固定化酶及其应用 知识点题库

（1） 在工业生产果汁时，常常利用果胶酶破除果肉细胞壁以提高出汁率。果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括(至少写出两个)等。

（2） 加酶洗衣粉是指含有的洗衣粉。对于衣服上的血渍或奶渍，清洗时不能使用开水，原因是。

（3） 酶反应速度可以用单位时间内、单位体积中来表示。影响酶活性的外界条件包括pH、等。 在探究温度或pH对酶活性的影响时，是否需要设置对照实验?如需要如何设置?。

（4） 工业生产中，若把酶固定在不溶于水的载体上可以被反复利用。一般来讲，酶更适合采用和物理吸附法固定化。

（1） 酶在化学反应中的作用机制是，细胞内的多数酶是在上合成的。技术适应于工业化生产的需要，便于在反应结束后对酶进行回收。

（2） 将酶固定化常采用的方法是和。采用固定化细胞时无须将酶从细胞内提取出来，这样可以减少酶活性的损失。常用的固定化细胞方法是。

（3） 实验操作中，固定化微生物细胞常用的载体有（答出1点即可），这些载体具有（答出1点即可）的特性。

（1） 植物芳香油的组成非常复杂，主要包括及其衍生物。提取橘皮精油时常采用压榨法，原因是。为了提高出油率，可先将橘皮用浸泡10h以上。

（2） 橘子中的柠檬苦素是引起果汁产生苦味的主要原因，利用球形节杆菌产生的柠檬酶处理可消除苦味。某生物实验小组将柠檬酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的氯化钙溶液中，使液滴形成凝胶固体小球，该固定化酶的方法称为。工业生产中，若要将小分子酶固定化，一般（填“适宜”或“不适宜”）采用该方法。与使用游离酶相比，工业生产中使用固定化酶的优点是。

（3） 利用橘子果肉制备甜橙果酒时，先要对甜橙榨汁并调整甜度，然后将调整好糖度的甜橙果汁放90℃恒温水浴锅内，其目的是。 若获得的发酵液中酒精浓度较低，而酵母菌的数量却很多，则导致该结果出现的原因可能是。

（1） 酵母菌产生酒精的场所是，培养酵母菌时，接种的方法有两种，分别是：和。培养酵母菌的培养基中含有水、无机盐、和等营养物质。

（2） 有人想利用酵母菌中的酶来直接酿酒，他设计了一个实验方案，将酵母菌磨碎，再利用凝胶色谱法分离出酶，分离的原理是。然后他想用包埋法将其固定，结果发现效果不佳，原因可能是。你建议他应采用方法将该酶固定。

（1） 某环保公司从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备了固定化菌株。

Ⅰ.从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或法，两种方法均能在固体培养基上形成。对分离的菌株进行诱变、和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖。

Ⅱ.固定化菌株的制备流程如下；①将菌株与该公司研制的特定介质结合；②用蒸馏水去除；③检验固定化菌株的。菌株与特定介质的结合不宜直接采用交联法和共价偶联法，可以采用的2种方法是。

Ⅲ.对外，只提供固定化菌株有利于保护该公司的知识产权，推测其原因是。

（2） 三叶青为蔓生的藤本植物，以根入药。由于野生三叶青对生长环境要求非常苛刻，以及生态环境的破坏和过度的采挖，目前我国野生三叶青已十分珍稀。

Ⅰ.为保护三叶青的多样性和保证药材的品质，科技工作者依据生态工程原理，利用技术，实现了三叶青的林下种植。

Ⅱ.依据基因工程原理，利用发根农杆菌侵染三叶青带伤口的叶片，叶片产生酚类化合物，诱导发根农杆菌质粒上vir系列基因表达形成和限制性核酸内切酶等，进而从质粒上复制并切割出一段可转移的DNA片段（T-DNA）。T-DNA进入叶片细胞并整合到染色体上，T-DNA上rol系列基因表达，产生相应的植物激素，促使叶片细胞持续不断地分裂形成，再分化形成毛状根。

Ⅲ.剪取毛状根，转入含头孢类抗生素的固体培养基上进行多次培养，培养基中添加抗生素的主要目的是。最后取毛状根转入液体培养基、置于摇床上进行悬浮培养，通过控制摇床的和温度，调节培养基成分中的，获得大量毛状根，用于提取药用成分。

（1） 请回答与微生物培养和筛选有关的问题：

聚乙烯（PE）由乙烯（CH₂=CH₂）聚合而成，是农用地膜的主要成分，因其难以被降解，废弃物常造成污染。下图为研究人员筛选PE降解菌的实验流程图。

Ⅰ.该实验应从的土壤中采样，并使用对土壤进行稀释，A组中添加PE为唯一碳源，选择培养的目的是。

Ⅱ.进行扩大培养时，将培养瓶应置于上进行培养，随后进行划线时，发现某个平板第四划线区域无菌落出现，其原因可能有。

Ⅲ.研究小组中有成员建议将筛选得到PE降解菌菌种与特定介质进行结合，形成固定化菌株，优点有（答出两点即可），由于微生物体积较大，不容易被吸附，固定该菌株一般采用法。

（2） 请回答与基因工程有关的问题：

Ⅰ.在转基因操作中，一般需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，是为了保证目的基因在受体细胞中。

Ⅱ.现发现有某种新型抗虫性强的玉米植株，通常采用的方法获取抗虫基因。用处理农杆菌使之处于感受态，即细胞能够从周围环境中摄取DNA分子，并且不易被细胞内的识别并切割的一种特殊生理状态。然后与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成实验。要进一步筛选转基因玉米植株是否具备抗虫性强的性状，需要，若某植株已成功导入了目的基因却没有抗虫性状，可能的原因是；若让筛选获得的抗虫性强的转基因玉米植株（假设只导入了一个抗虫基因）进行自交，子一代抗虫性强的植株中能稳定遗传的占。

（1） 利用蜜柚果肉可以生产果汁，为提高出汁率和澄清度，可向蜜柚汁中加入果胶酶将果胶分解为；生产果汁剩下的柚皮可用法提取精油，作为工业原料。

（2） 在利用蜜柚汁制作果酒的过程中，为了提高酵母菌的发酵效率，工作人员对酵母菌进行了固定化，过程如下：酵母细胞活化→①→配制海藻酸钠溶液→海藻酸钠溶液与酵母细胞混合→固定化酵母细胞。

上述流程中，①为配制溶液；溶化海藻酸钠时，要用加热，直至其完全溶化。

（3） 上述固定酵母细胞的方法称为法，而制备固定化淀粉酶则不用此法进行固定，原因是

（4） 在利用蜜抽果酒制作果醋的过程中，一工作人员又向发酵装置中添加一定量的蜜柚汁（不影响菌种的活性），检测发现乙醇的利用速率迅速下降，原因是。

（1） 分离分解纤维素的微生物时，将样品稀释涂布到以纤维素为唯一碳源的（填“选择培养基”或“鉴别培养基”）上培养，在长出菌落的培养基上用CR溶液正确处理，此时，产生纤维素酶的菌落周围将会出现。

（2） 若要对纯化了的分解纤维素菌种进行长期保存，可将菌种与灭菌的混合后在冰箱中保存。

（3） 随着科技的发展，许多酶可以从微生物中提取，目前，酶已经广泛用于各个领域，例如，可使用果胶酶和纤维素酶来解决制作果汁中存在的等不良问题。但酶容易失活，难回收，为了降低生产成本，提高产品质量，生产中常采用固定化技术，例：酵母细胞多采用 。判断固定化酵母细胞发酵是否成功的方法，一是观察凝胶珠的；二是观察发酵液是否产生气泡，同时闻到的气味。反复使用固定化酵母细胞时，要避免。

（1） 常采用法对筛选、培养微生物M的培养基进行灭菌；筛选产果胶酶的微生物M时，培养基应以作为唯一碳源，该培养基能分离目的菌株的原因是。

（2） 为获得均匀分布的单菌落，先将土壤悬液进行处理，然后将处理后的土壤悬液接种于（填物理状态）培养基上；该方法也可用于测定产果胶酶菌的数量，但测定的菌体数量通常比实际值，原因是。

（3） 提取和纯化的果胶酶在水溶液中很不稳定，且不利于工业化使用，因此宜采用固定化酶技术；固定果胶酶时，将海藻酸钠和果胶酶的混合液注入CaCl₂溶液后，形成凝胶珠；和直接使用酶相比，该技术的优点有（答两点）。