蛋白质的提取和分离知识点题库

在分离血红蛋白时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层，其中第3层是（）

A . 无色透明的甲苯层 B . 脂溶性物质的沉淀层 C . 血红蛋白的水溶液 D . 其他杂质的暗红色沉淀物

将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第2层是（）

A . 甲苯 B . 血红蛋白水溶液 C . 脂溶性物质的沉淀层 D . 其他杂质的沉淀

如图所示为从血红细胞中提取核糖体的大致过程，下列对该过程的叙述中，正确的是（）

A . 步骤（1）加入¹⁴C—氨基酸的目的是为了在步骤（5）中检测核糖体 B . 步骤（2）的目的是破坏细胞膜 C . 步骤（3）（4）的目的是分离细胞器或细胞结构 D . 该过程运用了渗透作用原理、同位素示踪、离心法、层析法

下列关于凝胶色谱法的原理及操作不正确的是（）

A . 是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法 B . 在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢，最后流出 C . 凝胶内部有许多贯穿的通道，其直径大小与被分离的物质分子的大小无相应关系 D . 一般情况，凝胶对要分离物质没有吸附作用，因此所有要分离的物质都应该被洗脱出来

根据现代生物技术的相关知识，回答下列问题：

（1）我们在用苹果泥作原料探究果胶酶催化反应的最适条件和最适用量时，通过来确定最适值的思想方法是不变的．此类实验的观测指标可以是．用葡萄制做的果酒酒味纯正，放置一段时间后，发现果酒带有明显的酸味，原因是密封不严，醋酸菌进行有氧呼吸，将果酒转变成果醋．果酒发酵结束后，为方便后续使用，可将菌液转移到甘油中，与之充分混匀后，放在 ℃的冷冻箱中保存．

（2）对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入，培养后如果PH升高，指示剂将变红，因为细菌合成的将尿素分解成氨，使培养基碱性增强．

（3）已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、所带电荷的性质和数量情况如图所示．

①将样品装入透析袋中透析12h，若分子乙保留在袋内，则分子也保留在袋内．

②若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质，则分子移动速度最快．

③若将样品以2 000r/min的速度离心10min，分子戊存在于沉淀中，则分子可能不存在于沉淀中．

（4）提取胡萝卜素常用有机溶剂萃取的方法，萃取的效率主要取决于，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响．将提取的胡萝卜素粗品用法进行鉴定，鉴定过程中需用作为对照．

相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的分离过程可表示为下列哪一项（）

A .

B .

C .

D .

在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是（）

A . 磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 B . 血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和 C . 防止血红蛋白被O₂氧化 D . 让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能

红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的功能主要是由血红蛋白完成的，血红蛋白的主要功能是携带O₂或CO₂ ，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白．根据材料回答下列问题．

（1）实验前取新鲜血液，要在采血器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液．加入柠檬酸钠的目的是．
（2）在对样品进行处理时，主要包括、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析等步骤．其中透析技术的原理是．
（3）同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速率的因素包括蛋白质分子的、以及分子的形状等．
（4）同学乙利用凝胶色谱法进行血红蛋白分离（如图一），他在操作中加样的正确顺序是，在执行图一中②所示操作时，色谱柱下端连接的尼龙管应该
（打开或关闭）
（5）图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种样品分离得到的结果，则图三中与图二中蛋白质P对应的是．

红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成。下图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题：

（1）血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有功能。我们选用动物的血液进行实验时加入柠檬酸钠的目的是。
（2）甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是；该操作目的是去除样品中。乙装置中，操作压一定，保证C溶液的流速(快或慢或一定)。
（3）用乙装置分离蛋白质的方法叫。
（4）最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行。
（5）还有同学将大肠杆菌破碎并提取得到大肠杆菌蛋白质，一同学利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的分子大小、以及分子的形状等。而另一位同学则利用乙图分离，待蛋白质接近色柱底端时，用试管连续收集流出液。先收集到的蛋白质与后收集到的蛋白质的区别是先收集到的蛋白质。

样品的加入和洗脱的操作不正确的是（）

A . 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B . 用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 C . 加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 D . 等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口

凝胶色谱法分离蛋白质中使用的凝胶是交联葡聚糖凝胶（Sephadex G75）,其中G、75的含义分别是（　　）

A . G表示凝胶的使用量,75表示加75 g水 B . G表示凝胶的交联程度,75表示需加热至75 ℃ C . G表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围,75表示每克凝胶及膨胀时吸水7.5 g D . G表示凝胶的膨胀体积,75表示每克凝胶膨胀后体积可达75 cm ³

血红蛋白的提取和分离一般分为四步，符合要求的是（）

A . 粗分离→样品处理→纯化→纯度鉴定 B . 粗分离→纯化→样品处理→纯度鉴定 C . 样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定 D . 纯化→纯度鉴定→粗分高→样品处理

羽毛的成分主要是角蛋白，是一类结构稳定、不溶于水的蛋白质，目前缺乏对其高效降解的处理方法。实验人员从废弃羽毛堆积处的土壤中升离筛选出具有高效降解羽毛角蛋白的细菌，请回答下列问题：

（1）筛选高效降解羽毛角蛋白的细菌需从废弃羽毛堆积处的土壤中取样，其原因是。
（2）筛选高效降解羽毛角蛋白的细菌的培养基中应加入作为唯一碳源，该培养基中还需要加入适量的K₂HPO₄和KH₂PO₄ ，其作用是，对培养基灭菌的常用方法是。
（3）角蛋白酶是羽毛降解菌的一种分泌蛋白，为了测定其角蛋白酶的活性，应让羽毛降解菌发酵，然后将发酵液离心，再从（填“沉淀物”或“上清液”）取样。为了将角蛋白酶和其他蛋白质分离，可用电泳法分离蛋白质，电泳法可以根据蛋白质分子的不同，将蛋白质分离。测定羽毛降解菌角蛋白酶活性的主要目的是。

某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”如下：

实验准备(配制缓冲液血细胞悬液)样品处理(洗涤、破碎、离心等)蛋白质粗分离(透析)纯化、纯度鉴定(凝胶色谱法、电泳等)

请回答下列有关问题：

（1）样品处理中红细胞的洗涤要用反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH＝7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是。
（2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是，若要尽快达到理想的透析效果，可以(写出一种方法)。
（3）电泳利用了待分离样品中各种分子的等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。
（4）一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示。由图可知携带者有种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是。

下面关于“血红蛋白提取和分离”的说法中，不正确的是（）

A . 采集血样后要高速短时间离心获得血细胞 B . 洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数 C . 在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白 D . 释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质初步分离

硒是一种生命活动必需的微量元素。亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，土壤中的一些富硒细菌可将其还原为红色单质硒。下图为土壤中富硒细菌的筛选和纯化过程。

请回答下列问题：

（1）若②中出现的现象，则说明培养基中的亚硒酸钠被富硒细菌还原。
（2）将细菌从②接种至③采用的方法是。
（3）亚硒酸钠被还原需要相关酶的催化。可采用法分离纯化还原亚硒酸钠酶，先从层析柱中洗脱出来的是相对分子质量（填“较大”或“较小”）的蛋白质分子。
（4）研究人员筛选出一种具有较强富硒能力的菌株，现欲通过观察菌落来判断菌株对亚硒酸钠的耐受值，请将下列实验补充完整：
①配制系列浓度梯度的亚硒酸钠（填“液体”或“固体”）培养基；

②向培养基中分别接种，在适宜条件下培养一段时间；

③观察菌落生长情况，的培养基对应的最高亚硒酸钠浓度即为该菌株的最高耐受值。

猪血红蛋白位于猪红细胞内，含有4条肽链。以下是分离及提取猪血红蛋白的过程，回答下列问题：

（1）在新鲜的猪血中加入按125∶1配成的0.85%NaCl溶液（生理盐水）和40%柠檬酸钠，混合液，此混合液的作用是。然后离心，弃去血清。再用生理盐水洗涤三次，用以除去杂蛋白。
（2）向盛有洗涤好的猪红细胞的烧杯中加入蒸馏水可释放血红蛋白，原理是。加入饱和（NH₄）₂SO₄溶液后，发现有红色沉淀析出，这个过程称为。经过滤可得到猪血红蛋白的粗蛋白。
（3）将猪血红蛋白的粗蛋白溶解在磷酸缓冲液中，用凝胶色谱柱层析纯化。磷酸缓冲液的作用是凝胶色谱法分离猪血红蛋白的原理是分子量较大蛋白质通过凝胶颗粒的间隙，路程较短，移动速度较快，先洗脱出来。
（4）将凝胶色谱柱层析纯化得到的猪血红蛋白用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。SDS带有强电荷，能覆盖蛋白质上的电荷，并使猪血红蛋白解聚为4条肽链。因此，电泳时蛋白质的迁移率完全取于分子。下图是电泳结果，结果表明分离得到的猪血红蛋白纯度较高，判断依据是，猪血红蛋白的分子量约为。

漆酶降解木质素能力较强，在纸浆生物漂白、废水处理、苯氧基类除草剂去毒等领域具有广泛的研究和应用价值。实际应用于生产的漆酶主要来源于白腐真菌，从白腐真菌中筛选出高产漆酶菌株对实现木质素的降解至关重要。请回答下列问题：

液体培养基：以木质素为唯一碳源。

固体培养基：主要成分有马铃薯浸出液、葡萄糖、琼脂、愈创木酚(漆酶可将其催化成一种红褐色物质)

（1）研究人员从不同环境地表上采集土壤、腐烂的树枝等接种到液体培养基，在28℃条件下摇床培养。
①液体培养基常采用的方法进行灭菌。摇床培养的目的是。

②取培养液1mL采用接种于固体选择培养基于28℃恒温箱倒置培养。实验结果见下图。

选择菌落作为高产漆酶菌株，理由是。
（2）实际生产中，通过培养白腐真菌获取的漆酶蛋白往往与其它物质混合在一起。因此，得到漆酶的粗提取物后，先要通过和法进行纯化，再通过鉴定漆酶的纯度。
（3）游离的漆酶稳定性差，在环境中易受温度、pH等因素的影响，且不易分离和回收，这在一定程度上限制了漆酶的工业化应用。请根据所学知识提出一项解决措施：。

如图表示对某蛋白质溶液进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果（相似于纸层析法分离色素），下列相关叙述不正确的是（　　）

A . 蛋白质上某些基团解离后可使蛋白质带电，电场中带电的蛋白质分子（或多肽）会向着与其所带电荷相反的电极移动 B . 电泳结果表明溶液中蛋白质可能有两种，但也可能只有一种 C . 蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度基本取决于其分子量大小 D . 蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度完全取决于其所带净电荷多少

地中海贫血症在我国南方发病率很高。临床上，可以通过从胎儿血液中提取、分离红细胞中的血红蛋白，采用技术手段进行鉴定，从而为胎儿地中海贫血的确诊提供实验证明，请回答下列问题：

（1）采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用离心，将离心后的下层红细胞液体倒入烧杯中，加入五倍体积的进行洗涤。
（2）将洗涤后的红细胞倒入烧杯后，加入和，使红细胞破裂释放出血红蛋白，经搅拌、离心、分层后获得血红蛋白溶液。随后将血红蛋白溶液装入透析袋透析12小时，其目的是，完成血红蛋白粗分离。
（3）粗分离的血红蛋白溶液中含有一些微蛋白（如下图，表示甲～戊五种蛋白质的分子量及电荷量，且五种蛋白质均只由一条肽链构成），若用凝胶色谱法进行血红蛋白的纯化，则图中移动最慢的是蛋白（填编号）。若将样品进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，则移动速度最慢的是蛋白（填编号），判断理由是。

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