灭菌技术知识点题库

为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验．

（1）配制好的培养基通常使用法灭菌．步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是．
（2）同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示．该同学的接种方法是，出现图B结果可能的操作失误是．
（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接人0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57．据此可得出每升样品中的活菌数为个．
（4）步骤⑤需要振荡培养，原因是．
（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是．

氧化硫硫杆菌（TT03)是一种化能自养细菌，它能将硫单质氧化为硫酸，常用于改良盐碱地，而盐碱地中的重金属离子会影响改良效果。以下是有关硫酸锌对TT03产酸量影响的研究：

试剂与仪器：蒸馏水，两种浓度的硫酸锌溶液，液体培养基，恒温摇床等。

（1）实验步骤：
第一步：在液体培养基中先加入等量硫单质、再分别加入等量蒸馏水和两种浓度硫酸锌溶液并标记。

第二步：对配制好的培养基进行。

第三步：各组接种。后放入恒温摇床中培养7天。

第四步：每天测定并记录各组的。

实验结果：如图所示。
（2）分析回答：
①TT03将CO₂和H₂O合成有机物所需能量来源于。

②培养TT03的液体培养基与培养大肠杆菌的液体培养基组成成分上最大的区别是。

③分析图可知，硫酸锌对TT03产酸的影响是。

农业生产上有一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解，长期使用会污染土壤。为修复被污染的土壤，可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌。已知该除草剂(含氮有机物)在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。

（1）微生物接种是微生物学研究中最常用的基本操作技术，该技术的核心是，应该在旁完成。图中B、C所示操作的目的是将聚集的菌种逐步。
（2）在选育过程中，应将土壤浸出液接种于以为唯一氮源的固体培养基上。为了筛选出高效的目的菌，可比较单菌落周围透明圈的大小。实验结果如图2显示的A～E五种菌株中，是最理想菌株。
（3）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是。对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目，原因是。

利用微生物分解玉米淀粉来生产糖浆具有广阔的应用前景。现有的野生菌株对玉米淀粉的分解效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。请回答下列问题：

（1）实验步骤：
①配制固体培养基，该培养基的碳源应为；除碳源外，培养基中还应包括等物质。

②用适当强度的紫外线照射野生菌株，其目的是。将经照射的野生菌株接种至已灭菌的培养基平板上，培养基的灭菌方法为。

③将平板放在适宜条件的培养箱中培养，平板应（填“正置”或“倒置”）。

④菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围的透明圈，的菌落就为初选菌落。
（2）采用平板划线法接种时，为获得单个菌落，在划线时应进行的操作是。
（3）选择出来的细菌经扩大培养后需要进行计数，采用稀释涂布平板法计数时是否需要设置空白对照组？；解释其原因：。

消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理( )

①皮肤 ②饮用水 ③牛奶 ④注射器 ⑤培养皿

⑥接种环 ⑦培养基 ⑧果汁 ⑨酱油 ⑩手术刀

A . ①②③⑧⑨ B . ④⑤⑥⑦⑩ C . ①②③④⑤⑥⑧ D . 以上全部

[生物——选修1：生物技术实践]Ag/TiO₂作为一种常见的半导体光催化剂，在可见光照射下不仅可杀灭饮用水中的细菌等微生物，降解水中的有机化合物，还能循环利用，因此被广泛使用。某研究小组制备了Ag/TiO₂空心微球，现欲探究不同载银量的Ag/TiO₂空心微球的杀菌性能。

（1）培养大肠杆菌：制备适宜大肠杆菌生长的培养基，将培养基等置于中灭菌20min；在无菌环境中倒平板，待平板冷凝后，将平板倒置，是为了和防止培养基水分过度蒸发。将大肠杆菌制备成菌悬液，分离纯化。
（2）杀菌性能检测：挑取菌落制成菌悬液，用(工具）接种于无菌平板表面，使其均匀生长，布满平板；用浸透了的小滤纸片（实验组）和浸透了的小滤纸片(空白对照），分别放在涂好菌的平板的不同位置；将平板置于恒温箱中培养一段时间，观察记录滤纸片周围的。

【生物技术实践】

现有两份培养基的营养构成如下表:

编号	成分
A	KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水
B	牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、蒸馏水

回答下列相关问题

（1）各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，从细胞中元素组成的角度考虑，阐述为什么大多数培养基需要提供氮源。B培养基中氮源是；A培养基只有能合成的细菌才能在该培养基上生长，因此该培养基属于选择培养基；从同化作用类型看，用A培养基培养的细菌属于。
（2） B培养基可以培养大肠杆菌，除考虑营养条件外，还要考虑、和滲透压等条件。在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行(消毒、灭菌）。
（3）培养大肠杄菌时，在接种前需要检測培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是。
（4）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的。

随着口罩需求的与日俱增，住建部对不同场所产生的废弃口罩提出了明确的处理要求。为加快废弃口罩的处理，某科研团队准备从土壤中筛选能高效降解一次性口罩（熔喷布）的细菌，请回答下列问题。

（1）居民小区、办公场所、商场产生的废弃口罩可作为生活垃圾中的其他垃圾进行收集转运。为避免环境污染和病原体的传播，废弃口罩必须先进行严格的处理。
（2）细菌大多分布在距地表约3～8cm的潮湿土壤层，因此土壤取样时，一般。熔喷布主要成分为聚丙烯纤维（PP，组成仅含有C、H两种元素），用于筛选的固体培养基除需加入经过处理的聚丙烯粉末外，还应加入。对培养基灭菌常用法。在接种到鉴别培养基之前，可以通过的方法增加目的菌的浓度。
（3）在培养基中加入能与PP结合而显色的染色剂，可使目的菌落周围会出现透明圈，如下图所示，D表示透明圈直径，d表示菌落直径。为保证筛选出的细菌分解PP的能力最强，应当选择的菌落作为目的菌群。
（4）已知目的菌分解PP需要多种酶的共同参与，工厂化降解PP时，常采用法来固定目的菌，采用该方法的原因。

回答下列（1）、（2）小题：

（1）回答与含油废水处理有关的问题：
Ⅰ.为处理含油废水，从土壤中筛选产脂肪酶酵母菌株，称取1.0g土壤样品溶于99mL无菌水中制成，经梯度稀释后，分别取0.1mL涂布在固体培养基上培养，其中10倍稀释液的培养基上长出了12个酵母菌落，则每克该土壤样品中约含酵母菌个。

Ⅱ.为了进一步提高酵母菌产脂肪酶能力，对分离所得的菌株进行辐射处理，处理后的酵母菌制成较稀浓度的悬液，这样做的目的是在培养时有利于获得。配制以油脂作为的培养基，经过灭菌后制成固体培养基。将悬液涂布在培养基上培养一段时间后，选择直径的菌落，纯化后获得突变菌株。

Ⅲ.为了便于工业化处理含油废水，可采用技术处理产脂肪酶酵母菌株。
（2）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：

Ⅰ.从水稻体细胞中提取总RNA，利用酶获得B基因编码蛋白的序列，将该序列和Luc基因（表达的荧光素酶能催化荧光素产生荧光）连接成的融合基因必须连接到表达载体的启动子和终止子之间，其中启动子是的结合位点。

Ⅱ.将重组载体导入农杆菌时，常用氯化钙处理农杆菌的目的是。处理后再将农杆菌转移到适宜培养液中培养一段时间，目的是。

Ⅲ.过程②利用了农杆菌的T-DNA片段，将目的基因到受体细胞的染色体DNA上，完成后需在培养基中添加对水稻愈伤组织进行脱菌处理。

Ⅳ.借助Luc基因的表达来完成第二次鉴定筛选，具体方法是。

Ⅴ.在植物克隆中，尽量选择的基因型。有研究人员将上述水稻愈伤组织反复扩增后再诱导，都以失败告终，原因是在后丧失细胞全能性的表达能力。

在发酵技术中要避免杂菌污染，下列相关叙述错误的是（　　）

A . 泡菜制作加食盐、白酒等调味品，可有助于防止杂菌污染 B . 通过控制发酵温度，可在一定程度上抑制杂菌污染 C . 与自然发酵相比，接种人工培养的菌种不易被杂菌污染 D . 制成的果醋和泡菜需经高压蒸汽灭菌来避免杂菌污染

下列所用方法不能达到相应目的的是（）

A . 用电泳法测定蛋白质相对分子质量 B . 用干热灭菌法对微生物培养基进行灭菌 C . 用比色法测定泡菜样品中的亚硝酸盐含量 D . 用滤膜法检测一定体积自来水中大肠杆菌的数量

在生产和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来防止杂菌的污染。下列相关叙述不正确的是( )

A . 玻璃和金属材质的实验器具可采用干热灭菌法 B . 利用平板划线法分离菌种时，若在培养基上连续划线5次，接种环灼烧5次即可 C . 没有将高压蒸汽灭菌锅内的冷空气排尽将影响培养基的灭菌效果 D . 喷洒石炭酸同时配合紫外线照射可提高对超净工作台的消毒效果

下列有关微生物实验室培养的叙述，不正确的是（）

A . 在熔化琼脂时，需要控制火力并不断搅拌，以免发生焦糊 B . 灼烧、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等都属于无菌技术 C . 样品中活菌数量统计时，接种方法应采用划线法 D . 用平板培养基培养微生物时，应将平板倒过来放置

下列关于消毒和灭菌的叙述，正确的是（）

A . 选择消毒或灭菌要根据无菌操作的对象及目的而定 B . 通过消毒或灭菌可以杀灭所有杂菌、孢子和芽孢等 C . 对牛奶灭菌会破坏其营养成分因而只能采用煮沸消毒法 D . 对玻璃器皿、接种环、操作者的衣着和双手等应进行灭菌处理

[选修1.生物技术实践专题]

某科研小组想探究某水样中的大肠杆菌数目是否达标，欲采用滤膜法测定大肠杆菌的总数。其原理是通过特定的培养基(EMB)对大肠杆菌进行培养和鉴定，该培养基的主要营养成分包括蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖等。滤膜法的大致流程为：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到EMB培养基上培养→统计菌落数目。据图回答下列问题：

（1）为了鉴别大肠杆菌，图中的EMB培养基中应加入，最终长出大肠杆菌的菌落呈现色。此外，还可以根据菌落的(答出3点)等方面特征对大肠杆菌进行鉴别。
（2） EMB培养基中的蛋白胨提供的主要营养是，NaCl的作用是。
（3）图中滤杯、滤瓶需采法灭菌，将完成过滤之，后的滤膜紧贴在上述EMB培养基上，这相当于微生物培养中的操作。
（4）某兴趣小组将90 mL无菌水加入到10 mL待测水样中，并通过滤膜法测得EMB培养基上的大肠杆菌菌落数为3个，则1 L待测水样中的大肠杆菌数目为个。培养基上形成的总菌落数实际上远远大于3个，原因是。

从某污水处理系统中分离出多种细菌，经进一步筛选获得具有高效降低污水中有机污染物（COD为有机污染物分解时化学需氧量）能力的菌株，过程如图所示。下列相关说法错误的是（）

A . 牛肉膏蛋白胨培养基可用高压蒸汽灭菌法灭菌 B . 为确定接种时菌液的最佳稀释倍数，可先初选一个较宽的范围，分别涂布培养后，从中选择菌落数在30~300的平板计数 C . 图中平板划线法获得的菌落具有不同的菌落特征 D . 挑取单菌落后接种到液体培养基中培养，目的是扩大化培养菌株

富集培养是从微生物混合群开始，对特定菌种的数量比例不断增高而引向纯培养的一种方法。多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物，呈油状液体，污染土壤后，很难被清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，如图表示用富集方法从土壤中分离能分解多氯联苯酵母菌的过程。回答下列问题：

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释液接种到以为唯一碳源的培养基上进行培养。
（2） ①②③步骤的目的是。
（3）步骤④采用的接种方法是；步骤④⑤的目的是；若步骤⑤中平板上的菌落过于密集，则应对步骤④中加入的菌液进行；步骤④⑤中，首先要对培养基进行灭菌，常用的培养基灭菌方法是，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能。

防止杂菌污染和获得纯净微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。下列关于无菌操作技术的叙述，正确的是（）

A . 将培养基转移到三角瓶和试管中时必须使用三角漏斗 B . 接种环在划线前后都要进行灼烧并立即划线以免灭菌失效 C . 无菌技术只能用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染 D . 高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从高压蒸汽灭菌锅开始加热时计时

某兴趣小组研究使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响，实验选用凉拌黄瓜、盐水虾、干锅树菇3道菜，每道菜均分为3盘，一盘使用公筷，一盘不使用公筷，还有一盘不食用，实验者分别使用公筷和不使用公筷吃3道菜，同一实验者吃同一道菜的次数必须相同，实验流程如图所示。请据图回答：

（1）图示流程中，应使用对样品进行稀释，接种时所用的接种工具是。对培养基X进行灭菌时，通常使用法。
（2）图中存在“冷藏”操作，进行该操作的目的是。实验结束后，培养基应进行处理再丢弃。
（3）实验结果如表所示：
菜名
总菌数（cfu/kg）
餐前
餐后
公筷
非公筷
未食用
凉拌黄瓜
14000
16000
45000
14500
盐水虾
135
150
220
140
干锅茶树菇
30
45
530
40
结合生物学知识及常识分析，筷子上的微生物可能来自（答出两点）；与凉拌黄瓜组相比，盐水虾和干锅茶树菇两组的总菌数较少的主要原因是。基于上表和该兴趣小组的实验课题，可以得出的结论是。

金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答下列相关问题：

（1）要分离得到较纯的金黄色葡萄球菌菌种，应配制（按培养基的功能分）培养基，常采用法对培养基进行灭菌。然后，可用法或稀释涂布平板法进行接种。
（2） 7.5% NaCl肉汤培养基为微生物提供的营养成分包括，为了防止杂菌污染，（“能”或“不能”）向培养基中添加抗生素，原因是。
（3）在制备血平板时需将pH调节至（填“微酸性”或“微碱性”）后灭菌，待培养基后，再加入适量血液。按培养基功能分类，血平板属于培养基。

菜名	总菌数（cfu/kg）
	餐前	餐后
	餐前	公筷	非公筷	未食用
凉拌黄瓜	14000	16000	45000	14500
盐水虾	135	150	220	140
干锅茶树菇	30	45	530	40

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