第一节 发酵工程的培养基 知识点题库

（1） 酵母菌和尿素分解菌的遗传物质彻底水解的产物（填“相同”或“不相同”）。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。

（2） 进行过程①和②的目的分别是和；图中弧线上的“？”的具体操作是。I、Ⅱ号培养基常用的灭菌方法是。

（3） 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂。培养后，若指示剂变就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌。

（1） 用于分离木霉菌种的培养基属于培养基．配制此培养基时，应加入作为唯一碳源．接种前，将培养基在适宜温度下放置适当的时间，观察培养基，以确定培养基是否被污染．

（2） 纯化木霉时，统计出0.2mL的稀释液在稀释倍数为10⁵的平板上的平均菌落数为40个，则每mL样液中的菌落数为个．用此法测定木霉数量，实际活菌数量要比统计的菌落数量，原因是．

（3） 探究pH对木霉降解毒死蜱活性的影响

①研究小组向不同pH的培养基中分别加入100mg/L 毒死蜱，5天后检测毒死蜱的残留量（图1）．由图可推知：在偏酸性的土壤中，．

②研究小组向不同pH的培养基中分别加入100mg/L 毒死蜱，再分别接种1mL木霉悬液，混合均匀，5天后检测毒死蜱的残留量（图2）．在此韭菜温室土壤中，若要提高木霉对毒死蜱的降解活性，可对土壤作何处理？．

（1） 该组同学采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为46、51和47。据此可得出每升水样中的活菌数为。

（2） 该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是。

（3） 该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液的的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高的利用率。

（1） 实验步骤：

①配制固体培养基，该培养基的碳源应为；除碳源外，培养基中还应包括等物质。

②用适当强度的紫外线照射野生菌株，其目的是。将经照射的野生菌株接种至已灭菌的培养基平板上，培养基的灭菌方法为。

③将平板放在适宜条件的培养箱中培养，平板应（填“正置”或“倒置”）。

④菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围的透明圈，的菌落就为初选菌落。

（2） 采用平板划线法接种时，为获得单个菌落，在划线时应进行的操作是。

（3） 选择出来的细菌经扩大培养后需要进行计数，采用稀释涂布平板法计数时是否需要设置空白对照组？；解释其原因：。

（1） 液体培养基中除了葡萄糖作为外,还应该含有。 

（2） 样品中还发现了CV101、CV103新品种,对其菌株的代谢差异进行分析发现,CV103对葡萄糖吸收率最高,代谢终产物是醋酸盐。进一步研究表明,CV101可以在过滤的培养过CV103的培养基中生长,据此作出的推测是。 

（1） 要从土壤中分离目标菌，最关键的实验操作步骤是，这样做的理由是。

（2） 为筛选尿素分解菌而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外，还包括水、碳源和。

（3） 接种尿素分解菌后的培养基需要倒置培养，原因是。三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则1g土壤样本中的活菌数为个。

（4） 鉴别培养基中是否存在尿素分解菌时，可在培养基中加入|指示剂；如果有尿素分解菌存在，则培养基中该菌落的周围会出现色。

（1） 纤维素分解菌的筛选

①从庄稼地、烂稻草堆中分离得到纤维素分解菌。由此说明寻找目的菌株的思路之一是。

②初步筛选的过程：在不含糖类的固体培养基上铺一张去除了淀粉的滤纸，再在滤纸上等距离地放9个小土粒，然后置于底部盛水的培养箱中培养几天。滤纸发生液化。滤纸去除淀粉的目的是，以滤纸的液化程度作为的标志。

③筛选到纤维素分解菌是混合菌，通过纯化得到的多种菌株单独存在时分解能力都较差，试分析原因：。

（2） 蛋白质分解菌的筛选

①取土样，用进行稀释，放在摇床上振摇一段时间，振摇的目的是使菌体。

②将土壤悬浮液接种在固体培养基上，通过测量判断菌株对蛋白质的分解能力。

③将初步筛选的菌株接种到以酪蛋白为唯一氮源的液体培养基中。控制摇床的转速和，振荡培养24h。

④测定酪蛋白的含量：已知酪蛋白与福林-酚试剂反应产生蓝色，与蛋白质的含量成正比，可用法定量。步骤如下：第一步。标准曲线的制作。用蒸馏水配制。与福林-酚试剂反应后，测定并制作以的标准曲线。第二步，样品的测定与计算。

（1） 火龙果致腐微生物菌株分离与纯化

称取25g自然条件下完全腐烂的红心火龙果，置于225mL无菌生理盐水中，振荡30min，取1mL稀释6个梯度（10¹~10⁶倍稀释），分别涂布于固体平板上，该接种方法称为，再将平板置于28℃条件下培养1～7d，挑取不同形态的单菌落分别在试管中培养，置于临时保存。

（2） 致腐菌回接火龙果实验

用酒精擦拭火龙果表面，其目的是。将不同的致腐菌依次制成菌液，将其回接到新鲜无腐烂红心火龙果上，同时以为对照组，晾干后置于室温条件下储藏，每隔3d进行观察和记录，最终选取致腐能力强的致腐菌，且培养成菌落。

（3） 致腐菌鉴定

对筛选得到的致腐菌的菌落初步从（答出2点）等方面进行形态学鉴定，之后利用分子生物学、生物信息学等分析方法进行鉴定后，发现一类是青霉属中的扩展青霉，另一类是附球属中的黑附球菌。扩展青霉和黑附球菌细胞结构的显著区别在于。

（4） 拮抗实验：研究发现，解淀粉芽孢杆菌上清液对青霉菌株有一定的拮抗抑制作用，为探究最佳拮抗浓度，请写出实验思路：。

（1） 下列常规微生物实验中用到的物品及其灭菌方法正确的是（填编号）。

编号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	涂布器	培养皿
灭菌（消毒）方法	干热	酒精	火焰灼烧	煮沸

（2） 称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液经培养后平均长出了128个酵母菌菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌个。

（3） 为了进一步提高酵母菌的产酶能力，可对分离所得的菌株采用射线辐照的方法育种，该育种方法依据的生物学原理是。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，假设有两个菌落产生的分解圈（底物被分解后产生的圆形区域）相同，应选择出直径（填“较小”或“较大”）的菌落进行纯化后即能获得降解脂肪能力强的菌株。

（1） 活性染料废水含盐量高、色度高，对环境污染严重，拟利用微生物进行水体污染治理。回答下列问题：
Ⅰ.为获得治理活性染料废水所需的耐盐微生物，取海滩土样10g于90mL无菌水中制成土壤悬液，在恒温摇床上振荡后，用取0.1mL土壤悬液接种到含高浓度盐的培养基中培养5天，目的是。
Ⅱ.上述培养后的菌液经后涂布到含印染废水的固体培养基中，37℃培养，选择的单菌落若干分别接种在含一定营养物质的印染废水中振荡培养。
Ⅲ.为检验菌种对废水脱色效果，分别以和清水作为对照，选择染料分子吸收率最高的光波长，取培养后的废水上层清液测定吸光度。吸光度与菌株的脱色能力呈相关。影响脱色效果的因素除温度、pH、菌种、接种菌量外，还包括等（答出两点即可）。
Ⅳ.上述对高盐印染废水实施减量、回收、再生、再循环的治理措施属于的生态工程。

（2） 回答下列关于转基因大豆生产白细胞介素－21的问题：
Ⅴ.大豆种子的蛋白质含量高，是天然的蛋白贮存空间，可利用转基因大豆作为生产白细胞介素－21等外源重组蛋白。
Ⅵ.将无菌大豆子叶与已成功导入白细胞介素－21基因的共培养一段时间后，转入添加和适宜配比生长调节剂的MS培养基中培养。为进一步确定目的基因是否成功导入，在试管苗阶段，从组织中提取 DNA，并通过核酸分子杂交或技术进行鉴定。除利用完整大豆植株生产白细胞介素－21外，也可通过培养获得特定细胞系以实现产物的工业化生产。
Ⅶ.除植物外，哺乳动物细胞也常用于生产白细胞介素－21在动物细胞培养过程中，当细胞发生贴壁和现象时，加入胰酶可使其脱壁分散，处理一段时间后添加血清以。

（1） 柚皮易焦糊，宜采用 法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过 除去其中的固体杂质．

（2） 筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或接种．对新配制的培养基灭菌时所用的设备是 ．实验前需对超净工作台进行 处理，对实验者的双手进行处理。

（3） 培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供 ． 

（4） 抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈．可通过测定透明圈的 来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果．

（1） 筛选分离出耐高温（42℃）的反硝化细菌所用的BTB培养基以为唯一氮源，对该培养基可以使用法进行灭菌。

（2） 待平板凝固后，应倒置放在超净台上，目的是。图中①②步骤将污泥样品接种到BTB培养基上使用的方法是。

（3） 接种好的培养基应该放在的环境中培养2~3天，然后挑选显色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。

（4） 若将获得的纯反硝化细菌菌株进行临时保藏，其操作及保藏的具体方法是。