基因工程的基本操作程序知识点题库

下列属于PCR技术的条件的是（）
①单链的脱氧核苷酸序列引物 ②目的基因所在的DNA片段 ③脱氧核苷酸
④核糖核苷酸 ⑤DNA连接酶 ⑥DNA聚合酶 ⑦DNA解旋酶

A . ①②③⑤ B . ①②③⑥ C . ①②③⑥⑦ D . ①②④⑤⑦

在基因表达载体的构建中，下列说法不正确的是
①一个表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子
②有了启动子才能驱动基因转录出mRNA
③终止子的作用是使转录在所需要的地方停止
④所有基因表达载体的构建是完全相同的

A . ②③ B . ①④ C . ①② D . ③④

（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤，其中的核心步骤是；

（2）若要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的上．植物组织培养的主要原理是植物细胞具有，具体过程是在和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株．

（3）在哺乳动物的核转移实验中，通过一定的措施将受体细胞激活，使其进行细胞分裂和发育，当胚胎发育到阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内．

（4）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项）：．

回答利用农杆菌转化法培育转基因植物的相关问题：

（1）培育转基因植物过程的核心步骤是构建基因表达载体，其目的是使目的基因在受体细胞中，并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用．
（2）构建基因表达载体时，可利用DNA连接酶连接被限制酶切开的键．
（3）组成基因表达载体的单体是．基因表达载体中的启动子是识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过（填过程）合成mRNA．
（4）用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．若利用该片段构建基因表达载体，应选用下图中的何种Ti质粒？
（5）将受体细胞培养成植株需要应用技术，该技术的理论依据是．

有关生物技术的叙述不正确的是（）

A . 植物组织培养过程发生基因选择性表达 B . 显微注射目的基因表达载体利用了细胞膜流动性原理 C . PCR技术可以扩增目的基因 D . 体内、体外培养杂交瘤细胞均可获得单克隆抗体

下列有关将目的基因导入受体细胞的相关叙述，正确的是（　　）

A . 将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是花粉管通道法 B . 植物的受体细胞可以是受精卵，也可以是叶肉细胞等体细胞 C . 基因枪法是将目的基因导入动物细胞中最为有效的方法 D . 将某种药用蛋白基因导入动物乳腺细胞中即可获得乳腺生物反应器

在药品生产中，有些药品如干扰素，白细胞介素，凝血因子等，以前主要是从生物体的组织、细胞或血液中提取的，受原料来源限制，造价十分昂贵，而且产量低，临床供应明显不足。自70年代遗传工程发展起来以后，人们逐步地在人体内发现了相应的目的基因，使之与质粒形成重组DNA，并以重组DNA引入大肠杆菌，最后利用这些工程菌，可以高效率地生产出上述各种高质量低成本的药品，请分析回答：

（1）在基因工程中，质粒是一种最常用的，它广泛地存在于细菌细胞中，是一种很小的环状分子。
（2）在用目的基因与质粒形成重组DNA过程中，一般要用到的工具酶是和。
（3）将含有“某激素基因”的质粒导入细菌细胞后，能在细菌细胞内直接合成“某（蛋白质类）激素”，则该激素在细菌体内的合成包括和两个阶段。
（4）在将质粒导入细菌时，一般要用处理细菌，以增大。
（5）获取目的基因的方法有、和。

生物技术及生命科学的应用。

下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。

（1）若图2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需将该基因与质粒重组后，通过显微注射法（方法）注入到羊的中，则发育成的羊（转基因羊）有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。该转基因羊的培育涉及的过程有____（多选）。

A . DNA 自我复制 B . DNA 以其一条链为模板合成RNA C . RNA 自我复制 D . 按照RNA 上密码子的排列顺序合成蛋白质
（2）转基因技术中通常用图1 中质粒作为载体，质粒的本质是。与转基因羊相比，克隆多利羊的诞生所运用的生物技术是，该技术的理论基础是。
（3）用图1中质粒和图2目的基因构建重组质粒，应选用两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过酶作用后获得重组质粒。
（4）若BamH I酶切的DNA 末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为。
（5）蛋白酶具有广泛的应用前景，所以常产业化生产，如果蛋白酶的产业化需要其活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的活性，则应选择图3中的（A/B/C）固定化工艺。

基因治疗的途径之一是从患者体内获得某种细胞，在体外将目的基因导入后，经筛选和扩大培养再重新输回患者体内。回答下列问题：

（1）目的基因在（设备）中扩增时，应加入的原料有。
（2）目的基因转移进入受体细胞前应构建基因表达载体，其目的是。
（3）为检测目的基因在受体细胞中是否转录，可用作探针，与从受体细胞中提取的mRNA杂交，若显示出，说明目的基因已转录。
（4）提外地培养患者细胞时，应按细胞所需营养物质的配制培养基，并保证被培养的细胞处于的环境，同时为细胞提供适宜的温度、pH和气体等条件；还要定期更换培养液，避免。

如图是运用生物工程技术培育“转基因试管牛”的图解。请回答下列相关问题：

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（1）图中①过程之前通常采用法对采集的良种公牛精子进行获能处理。精子和卵子在发生上的重要区别是哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的储备是在完成的。
（2）图中③过程通常选择发育到阶段的胚胎进行移植，移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是
（3）构建药用蛋白基因表达载体需要将药用蛋白基因与的启动子等调控组件重组在一起，通过方法导入到性染色体组成为的受精卵中。
（4）若得到的药用蛋白不稳定，在体外保存期短。为解决这一问题，可通过对药用蛋白基因进行来实现对现有药用蛋白的改造。

在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶核糖核苷酸的个数是（）

A . 540个 B . 8100个 C . 17280个 D . 0个

科学家利用耐盐碱植物中的耐盐基因，培育出了耐盐水稻新品系如图所示。下列说法不正确的是（）

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A . 阶段Ⅰ、Ⅱ分别采用DNA重组技术、植物组织培养技术 B . 对耐盐基因表达产物的检测可采用抗原—抗体杂交技术 C . 水稻细胞内检测到耐盐基因表达产物，并不能说明育种已成功 D . 可用抗生素抗性基因作为探针来检测细胞中是否插入了目的基因

从某高等动物浆细胞(L)中提取全部的mRNA，并以此为模板合成相应的DNA单链(L-cDNA)，提取来自同一个体的胰岛B细胞(P)的全部mRNA(P-mRNA)。下列叙述错误的是（）

A . P-mRNA与L-cDNA进行分子杂交，均能发生碱基互补配对 B . 限制酶能特异性识别DNA分子的某种特定核苷酸序列，破坏磷酸二酯键 C . 能与L-cDNA互补的P-mRNA中含有编码呼吸酶的mRNA D . 浆细胞不能分泌胰岛素是因为缺乏编码胰岛素的相关基因

[生物——选修3：现代生物科技专题]

Anti基因是小型猪器官表面抗原基因，人工合成的reAnti基因的模板链与Anti基因的模板链互补。科学家利用合成的reAnti基因培育出转基因克隆猪，用于解决人类器官移植时免疫排斥。

（1）利用PCR技术对reAnti基因进行扩增，其原理是，在构建基因表达载体时，用两种不同的限制酶切割reAnti基因和运载体DNA来获得不同的黏性末端，原因是。
（2）猪胎儿成纤维细胞培养过程中，需要用酶将组织分散成细胞悬液。培育转基因猪时，应使用技术将含有reAnti基因的表达载体导入猪成纤维细胞。再将该转基因猪的细胞核注入时期的卵母细胞中，构建重组胚胎。
（3）胚胎培养液中除了一些无机盐和有机盐外，还需要添加“两酸、两素”以及动物血清，其中的“两酸”是指。
（4）用技术检测出转基因克隆猪的细胞核DNA中含有reAnti基因，但器官表面不含有抗原，原因是。

幽门螺杆菌是一种很容易传染的细菌，尤其是家庭内部成员之间，发生交叉感染的概率很高。幽门螺杆菌感染与胃炎、消化道溃疡、胃癌等主要上消化道疾病密切相关。某高校研发的幽门螺杆菌疫苗为基因工程疫苗，其有效成分是该菌表面的一种蛋白质。请回答下列有关问题：

（1）细菌表面的蛋白质可作为，刺激人体的免疫系统产生相关生理反应。
（2）在疫苗的制备过程中，可通过细菌表面蛋白质的氨基酸序列推测出目的基因的序列，人工合成该目的基因，再利用技术对目的基因进行扩增。
（3）基因工程的核心步骤是的构建，该过程构建的产物中除了目的基因外，还必须有启动子、终止子和。
（4）目的基因进人受体细胞，并在受体细胞内稳定维持并表达的过程，称为。利用动物乳腺生物反应器生产该疫苗时，需用技术将目的基因导人动物的受精卵中，再利用胚胎工程将受精卵培育成转基因动物，若该转基因动物的乳腺细胞没有分泌出目标蛋白质，分析其原因可能是（答出两点即可）。

下图所示为农杆菌转化法示意图。据图请回答下列问题：

（1）基因工程的基本原理是。要获得图中的重组质粒过程用到的3种工具的本质是（填“都是蛋白质”或“蛋白质或核酸”或“都是核酸”）。
（2）图中外源基因的黏性末端的形成与酶的作用有关，基因工程中所用的目的基因可以是，也可以从中获得。
（3）为使外源基因在此植物细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的外源基因片段正确插入表达载体的之间。
（4）图中表示基因工程最核心步骤的是（写数字）；在基因表达载体中，标记基因的作用是。

利用动物乳腺生产产品的技术称为动物乳腺反应器技术。2005年青岛“崂山奶山羊乳腺生物反应器的研制”项目通过鉴定,该项目生产的药用蛋白具有表达效率高、成本低、安全性高、易于分离纯化的优点,可产生乙肝表面抗原及抗凝血酶Ⅲ等医药产品,造福人类健康。下图为利用生物技术获得生物这一新品种和抗虫棉的过程,据图回答:

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（1）在基因工程中,A表示,如果直接从苏云金芽孢杆菌中获得抗虫基因,①过程使用的酶区别于其他酶的特点是,B表示。
（2）在研究过程中,研究人员首先从相关基因组中获取了目的基因,并采用技术对目的基因进行了扩增,然后将目的基因与质粒等载体组合形成了重组载体。在重组载体的构建过程中需要的工具酶有、。
（3）基因表达载体的构建是基因工程的核心,一个完整的基因表达载体至少包括哪几部分?
（4）将目的基因导入受体细胞的过程中,在③过程中一般是采用方法;在②过程中一般采用方法,受体细胞一般是。

关于基因工程的叙述，错误的是（）

A . 利用体外DNA重组技术定向改造生物的遗传性状 B . 在细胞水平上设计施工，需要限制酶、DNA连接酶和运载体 C . 打破物种界限获得人们需要的生物类型或生物产品 D . 抗虫烟草的培育种植降低了生产成本，减少了环境污染

（1）回答与生物技术有关的问题：
Ⅰ.若用稀释涂布平板法计数乳酸菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的。为了能鉴别乳酸菌菌落，往往在配制培养基时加入碳酸钙，原因是。

Ⅱ.生产上用的果胶酶能催化果胶完全降解为，破坏了果胶的黏着性及稳定悬浮微粒的特性，有效降低黏度、改善压榨性能，提高出汁率，同时有利于后续的澄清、过滤和浓缩工序。果胶酶可来自等微生物。为提高生产效益，一般需要将果汁的pH调为（弱酸性／中性／弱碱性）。

Ⅲ.利用无菌培养的植物幼苗进行组织培养时，（需要／不需要）先将材料在化学药剂中浸泡一定时间。将幼苗带芽切段置于（A．LB培养基 B．MS培养基＋NAA/6-BA=1：10C．MS培养基＋NAA/6-BA=10：1 D．MS培养基＋NAA/6-BA=1：1）上可长成丛状苗。

Ⅳ.经过炼苗的幼苗移栽到实验室外前需要洗苗，目的是洗掉根部的琼脂，以免琼脂发霉引起烂根，洗苗时通常用（自来水／无菌水）。
（2）目前，利崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用蛋白取得重大突破，已成功获得经纯化的抗凝血酶III蛋白。下图为制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图，请回答下列相关问题。

Ⅴ.与崂山奶山羊相比，一般不选用小鼠作为乳腺生物反应器的主要原因是。

Ⅵ.为获取更多的卵细胞，过程①需要对供体母羊注射促性腺激素，使其。

过程②采集的精子需要放入培养液中培养，使其达到状态才能具备受精能力。

Ⅶ.过程③形成重组质粒所需要的酶是。过程④需将重组质粒注入受精卵内，而不是动物体细胞内，其原因是。

Ⅷ.在进行过程⑤之前，需取囊胚期的滋养层细胞做性别鉴定；随后对筛选的胚胎进行分割获得同卵双胎。胚胎分割时，要将囊胚的均等分割。若在转基因奶山羊D的羊乳中检测到，说明目的基因成功表达。

应用基因重组技术生产的促红细胞生成素（EPO）能促进红细胞的生成，临床上常用于治疗慢性肾功能衰竭导致的贫血症，作用机理图如下。下列叙述正确的是（）

A . 在治疗时，可以通过口服或注射的方式给药 B . 肾脏感知氧分压下降，引起EPO分泌增加的过程属于反射 C . 在应用基因重组技术生产EPO时，常以肾脏细胞为受体细胞 D . 运动员违规使用EPO能暂时提高运动成绩，也会增加血液粘稠度

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