灭菌技术知识点题库

培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气所采用的灭菌、消毒方法依次是（）

①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法

A . ⑤③④①② B . ①②③④⑤ C . ⑥②③④① D . ⑤③②①④

某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题：

（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了和，除此之外，培养基还必须含有的基本成分是。
（2）对培养基和培养皿进行灭菌，常采用的方法分别是。
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种作为对照进行实验。
（4）培养20小时后，观察到平板上有，如果其总数越多，则说明。
（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐细菌，这种培养基被称为。

某小组同学配制培养基培养微生物，其配方为：牛肉膏0.3g、蛋白胨1.0g、氯化钠0.5g、磷酸二氢钾0. 2g、琼脂1.5g、（抑）制霉菌素0.5mg、蒸馏水100ml。据此配方回答问题：

（1）该小组同学培养的微生物应是（填“细菌”或“真菌”），理由是。
（2）牛肉膏、蛋白胨能为微生物提供养分。
（3）加入的磷酸氢二钾主要有两方面的功能：养分上提供；缓冲培养基的。
（4）该培养基的物理性质是（填“固体”或“液体”）培养基。培养基配制好后需经灭菌处理，并注意与未灭过菌的其他物体。

微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。请分析下列操作中错误的是( )

①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 ②接种操作要在酒精灯火焰附近进行 ③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒 ④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 ⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌 ⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌

A . ①③ B . ④⑥ C . ③⑤ D . ②④

[生物——选修1：生物技术实践]

某种物质S（一种含有C、H、N 有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。

回答下列问题：

（1）实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是。甲、乙培养基均属于培养基。
（2）实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×10⁷个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释倍。
（3）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是（答出1点即可）。
（4）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤。
（5）上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即。

微生物培养技术在医疗、农业生产等方面均有应用。烧伤病人容易感染绿脓杆菌，临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。请回答下列相关问题：

（1）适于绿脓杆菌生长的培养基中的营养成分一般含有、、水和无机盐，除了提供以上几种主要营养物质外，培养基还需要满足微生物生长对、特殊营养物质以及氧气的要求。
（2）可采用稀释涂布平板法对绿脓杆菌进行分离计数，原理是，统计平板上的菌落数，即可推测出样品活菌数；计数结果往往比实际活菌数低，是因为。
（3）对培养基进行灭菌后，待培养基冷却至50℃时，需要在附近倒平板。接种时所用的接种环在接种前后都需要通过法灭菌。
（4）将分别含等剂量不同抗生素的相同大小的小滤纸圆片均匀置于该平板上的不同位置，在适宜条件下培养一段时间，结果滤纸片周围均出现透明圈，这说明绿脓杆菌对实验所用抗生素表现为填（“敏感”或“不敏感”）。

下列关于无菌技术的叙述，错误的是（　　）

A . 无菌技术是保证获得纯净培养物的关键 B . 要对培养基、接种工具等进行灭菌处理 C . 已经灭菌处理的材料和用具不得与菌种接触 D . 倒平板操作应在酒精灯火焰附近进行

随着生产生活和科技的发展，广泛应用很多微生物知识，请分析回答下列问题：

（1）利用蓝莓酿制的蓝莓酒，被称为“液体黄金”。如果酒的生产流程，压榨前需除去果柄，此操作要在冲洗（填“之前”或“之后”）进行。若从混杂的微生物中分离酿制蓝莓酒的菌种应使用培养基。喝剩的蓝莓酒开盖放置一段时间后会变酸，原因是。

（2）测定大肠杆菌数时，在稀释10⁵倍的培养基内，得到下表统计结果中准确可信的是组。对该菌种数目统计时，常用的方法是和显微镜直接计数法。但是，统计的菌落数也往往比实际活菌的数目低，是因为。

组别	平板数	统计的菌落数	取平均值
甲组	两个	250和220	235
乙组	三个	160、240和110	170
丙组	四个	280、200、340和160	245
丁组	五个	120、60、270、220和130	160

（3）将某杆菌的淀粉酶基因转入到利用淀粉能力较弱的酵母菌中，经筛选得到高效工程菌菌种，此过程依据的生物学原理是。以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种菌的发酵罐需要先排气。
（4）相关实验结束后，使用过的微生物培养基应进行后才能倒掉。

酵母菌可作为动物的饲料蛋白来源。若利用工业废甲醇作为碳源培养酵母菌，既可减少污染又可降低生产成本。下图为拟从土壤样中分离该类酵母菌并进行大量培养的操作流程。请回答下列有关问题：

（1）用相应化学反应式表示酵母菌的细胞呼吸特点。
（2）步骤①土样应取自葡萄园的（填“表层”或“深层”）土壤。
（3）步骤②需充分振荡20 min，主要目的是。
（4）步骤③将土壤悬浮液稀释了倍。
（5）培养基灭菌常用到高压蒸汽灭菌锅。如图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是。
（6）在步骤④中将培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养，培养温度在℃左右最合适。若培养后发现平板中菌落过于密集，应进一步，以便于菌落计数与分离。
（7） ⑤过程划线时，应避免划破培养基表面，而且还要求。
（8） ⑥过程中，除要求适宜的温度、及时补充必需的营养物质和排除代谢废物外，还应注意。

微生物培养，是指借助人工配制的培养基和人为创造的培养条件，使某些微生物快速生长繁殖的过程。它可以对已纯化的单一菌种进行培养和利用，也可以对混合菌种或自然样品(如土壤)中的微生物进行培养，然后根据培养基上所生长微生物的种类和数量，可在一定程度上估算微生物的多样性与数量。请分析回答下列问题。

（1）将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有。若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入(显色剂)筛选出能产淀粉酶的微生物。该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是。
（2）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌时，压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是。为了调查某河流的水质状况，某研究小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是。然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接种入0.1 mL稀释液。经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为。
（3）用平板划线法分离水样中的细菌，划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有(答出两条)。若将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快，分析其原因是。

大肠菌群是指一类在35~37 ℃条件下培养48 h，能发酵乳糖产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌的总称，大肠杆菌属于大肠菌群的一种。我国《生活饮用水卫生标准》中关于生活饮用水的细菌标准是：一、细菌总数1 mL水中不超过100个；二、大肠杆菌数1 L水中不超过3个。国标一般采用多管发酵法检测样品中大肠菌群数，具体分为三步：

蛋白胨	10.0
牛肉膏	3.0
乳糖	5.0
氯化钠	5.0
pH	7.3±0.2
H₂O	定容至1000 mL

①初发酵试验：将待测样品稀释后，选择3个稀释度，每个稀释度分别接种到5支发酵管中，37 ℃培养48 h，观察是否产气。

②平板分离：将产气发酵管中的菌液分别接种于伊红美蓝培养基（生长在此培养基上的大肠菌群呈深紫色，有金属光泽）上，置于37℃恒温箱内培养24h，观察菌落形态。

③复发酵试验：挑取平板上呈深紫色，有金属光泽的菌落，进行染色镜检。将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌株重复初步发酵试验。最后根据证实为大肠杆菌阳性的管数，按统计学原理即可得出大肠菌群数（每升或每100 毫升中的个数）。

（1）初发酵乳糖蛋白胨培养基配方（g/L）如表所示，按物理性质分类，乳糖蛋白胨培养基属于培养基，其中的碳源有
（2）若检测饮用水中的大肠杆菌数，则①步骤无须稀释，原因，①步骤每个稀释度分别接种到5支发酵管中的原因是
（3） ②步骤中不能直接用涂布器把菌液涂布在平板上进行大肠菌群计数，原因是
（4）伊红美蓝培养基在配制后通常用法进行灭菌，③步骤中只能挑取符合特征的菌落其中的一小部分进行镜检，这是因为

细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（）

A . 接种环、手、培养基 B . 高压锅、手、接种环 C . 培养基、手、接种环 D . 接种环、手、高压锅

曲为酒之魂，水为酒之魄。酒曲的生产技术在我国北魏时代的《齐民要术》中就已经得到全面总结。现代科学表明，民间传统酒曲中含有大量的微生物。为探究酒曲中的主要微生物种类，进行如下实验。回答下列问题：

（1）将酒曲用无菌水制成悬液后，取适量的酒曲悬液用（接种法）接种到培养基上，经培养后根据（写出二种）等菌落特征以统计不同微生物的菌落数，发现酒曲中主要有两类微生物，即酵母菌和霉菌。
（2）研究者发现在液体中酵母菌比霉菌生长快；而酸性培养基中酵母菌比细菌生长更适宜。据此设计实验将酵母菌从酒曲中进行分离。
实验一：用小刀切开曲块，挖取米粒大小一块投入酸性蔗糖豆芽汁培养液中，然后置于25℃培养箱中培养两天。上述实验操作中，需要灭菌的物品或材料有。

实验二：取浑浊的培养液1mL转接到另一瓶酸性蔗糖豆芽汁培养液中培养，如此重复多次。本研究中的酸性蔗糖豆芽汁培养液是液体培养基，从功能上看，属于培养基。

实验三：多次转接后，取稀释液接种在蔗糖豆芽汁平板上。

①下图所示接种方法为平板划线法，该培养基中（“需要”或“不需要”）添加琼脂，理由是。

②为了检测在实验操作过程中对培养基的灭菌是否合格，应进行的操作是。
（3）酒曲中的酵母菌是（代谢类型）生物，在无氧条件下可能进行发酵。

下列关于灭菌和消毒的叙述中，正确的是（　　）

A . 消毒是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B . 消毒和灭菌实质上是相同的 C . 接种环、涂布器都是用灼烧法灭菌 D . 常用灭菌方法只有灼烧灭菌和干热灭菌

“珠三角是中国酿造酱油的大本营”，酱油作为一种深受人民大众欢迎的传统饮食调味品，工艺流程为：原料→制曲→发酵（添加高浓度食盐）→生酱油→配制→澄清→包装→成品，发酵过程的生理指标变化如表所示：

发酵天数（d）	氨基酸等含氮物质（g/100mL）	酸类物质（g/100mL）	糖类物质（g/100mL）	还原糖（g/100mL）	色度	pH
1	1.25	2.16	6.16	5.09	0.99	5.70
5	1.28	2.27	7.53	6.85	1.22	5.36
8	1.47	2.31	6.81	6.53	1.35	5.37
10	1.65	2.34	7.96	6.94	1.53	5.39
13	1.73	2.48	7.90	7.24	1.78	5.28
15	1.84	2.56	7.85	7.74	2.05	5.12

（1）制作酱油的原料大豆富含的淀粉、脂肪和蛋白质相当于微生物培养基成分中的。制曲是酱油生产过程中的关键阶段之一，制曲阶段的变化主要是依靠微生物米曲霉分泌大量的酶，如（至少答2种）等，并利用这些酶分解原料。
（2）据表分析，多种微生物及其酶系相互作用有利于，使酱油具有独特的风味和营养价值。
（3）结合工艺流程及表中数据分析，酱油发酵过程中不易受到杂菌污染，原因是；成品包装前常使用巴氏消毒法消毒，原因是。
（4）黄曲霉毒素是由黄曲霉菌产生的具有强烈致癌作用的物质，酿制酱油的整个生产过程都有污染的可能，请结合你所学知识，提出两条控制酿造酱油被黄曲霉毒素污染的措施：。

下列关于消毒和灭菌的说法，不正确的是（）

A . 灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B . 消毒和灭菌实质上是相同的 C . 接种环用灼烧的方法灭菌 D . 常用消毒方法有煮沸法、紫外线法、化学药品法

回答下列（一）、（二）小题：

（一）活性染料应用广泛，但其产生的废水含盐量高、有机质高、色度高，对环境污染严重。研究小组利用活性黄色染料筛选能降解活性染料的微生物菌种，以用于水体污染治理。

（1）采样：在附近采集活性污泥，加入适量的，通入氧气，促进微生物的以备使用。
（2）菌种筛选：取活性染料配置成500mg/L的培养基分装于5个锥形瓶，经后分别加入1mL的含菌种的污泥，置于中培养一段时间后，选择的锥形瓶中的微生物进一步分离提纯。
（3）纯种分离：配置相应浓度的活性染料固体培养基后，若要操作简便，可利用法筛选得到纯的菌种。
（4）菌种保存：分离得到的菌种可接种到培养基，置于4℃冰箱保存。
（5）（二）2018年非洲猪瘟病毒传至我国并对养猪业构成严重威胁，该病毒是一种双链DNA病毒，可编码多种蛋白质。非洲猪瘟病毒表面的主要结构蛋白p22蛋白，可以诱导猪产生抗体。工业上可利用转基因技术生产p22蛋白疫苗，并制备相应的单克隆抗体。请回答下列有关问题：
p22蛋白疫苗的制备和鉴定。与p22蛋白基因及质粒有关的限制酶切位点如下图所示，已知不同种限制酶切割出的黏性末端不同。

（LacZ基因能表达出β-半乳糖苷酶，使无色的半乳糖苷分解，进而使菌落呈现蓝色）

①根据p22蛋白基因的序列设计一对引物，通过技术扩增特定的DNA以获取目的基因；②构建重组DNA，利用酶（写出酶的名称）分别切割目的基因和质粒，以减少连接产物的种类并避免目的基因与质粒反向连接；③用重组质粒转化感受态细胞，并将受体细胞涂布在含氨苄青霉素的LB固体平板上，在37℃恒温培养箱培养12h，挑取的单菌落，将其转移至液体培养基扩大培养。一段时间后离心收集细胞，超声破碎后离心取上清液制备样品，利用的方法对p22蛋白进行鉴定。
（6）抗p22蛋白的单克隆抗体制备及鉴定。p22蛋白可作为对小鼠进行多次注射后，分离出小鼠脾细胞，利用的仙台病毒促进该细胞与体外培养的骨髓瘤细胞融合；融合细胞经过多次筛选后得到的杂交瘤细胞具有的特点是；将选出的杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔，待小鼠腹部膨胀明显，采集，分离提取出单克隆抗体。

木质纤维素类生物质是地球上最丰富的可再生资源，既可以转化为能源燃料，也能通过生物方法获得各种可再生的生物基材料。研究人员拟从大熊猫粪便中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：

（1）常规微生物实验中，下表中物品及其灭菌方法错误的是（填序号）。配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是。
序号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
干热灭菌
灼烧灭菌
灼烧灭菌
高压蒸汽灭菌
（2）为筛选纤维素分解菌，研究人员将大熊猫的新鲜粪便样品接种在以为唯一碳源的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于培养基。单个细菌在平板上会形成菌落，通常可根据来初步区分不同种类的微生物。
（3）用平板培养纤维素分解菌时，一般需要将平板（填“倒置”或“正置”）。若要测定大熊猫粪便中纤维素分解菌的数量，请写出主要实验步骤：。

下列关于无菌技术的说法正确的是（）

A . 培养皿、培养基可用干热灭菌法灭菌 B . 牛奶、熟啤酒、葡萄酒都可用巴氏消毒法消毒 C . 100℃煮沸10分钟可以杀死微生物细胞和全部芽孢 D . 为了防止污染，接种环经灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落

科学家从温泉中提取到一种耐热细菌，发现该细菌能够分泌淀粉酶，从而分解淀粉。该类细菌在固体培养基中分解淀粉后会形成透明圈。筛选能高效产生淀粉酶的耐热细菌的过程如图所示。回答下列问题：

（1） ①过程为梯度稀释，所用的试剂是，其操作目的是。
（2） ②过程将菌液接种到Ⅰ号培养基上，此接种方法称为，操作前为防止污染，需要用法对培养基进行灭菌。
（3）从功能上分类，Ⅰ号培养基属于。为筛选出能高效产生淀粉酶的耐热细菌，应从Ⅰ号培养基中选择的菌落。
（4）淀粉酶能将淀粉催化分解为麦芽糖，进行酶活性鉴定时可用作为酶活性大小的衡量指标。

序号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	培养皿	涂布器
灭菌方法	干热灭菌	灼烧灭菌	灼烧灭菌	高压蒸汽灭菌

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