基因工程的基本操作程序知识点题库

基因工程的过程不包括（　　）

A . DNA连接酶将目的基因末端和质粒末端的碱基连接起来 B . 限制酶用于基因库的构建 C . 目的基因通过运载体导入受体细胞 D . 检测目的基因是否已成功表达

从基因文库中获取目的基因的根据是（）

A . 基因的核苷酸序列 B . 基因的功能 C . 基因的转录产物mRNA D . 以上都是

基因工程的操作步骤包括：①目的基因与运载体结合 ②将目的基因导入受体细胞 ③目的基因的表达与检测 ④提取目的基因。其正确的操作顺序是：（）

A . ④①②③ B . ②④①③ C . ③②④① D . ③④①②

下列有关基因工程操作的叙述，正确的是（　　）

A . 用同种限制性内切酶切割运载体与目的基因可获得相同的黏性末端 B . 以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同 C . 检测到受体细胞含有目的基因就标志着基因工程操作成功 D . 用含抗生素抗性基因的质粒作为载体是因为其抗性基因便于与外源基因连接

基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）

A . 人工合成目的基因 B . 目的基因与运载体结合 C . 将目的基因导入受体细胞 D . 目的基因的检测和表达

随着科学技术的发展，人们可以根据需求来改造生物的性状．如图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解，据图回答问题．

（1）在此过程中涉及到某些细胞工程技术，其原理有．

（2）在基因工程中，经常需要对②进行扩增，该过程需要用到的酶是．基因工程的核心是．检测②是否表达可以用

（3）从④到⑤的过程涉及到的技术是，把⑤送入⑥前需要对⑥进行的处理是．

（4）⑦是⑥的后代，那么⑦的遗传性状和最相似，原因是．

图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：

方案Ⅰ：抗冻蛋白基因烟草细胞→抗冻烟草

方案Ⅱ：A基因免疫过的B细胞→体外培养→单克隆抗体

方案Ⅲ：人的生长激素基因牛的受精卵→早期胚胎受体母牛→转生长激素牛

（1）基因工程的核心步骤是．方案Ⅰ中，将抗冻蛋白基因导入烟草受体细胞常用的方法是．从分子水平检测抗冻烟草是否培育成功的方法是：．
（2）推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是．
（3）方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素．人的生长激素基因在导入受体细胞前，基因的首段必须含有使其仅能在山羊细胞中特异性表达的．
（4）方案Ⅲ中的早期胚胎在移植入受体母羊子宫之前，必须对胚胎进行性别鉴定，一般是取处于时期的细胞进行检测．

许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ′基因（内含EcoRI的酶切位点），其编码的产物β﹣半乳糖苷酶在X﹣gal 和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色．基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如图所示．请据图回答：

（1）限制酶EcoRⅠ的识别序列和酶切位点是﹣G↓AATTC﹣，SmaⅠ的识别序列和酶切位点是﹣CCC↓GGG﹣．图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是．
（2）获得目的基因后，常利用技术在体外将其大量扩增．
（3）在构建基因表达载体的过程中，除了目的基因外，还必须有和复制原点和标记基因等．
（4）转化过程中，大肠杆菌应先用处理，使其成为细胞．
（5）菌落①②③中颜色为白色的是，原因是．
（6）菌落③中的目的基因是否表达，可采用的分子检测办法是．

基因工程的正确操作步骤是（　　）

①使目的基因与运载体结合　 ②将目的基因导入受体细胞

③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求 ④提取目的基因．

A . ③②④① B . ②④①③ C . ④①②③ D . ③④①②

如图为蛋白质工程操作的基本思路，请据图回答下列问题：

（1）目前蛋白质工程中难度最大的是图中编号所示过程，其原因是．
（2）实现③过程的依据有，由③得到的基因编码区的脱氧核苷酸序列有（答“一种”或“多种”），这是因为．这属于哪种获取目的基因的方法：．
（3）若相关蛋白质的核酸片段是从细胞质中获取的，则④过程表示．经过④过程得到目的基因，所采取的手段与基因突变相比最大的特点是．

目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是（）

①检测受体细胞是否有目的基因 ②检测受体细胞是否有致病基因

③检测目的基因是否转录出信使RNA ④检测目的基因是否翻译出蛋白质

A . ①②③ B . ②③④ C . ①③④ D . ①②④

下列关于基因工程操作步骤的叙述，错误的是(　　)

A . 用PCR技术扩增目的基因的过程需发生碱基互补配对 B . 两种DNA黏性末端的黏合完全是通过碱基互补配对实现的 C . 目的基因导入受体细胞过程不发生碱基互补配对 D . 目的基因表达过程要发生碱基互补配对

乙型脑炎病毒（JEV）是一种 RNA 病毒，病毒的 E 蛋白参与病毒复制过程。研究人员利用基因重组的方法构建了二种新型 JEV 疫苗：DNA 疫苗和 E 蛋白疫苗。图示主要流程。

如图表示N 质粒和成功导入 E 蛋白基因的质粒 EN。为筛选含 EN 的菌落，可用含不同抗生素：氨苄青霉素和四环素的平板培养基进行筛选，现得到 A、B、C 三类菌落，生长情况如表。（‘+’代表生长，‘-’代表不生长）

平板菌落	A	B	C
无抗生素	+	+	+
氨苄青霉素	+	+	-
四环素	+	-	-
氨苄青霉素+四环素	+	-	-

（1）过程①为；过程②所需要的酶是。
（2）研究发现：受体细胞为大肠杆菌或酵母菌时，所形成的 E 蛋白结构不完全相同。原因是。

A . 大肠杆菌无细胞核，酵母菌有细胞核可进行基因转录 B . 大肠杆菌无膜结构的细胞器，无法对蛋白质进一步加工 C . 两种受体细胞在基因表达时所使用的密码子不同 D . 两种受体细胞在基因表达时所遵循的碱基互补配对原则不同
（3）关于 DNA 疫苗的叙述，正确的是

A . 分子较小，结构较稳定 B . 能通过 PCR 技术增加生产量 C . 能激活机体产生特异性免疫 D . DNA 疫苗已广泛用于人工免疫
（4）表中无抗生素平板培养基的作用是。另三种培养基属于下列选项中的。
A．固体培养基通用培养基 B．固体培养基选择培养基

C．液体培养基通用培养基 D．液体培养基选择培养基
（5）据图和表判断，。

A . A 菌落细胞被导入了N 质粒 B . B 菌落细胞被导入 EN 质粒 C . C 菌落细胞未被导入任何质粒 D . 两种抗生素均能抑制 E 蛋白表达

内皮抑素是从血管内皮细胞瘤中分离出的一种内源性血管生成抑制因子，能特异性地抑制内皮细胞增殖和迁移。某小组为获得内皮抑素，构建分泌型内皮抑素基因表达载体，并在C₆细胞（大鼠源性胶质瘤细胞）中表达。具体操作如下：

（1）构建分泌型内皮抑素基因表达载体
①采用相关技术提取1日龄SD大鼠大脑半球组织中的总RNA，检测RNA质量和浓度。

②内皮抑素cDNA的获得：以上述提取的RNA为模板，通过过程获得cDNA，并利用PCR技术体外扩增cDNA。PCR技术中除需目的基因作为模板外，还需要的条件有和控制温度等。

③为避免目的基因和载体自身环化，酶切目的基因和载体时，可用酶切割，以保证目的基因两侧和载体上具有。
（2）目的基因在C₆细胞中表达（将目的基因导入C₆细胞中，并表达）
①培养C₆细胞时，为防止杂菌污染，可在培养基中加入一定量的。

②若要检测目的基因是否成功整合到受体细胞的DNA上，可采用技术。

③导入C₆细胞中的目的基因成功表达后，会使C₆细胞在大鼠体内的可能会受到抑制。

美国食品药品管理局于2018年5月24日宣布，经过基因改造的黄金大米可以安全食用。据此，饱受非议的黄金大米终于得到公众的认可。已知维生素A缺乏会导致夜盲症，β一胡萝卜素会在体内转变成维生素A．黄金大米是通过基因工程向水稻细胞转入三种酶基因，其中的酶A基因和酶B基因可使水稻胚乳富含β－胡萝卜素而呈现金黄色。回答下列问题：

（1）图示三种基因的本质区别是。构建上述基因组合，需用到的酶是。
（2）提取农杆菌的Ti质粒，将上述结构导入Ti质粒的相关片段中就可整合到水稻染色体DNA上，原因是。已知农杆菌对多数单子叶植物没有感染能力，那么如何使农杆菌感染单子叶植物水稻呢？。
（3）将成功导入上述基因的水稻细胞置于培养基上培养，经过两个过程可获得幼苗，幼苗在长大成熟后，所结种子的胚乳将富含。
（4）获得转基因动物需要利用基因工程和胚胎工程。将目的基因导入受精卵（基因能正常表达）得到重组细胞后，还需要和技术，才能使其发育成转基因动物个体。

下列有关基因工程的理论基础和技术发展的叙述，错误的是（）

A . 遗传密码的破译为基因的分离和合成提供了理论依据 B . 基因载体的发现为基因跨物种转移找到了运载工具 C . 限制酶和连接酶的发现为DNA的切割和连接创造了条件 D . PCR技术扩增目的基因的前提是已知目的基因的碱基序列

如图是耐盐小麦培育的过程，请回答下列问题：

（1） ①过程需要用到的酶是酶，处理的目的是。
（2） ③表示诱导不同，其使用的化学诱导剂一般是；杂种细胞形成的标志是。
（3）除了可以利用上述方法获得耐盐小麦外，还可利用基因工程获得某种植物的耐盐基因从而改良普通小麦。基因工程的核心步骤是。为了确定转耐盐基因小麦是否培育成功，既可用放射性同位素标记的作探针进行分子杂交检测，又可用方法从个体水平鉴定小麦植株的耐盐性。

羊绒是生长在山羊外表皮层的绒毛，属于稀有的特种动物纤维。绒山羊的毛角蛋白II型中间丝（KIFII）基因与其所产的羊绒质量密切相关。用生物工程技术能获得转KIFII基因的高绒质绒山羊，其简单流程如下图：

（1）在基因表达载体构建过程中，其组成除KIFII基因外，还必须有标记基因，标记基因的作用是，过程②中常用的方法将目的基因导入受精卵。
（2）图中⑥代表技术。过程⑥中，除了给予一定量的0₂维持细胞呼吸外，还需要提供CO₂气体以维持培养液的。
（3）过程⑦中胚胎在变体丙存活的生理基础是受体对移入子宫的外来胚胎不发生反应，为使代孕母羊与供体母羊生殖器官的生理状态相同，需用相关激素对代孕母羊作处理，进行过程⑦的最佳时期是。
（4）若要同时获得多只与此转基因母羊相同的羊，可对早期胚胎进行，操作若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意。
（5）若培养胚胎干细胞（ES），一般在培养皿底部制备一层胚胎成纤维细胞，目的是。

人体内的t－PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。通过基因工程技术可以大量制备基因工程药物t－PA。

（1）研究人员采用PCR技术可以获得大量t－PA基因，PCR的原理是。此外，大量获得t－PA基因的方法还有（答出两种）。
（2）高质量的DNA模板是成功扩增目的基因的前提条件之一，在制备DNA模板时，可以用高温处理的方法去除蛋白质，原因是。
（3）研究表明，为心梗患者注射大量t－PA会诱发颅内出血，其原因在于t－PA与纤维蛋白结合的特异性不高，若将t－PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。（注：如图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）请回答下列问题：
①改造t－PA蛋白你认为应该直接对蛋白质进行改造，还是对天然的t－PA基因进行序列改造，原因是？。
②如图所示，需选用限制酶XmaⅠ和切开质粒pCLY11，才能与t－PA改良基因高效连接。在基因工程的基本操作过程中，最核心的步骤是基因表达载体的构建，其目的是。
③应该选择不含的大肠杆菌作为受体细胞，以便在加入新霉素的选择培养基中筛选出导入质粒的大肠杆菌。筛选出的大肠杆菌菌落并非都是目的菌株，这时选择色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t－PA蛋白的工程菌株。

棉花是世界性的重要经济纤维作物，土壤盐分过高会对棉花的生产产生严重影响，因此筛选耐盐棉花品种成为棉花农业生产中急需解决的问题。径柳匙叶草液泡膜Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）有利于提高植物的耐盐能力，科研工作者将TaNHX2基因转移到棉花细胞内，获得了转基因耐盐棉花新品种。回答下列问题：

（1）科研人员在获得TaNHX2基因对应的核苷酸序列的情况下，利用DNA合成仪直接合成目的基因，该种获取目的基因的方法为。
（2）构建基因表达载体时，科研人员将TaNHX2基因整合到土壤农杆菌的Ti质粒上，一般用相同的限制酶切割目的基因和Ti质粒的片段，目的是。构建成功的基因表达载体应含有启动子、终止子、（答出三种）等结构。
（3）转化后的棉花细胞进行组织培养发育成完整植株，组织培养使用的培养基所含有的主要成分除了水、无机营养成分和有机营养成分外，还有（答出两种）等。
（4）为了检测技术成果，科研工作者在个体水平上的检测方法是。

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