和对照组小鼠海马神经元的电信号
对照组	给小鼠喂食清水	分别检测实验组和对照组小鼠海马神经元的电信号

①请指出该实验方案存在的缺陷：。

②请改进本实验方案（写出实验组和对照组处理）：。

（6）本研究对阿尔茨海默病治疗的启发是。

薄荷可产生蚜虫报警信息素EβF，用于驱散蚜虫并吸引蚜虫的天敌。通过基因工程可制备含EβF合成酶基因的转基因抗蚜麦。请回答问题：

（1）若利用PCR技术获取EβF合成酶基因，在PCR反应体系中需加入、、原料及两种引物。提取到薄荷细胞中EβF合成酶的mRNA，则可用方法获取目的基因。
（2）研究者利用4种限制酶切割目的基因和质粒，各限制酶的识别序列和切割位点如下图所示。酶切后的产物连接时，目的基因上SalⅠ切割产生的末端应与质粒上切割产生的末端相连接。连接完成后，该连接点（能/不能）被这两种限制酶中的某一种切割。
（3）欲从个体水平上检测转基因抗蚜麦是否培育成功，常用的方法是。
（4）下列属于转基因抗蚜麦推广种植后引发的安全性问题的是（多选）。

A . 小麦不再感染蚜虫 B . 目的基因向其他生物扩散 C . 减少杀虫剂对环境的破坏 D . 改变现有生态结构

血清白蛋白对于治疗由肝炎引发的肝硬化和肝腹水等疾病具有显著疗效，之前只能从血液中提取。我国某生物科技公司利用农杆菌转化法将血清白蛋白基因导入水稻胚乳细胞，一段时间后成功提取的植物源重组人血清白蛋白，已通过临床前实验。下列说法中错误的是（）

A . 利用从血液中提取的血清白蛋白治疗疾病，存在使人感染传染病的隐患 B . 添加糖类化合物有利于吸引农杆菌进入水稻胚乳受体细胞 C . 构建植物源重组人血清白蛋白基因表达载体的目的是使农杆菌T一DNA中的目的基因转入受体细胞并稳定表达 D . 水稻胚乳细胞可以对植物源重组人血清白蛋白基因表达的初始翻译产物进行加工

下列事例中不属于克隆的是（）

A . 通过PCR获取目的基因 B . 用液体培养基扩大培养大肠杆菌 C . 花生种子发育成完整植株 D . 通过动物细胞培养得到相应的细胞

[选修3：现代生物科技专题]

利用某高致病性病毒特异性的VP40抗原蛋白来制备单克隆抗体的流程图如下，请回答：

（1）过程①利用质粒构建表达载体，质粒能够在受体细胞中，是其作为运载体的原因之一。
（2）过程②用处理大肠杆菌，使其处于感受态，感受态是一种的生理状态。在培养基中加入四环素，能获得含有目的基因的受体菌，原因是。可以利用检测VP40基因是否进入大肠杆菌。
（3）用特定的选择性培养基筛选出杂交瘤细胞。杂交瘤细胞的特点是。对杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测，最终获得抗体。在体外培养条件下，能无限增殖且能产生特定的抗体（3分）单克隆

2021年1月27日，是这场新冠疫情爆发以来的一个令人类感到刺痛的日子，这一天，全球新冠肺炎累计确诊病例超过1亿，死亡人数超过215万。数字是冰冷的，消失的却是一个个鲜活的生命，而疫苗正是终结病毒肆虐的一个有力武器。各国科研人员都在想方设法进行疫苗的研制，在科研攻关应急项目中并行安排了多条技术路线（见下图）。回答下列问题：

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（1）途径I和II都需要通过动物细胞培养获得足够数量的病毒株。除对培养液和培养用具进行灭菌外，在动物细胞培养中，通过来保证培养液的无菌、无毒。此外还要定期用酶处理细胞，使的细胞脱落形成细胞悬液。途径I与途径II生产的疫苗安全性更高的是途径。
（2）途径Ⅲ中，用到的酶至少有和Taq酶等4种酶的参与。为检测步骤⑦所表达的蛋白与病毒抗原蛋白是否有相同的免疫反应特性，可用工程菌表达的蛋白与进行杂交实验。
（3）途径IV生产的DNA疫苗直接注入人体后，在人体细胞中表达出的会引起机体产生免疫应答。该疫苗的产生主要应用的现代生物工程技术是。

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