第一节发酵工程的培养基知识点题库

对分解尿素细菌的初步筛选中，加入酚红指示剂的目的是（）

A . 指示剂变蓝能认定该菌能分解尿素 B . 对菌种进一步鉴定 C . 筛选分解尿素的细菌 D . 培养基中缺乏酚红作营养物质

组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，自身不能合成组氨酸,将其接种在缺乏组氨酸的平板培养基上进行培养，有极少量菌落形成。2-氨基芴是一种致突变剂，将沾有2-氨基芴的滤纸片放到上述平板培养基中，再接种组氨酸缺陷型沙门氏菌进行培养，会有较多菌落出现。以下叙述错误的是（）

A . 在接种前，2-氨基芴和滤纸片须进行灭菌处理 B . 沙门氏菌所发生的突变对其本身是有害的 C . 基因突变的可逆性与致突变剂是否存在无关 D . 此方法可以用于检测环境中的化学致突变剂

对分解纤维素的微生物选择培养时，应将锥形瓶固定在_____振荡培养一段时间，直到培养液变_ ___时为止．（）

A . 桌子上红色 B . 温箱里产生透明圈 C . 窗台上清澈 D . 摇床上混浊

伊红﹣美蓝培养基常用来鉴别大肠杆菌，其原理是（）

A . 大肠杆菌在该培养基中形成特定的菌落 B . 大肠杆菌能使培养基改变颜色 C . 大肠杆菌菌的代谢产物与伊红﹣美蓝结合，使菌落呈深紫色，并有金属光泽 D . 大肠杆菌能在该培养基中很好生活，其余微生物不能很好生活

物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。

（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是。
（2）在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如图所示）。如果要得到目标菌，应该选择菌落进一步纯化，选择的依据是。
（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即。
（4）该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶（酶E）。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明。

筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，实验结果见下表。（）

有关本实验的叙述，错误的是

A . 培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质 B . 筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布 C . 以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外 D . H/C 值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异

下列有关倒平板的操作叙述，错误的是（）

A . 不能将培养基溅到培养皿壁上 B . 将打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C . 将培养皿打开，培养皿盖放在桌子上 D . 感觉锥形瓶的温度刚刚不烫手时倒平板

近年来，网络外卖在我国迅速发展，外卖餐食的微生物污染状况也越来越多地受到人们的关注。研究人员通过实验探究了同种外卖餐食送达时的温度与其中的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的数量关系。请回答下列有关问题：

（1）测量送达餐食的温度时，应测量餐食（填“表面”或“中心”）部位的温度。
（2）通常采用固体培养基培养细菌并进行计数，在配制培养基时需加入作为凝固剂，并用法进行接种。
（3）检测金黄色葡萄球菌时，通常在培养基中加入一定量的NaCl，像这样允许特定种类微生物生长的培养基称为培养基。为避免培养基中的菌落数太多影响计数，可对样品进行适度的。为了保证结果准确，一般选择菌落数为范围的平板进行计数。统计的菌落数往往会比活菌的实际数目低，原因是。
（4）实验结果显示，送达温度与菌落数量呈负相关，因此送达温度较的餐食，合格率较高。

下表是一种细菌培养基配方，请回答下列问题：

（1）该培养基的葡萄糖为微生物的生长繁殖主要提供。
（2）该培养基属于______________培养基。

A . 液体 B . 固体 C . 鉴定 D . 选择 E . 天然
（3）如果要对培养基的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行。
（4）制备培养基的操作步骤是_________________。（用下列字母排序）
a.倒平板 b.计算 c.溶化 d.称量 e.灭菌

A . a→b→c→d→e B . e→b→d→c→a C . b→d→c→a→e D . b→d→c→e→a
（5）某同学用稀释涂布平板法测定一个土壤样品中的细菌数（取10克该土壤加90mL无菌水制成稀释液）。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中统计3个平板上的菌落数分别为：121、212、256，则每克该土壤样品中的菌落数为。
（6）分离土壤中分解尿素的微生物的实验流程包括：土壤取样、、样品涂布到培养基上、挑选。

某科研人员利用郫县豆瓣酱为材料筛选高产蛋白酶的霉菌,下列利用平板划线法筛选该菌株的做法,正确的是(　　)

A . 在每次划线前后都灼烧接种环的目的是防止杂菌污染 B . 接种霉菌后的培养基必须采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌 C . 筛选用的固体选择培养基中必须加入一定量的蛋白质 D . 对筛选的菌株计数时选择菌落数为30~300的平板进行计数

下列关于培养基的叙述的错误是（）

A . 配制细菌培养基一般用添加蔗糖的豆芽汁 B . MS 培养基中含大量的无机营养 C . 并非所有的培养基都需要经过高压蒸汽灭菌法灭菌 D . 菌种的暂时保存用斜面培养基

[生物——选修 1：生物技术实践]

2021 年 6 月 1 日起，江浙沪 Starbucks 所有门店将全面试用 Foopak 生物可降解饮品杯。该饮品杯经填埋处理后，能被微生物经分解作用完全降解，可替代传统塑料及普通部分降解饮品杯，从而避免“白色污染”。回答下列问题：

（1）从填埋 Foopak 生物可降解饮品杯的土壤中分离 Foopak 分解菌时，应先从土壤取样，并接种在液体培养基上进行选择培养，目的是；再将选择后的样品进行梯度稀释，接种到固体培养基上，需进行梯度稀释的原因是。
（2）在整个分离过程中无杂菌污染，培养基上出现多种菌落特征，最可能的原因是。
（3）在测定培养液中 Foopak 分解菌的数量时，需至少做三个重复实验。做重复实验的目的是，做重复实验的方法是。

苯酚是含酚工业废水的主要成分，具有致癌、致畸和致突变作用。某污水处理厂检测出要处理的废水中含有较高浓度的苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员欲从淤泥中筛选出能高效降解苯酚的菌株，筛选的主要步骤如下图所示，回答下列问题：

（1）培养基甲和乙营养成分相同，都要加入作为唯一的碳源，甲中还加入了使其与乙物理性质不同；甲、乙两种培养基按用途划分，均属于培养基。
（2）图中振荡培养的目的是。
将C培养基中的菌液稀释并涂布在平板上，经过一段时间的培养，在平板上长出一些形态、大小和颜色不完全相同的菌落，这说明。涂布平板后，通常要将甲倒置培养，目的是防止，还能防止培养基中的水分过快挥发。
（3）用涂布平板法统计笨酚降解菌的数目，为了保证结果准确，应选择菌落数为的平板计数。在统计菌落数目时，一定要选取菌落数目稳定时的记录数据作为结果，可以防止。
（4）分离纯化所得菌种如需长期保存可采用的方法。

水污染是全球性的环境问题，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA. PVA 与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑。

（1）要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌，应采用以作为唯一碳源的选择培养基，实验中还应设置对照组。将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。
（2）要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用直接计数。若将100mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释10⁴倍后，取0.1 mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160 个，空白对照组平板上未出现菌落。则100 mL原菌液中有PVA分解菌个，该方法的测量值与实际值相比一般会（填“偏大”“偏小”或“相等”）。
（3）要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入用于鉴别PVA分解菌。要比较不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株，一定时间后，通过测定来确定不同菌株降解PVA能力的大小。

判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是（）

A . 未接种的选择培养基 B . 未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C . 接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D . 接种了的选择培养基

图表示利用铁皮石斛新生营养芽诱导培育出的拟原球茎(简称PLBs)，在不同条件下生产生物碱的实验结果。下列叙述正确的是（）

A . 通常在培养基中添加葡萄糖用于调节渗透压 B . 选取的新生营养芽外植体需灭菌后再诱导培育 C . 黑暗条件不利于叶绿素的合成，光合作用无法进行 D . 光照条件下PLBs的重量与生物碱含量成正相关

杨梅果实风味独特，酸甜适中，具有很高的营养价值和保健价值。下图是制作杨梅酒和杨梅醋的流程图。请回答下列问题。

制取发酵液：向杨梅汁中加入白砂糖，将糖的质量分数调至8%，灭菌冷却 → 酒精发酵：接种酵母菌，恒温发酵 → 果醋发酵：加入酒精，接种醋酸菌 →取样检测：对发酵产物进行检测

（1）请写出酒精发酵的化学反应式：；用来检验酒精的化学试剂是。温度适宜时杨梅酒发酵时间较短，原因是。
（2）下图表示果酒发酵过程中，发酵液的糖度（葡萄糖的质量分数）和酒精度（酒精的体积分数）随时间变化的关系。发酵前24 h，糖度变化很小，酒精度上升很慢，其原因是。96 h后酒精度和糖度的变化都趋于平缓，其原因是。
（3）野生型伤寒沙门氏菌（his⁺）可合成组氨酸，某种突变体丧失了这种能力，必须在添加组氨酸的培养基上才能生长，称为组氨酸营养缺陷型（his^-），下图甲、乙为培养伤寒沙门氏菌时两种不同的接种方法。图甲和图乙的接种方法分别是（按顺序写）；若要培养his^-菌，则除了基础的营养物质外，还需要在培养基中加入。

中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值，工艺流程如图。

回答下列问题：

（1）为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有等。（答出两种方法即可）
（2）基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是。（答出两点即可）
（3）研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中可能是高密度培养的限制因素。发酵工程的中心环节是。
（4）菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌。

回答下列（一）（二）小题。

（1）
（一）有文章称单位面积手机表面的细菌比马桶按钮上的多。某校甲、乙两研究性学习小组通过如图所示实验展示调查结果。

实验使用的培养基，含有营养物质和。制备培养基时，应将pH调至。图中继续实验中可能包含的实验操作有、、。
（2）通过观察菌落的特征可知，手机屏幕和马桶按钮上都存在多种微生物。两研究性学习小组实验操作均正确且完全一致，但结果截然不同。你认为可能的原因是。
（3）实验中，两研究性学习小组采用的接种方法是。按图示操作取样固定实验员欲测定某手机屏幕的细菌数量，将10mL细菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1mL稀释倍数为10²的样品液接种到三个培养基上培养一段时间后，统计菌落数分别为38、40、42，则该手机屏幕的细菌数为个/cm²。
（4）（二）回答下列有关基因工程的问题：

I．研究人员将某细菌的抗虫基因C转入棉花细胞内，成功获得了抗虫转基因棉花，在一定程度上减少了杀虫剂的使用，减少了环境污染，提高了作物的产量和质量。
提取某细菌总RNA，经逆转录形成互补的DNA（cDNA），再利用PCR技术选择性扩增C基因的cDNA，PCR过程中DNA先后经历高温变性→复性→延伸过程，故反应体系中需加入酶。
（5）常用农杆菌与经后的外植体共培养一段时间完成转化，需先将C基因的cDNA插入到T质粒的T-DNA上并导入农杆菌，有利于。若要检测目的基因是否反向插入，（填“能”或“不能”）根据带标记的目的基因单链作探针的核酸分子杂交结果判断。
（6）
Ⅱ．基因编辑技术（CRISPR/Cas9技术）是一种对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，其原理是由一个向导RNA（sgRNA）分子引导Cas9蛋白到一个特定的基因位点进行切割（如图）。请据图回答：

从CRISPR/Cas9系统作用示意图看，能够行使特异性识别DNA序列并切割特定位点功能的分子是。一般来说，在使用基因编辑工具对不同DNA进行编辑时，应使用Cas9和（填“相同”或“不同”）的向导RNA进行基因的相关编辑。
（7） CCR5基因是人体的正常基因，其编码的细胞膜通道蛋白CCR5是HIV入侵辅助性T淋巴细胞的主要辅助受体之一。科研人员依据的部分序列设计sgRNA序列，导入骨髓造血干细胞中，构建sgRNA-Cas9复合体，以实现对CCR5基因的定向切割，变异的CCR5蛋白无法装配到细胞膜上，即可有效阻止HIV侵染新分化生成的从而有效减缓病症。

应用发酵工程和细胞工程的知识，回答下列问题：

Ⅰ．地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40％~60％能被土壤中某些微生物产生的纤维素酶分解利用。分离纤维素分解菌的实验流程为∶土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布培养→鉴别筛选→分离、纯化→菌种保存。

（1）纤维素分解菌的选择培养基配方如下∶（单位g）

纤维素粉	NaNO₂	KCl	Na₂HPO₄·7H₂O	KH₂PO₄	MgSO₄7H₂O	琼脂	水解酪素
5	1	0.5	1.2	0.9	0.5	15	0.5
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

该培养基属于（填“液体”或“固体”）培养基，培养基中Na₂HPO₄·7H₂O、KH₂PO₄的作用是（答出两点）。

（2）上述培养基可以选择分离出纤维素分解菌，若要通过实验验证该培养基确实具有选择作用，请简单说明实验设计方案并预期实验现象。
（3） A、B是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，A含有效成分X，B含有效成分Y。某研究小组拟培育同时含有X和Y的新型药用植物。为了培育该新型药用植物，可取A和B的叶片，先用酶去除细胞壁，获得具有活力的，再用合适的方法诱导二者融合，形成的融合细胞经过脱分化培养形成愈伤组织，然后经过再分化形成完整的杂种植株。这种培育技术称为。
（4）上述杂种植株含有个染色体组，该项技术在等方面展示出独特的优势。

第一节 发酵工程的培养基 知识点题库

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