蛋白质的提取和分离 知识点题库

（1） 榨取果汁的过程中，发现榨取的果汁非常浑浊，解决的方法是用果胶酶处理，该物质包括等（写三种）；用葡萄制做的果酒酒味纯正，放置一段时间后，发现果酒带有明 显 的酸味，原因是密封不严，醋酸菌进行有氧呼吸，将果酒转变成果醋，用反应式表示；果酒发酵结束后，为方便后续使用，可将菌液转移到甘油中，与之充分混匀后，放在℃的冷冻箱中保存，此方法叫做。

 

（2） 对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入，培养后如果pH升高，指示剂将变红，因为细菌合成的将尿素分解成氨，使培养基碱性增强。

 

（3） 已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、所带电荷的性质和数量情况如图所示。

①将样品装入透析袋中透析 12 h，若分子乙保留在袋内，则分子也保留在袋内。

②若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质，则分子移动速度最快。

③若将样品以 2 000 r/min 的速度离心 10 min，分子戊存在于沉淀中，则分子可能不存在于沉淀中。

 

（1） 在进行样品处理时首先要对红细胞进行洗涤，目的是。红细胞破碎后，通过法将血红蛋白从混合液中分离出来，图甲所示为分离结果。若红细胞洗涤次数过少，则图甲结果可能会。

（2） 图乙装置可用于过程。现有一定量的血红蛋白溶液，进行上述操作时若要尽快达到理想的实验效果，可以（写出一种方法）。

（3） 通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。凝胶色谱法是根据分离蛋白质的方法。加人SDS可以使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率完全取决于。

（1） 某造纸厂遵照环保部门的要求，通过革新工艺，用除尘装置收集到了大量的纸屑灰（含丰富的纤维素但不能再用于造纸）。请回答下列问题：

①某中学研究性学习小组欲从土壤中分离出能分解纤维素的微生物。你建议他们从的环境中获取该微生物。

②一般来讲，筛选纤维素分解菌的方法是法，然后采用平板划线法和法对样品中的微生物进行纯化。

③从已获得的能分解纤维素的样品中，可以通过颜色反应中来判断这些微生物分解纤维素能力的大小。

④请从环保和降低成本的角度，针对纸屑灰提出一种可行的变废为宝的办法。。

（2） 某屠宰场想提高猪血资源的附加值，决定对猪血资源进行深度开发利用。请你根据所学知识，提供技术帮助。

①从猪血中提取血红蛋白时，其中要对不同蛋白质进行分离。我们把根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，称为。从凝胶柱中首先分离出来的是相对分子质量比较的蛋白质。

②利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子分离的方法属于。

（1） 从植食性动物粪便中能分离出纤维素分解菌的原因是 ；而纤维素分解菌能产生纤维素酶，纤维素酶是由组成。

（2） 在对菌株进行鉴定和产酶条件的优化过程中，需将富集培养后植食性动物的粪便混合菌适当稀释后涂布于以作唯一碳源的选择培养基上，倒置放入37℃恒温培养箱中培养24h，在系列稀释操作中，用移液管使菌液与水充分混匀时所进行的操作是。

（3） 筛选获得纤维素酶高活性菌株3株，分别命名为A，B，C。在相同培养基上培养一段时间后，测得3种菌株的菌落直径与刚果红透明圈直径，结果如下表：

菌株编码	菌落直径（d）cm	刚果红透明圈直径（D）cm	D/d
A	3.53	5.53	1.57
B	2.96	6.72	2.27
C	1.86	4.86	2.61

由表可知，菌株纤维素酶的活性最强。

（4） 若将纤维素分解菌细胞内的酶提取出来后，采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定，与相对分子质量较小的蛋白质相比，其移动速度（填“较快”或“较慢”或“基本相同”），原因是。

（1） 在以淀粉为底物测定A₃酶活性时，既可检测淀粉的减少，检测应采用的试剂是，也可采用斐林试剂检测的增加。

（2） 在A₃的分离过程中可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度，通常会在凝胶中添加SDS，SDS的作用是和。

（3） 本实验中，研究人员在确定A₃的最适pH时使用了三种组分不同的缓冲系统，结果如图所示。某同学据图判断，缓冲系统的组分对酶活性有影响，其判断依据是。

（4） 在制备A₃的固定化酶时，一般不宜采用包埋法，原因是 （答出1 点即可）。

（1） M培养基若用于某真菌的筛选，则培养基中应加入四环素以抑制的生长，加入了四环素的培养基属于培养基。

（2） M培养基为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除碳源外还有。碳源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有（答出两点即可）。

（3） 从得到的上述真菌中分离、纯化某特定的酶，常用的方法是电泳法和凝胶色谱法。电泳法分离酶，影响电泳速度的因素有（答出两点即可）。凝胶色谱法最先分离出来的是分子量（填“大”或 “小”）的酶分子，原因是。

（4） 酶的活性指酶催化一定化学反应的能力，酶反应速度指。

（1） 实验思路：

①，分别取适量且等量加入各刻度离心管，编号为A、B、C……，置于不同的温度下预热20分钟；

②实验分组（用表格形式表示）：

③按上述分组，在相应刻度离心管中分别加入适量且等量，摇匀。

④一段时间后离心，弃上清液，加入GKN溶液少许，混匀，取少量悬液于载玻片上，对细胞染色后用血细胞计数板制片，并记录。

⑤对测得的数据进行统计分析。

（2） 分析与讨论：

①猪红细胞来源丰富，（能或不能）代替鸡红细胞悬液完成本实验，原因是。

②在100%PEG溶液条件下，出现细胞破碎无法计数的现象，原因可能是。

③一定温度范围内，随着温度上升，，促进细胞融合。

（1） 废渣养殖红头丽蝇得到的蝇蛆成虫除主要作为高蛋白饲料原料外，还可从提取的蛋白粉中通过凝胶色谱法或（答出一种即可）等技术分离出凝集索和抗菌肽等不同种类的蛋白质，以实现高产值利用。采用凝胶色谱法分离凝集素（分子量为80000 ~ 335000KDa）和抗菌肽（分子量为2000~7000KDa）时，先洗脱出来的是，理由是。

（2） 利用凝胶色谱法分离凝集素和抗菌肽，在装填色谱柱时，为了加速凝胶颗粒的膨胀，可以将加入洗脱液的湿凝胶用加热，这种方法具有的优点（至少答出三点）。

（3） 为了检测提取的抗菌肽纯度是否达标，常用法进行蛋白质的纯度鉴定，抗菌肽在凝胶中的迁移率主要取决于。