第二节发酵工程的无菌技术知识点题库

用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时 (　　)
①可以用相同的培养基　 ②都需要使用接种针进行接种
③都需要在火焰旁进行接种　 ④都可以用来计数活菌

A . ①② B . ③④ C . ①③ D . ②④

通常，需要借助光学显微镜才能完成的实验有

A . 分离土壤中分解尿素的细菌 B . 探究紫色洋葱表皮细胞液浓度 C . DNA粗提取和鉴定 D . 调查和统计土壤动物的丰富度

生物技术在生活中应用非常广泛，请回答下列与生物技术有关的问题：

（1）有的加酶洗衣粉中还加有香精，高档洗衣粉中的香精是由植物芳香油制成的，目前从植物中提取芳香油的方法有等（至少写2种）；橘皮精油的提取原料是橘皮，但橘皮易焦糊，宜采用法提取橘皮精油，该过程得到的糊状液体可通过除去其中的固体杂质．植物芳香油的提取需要大量原料，通常采用技术来实现植物的快速繁殖．

（2）“毛豆腐”是黄山市一带的传统名菜，它是通过人工发酵的方法，使豆腐表面生长出一层白色茸毛，这种白色茸毛状的微生物是，它产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成；产生的脂肪酶可将脂肪水解为．因此使“毛豆腐”具有了独特的风味．

（3）从土壤中分离分解尿素的细菌实验中，培养基中加入的氮源必须是，按照培养基用途划分，该培养基属于培养基．若要对得到的细菌作进一步鉴定，还需要在培养基中加入，当pH升高时，该物质将变成色．

外科手术器械和罐头食品的灭菌处理，标准是要能够杀死（）

A . 球菌 B . 杆菌 C . 螺旋菌 D . 芽孢

自生固氮菌可不与其它植物共生，能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途．研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株，并对其固氮能力进行了研究．

请回答下列问题：

（1）在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是（填序号）
①酒精灯　②接种环　③高压蒸汽灭菌锅　④棉塞
（2）要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于培养基上进行筛选．
（3）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是．
（4）涂布培养四天后，可通过观察的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类．
（5）为了进一步筛选高效固氮菌，研究人员将上述获得的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后，对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量，结果如表：

甲菌
乙菌
丙菌
丁菌
菌量（个/mL）
2.1×10⁵
2.5×10⁵
1.8×10⁵
2.0×10⁵
含氮量（K）
3.32
4.38
5.34
5.32
①培养过程中需不断振荡的目的是．
②可以采用方法对固氮菌进行计数，假设计数室长和宽均为1mm，深0.1mm，每个小方格中平均有7个固氮菌，则10mL培养液中有固氮菌的数量为个；如果小方格中固氮菌的数量太多，无法数清，则应．
③由上述结果可知，菌的固氮效率最高．

幽门螺杆菌是引起胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡等疾病的“罪魁祸首”．请回答：

（1）幽门螺杆菌与酵母菌比较，二者的主要区别在于幽门螺杆菌．
（2）为了探究幽门螺杆菌生长繁殖的因素，某研究性学习小组在培养该菌过程中，发现了在某种细菌（简称W菌）的周围，该菌的生长繁殖受到抑制．他们把W菌接种在专门的培养基上培养，一段时间后，除去W菌，在此培养基上再培养幽门螺杆菌，结果是幽门螺杆菌仍然不能正常生长繁殖．
①据材料分析，研究小组的同学对“造成W菌周围的幽门螺杆菌不能生长繁殖”的原因的最可能假设是．
②试参照上述材料设计实验验证①中的假设．
A．方法步骤：
a．制备培养基：取两个培养皿，按相同的营养成分配制成甲、乙两个培养基．
b．设置对照：．
c．接种幽门螺杆菌：在甲、乙两培养基上分别接种相同的幽门螺杆菌．
d．培养观察：条件下培养甲、乙两个培养基上的幽门螺杆菌．
B．实验结果：．

如表是筛选异养型细菌的培养基配方．

KH₂PO₄	1.4g
Na₂HPO₄	2.1g
MgSO₄•7H₂O	0.2g
FeCl₃	0.1g
X	1g
维生素	微量
琼脂	15g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到100mL

（1）苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，此培养基中的成分X除为目的菌提供能源外，还能提供，该培养基从作用看属于培养基．制备固体培养基时调节pH在步骤后．
（2）如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，则获得图乙效果的接种方法是．运用图甲所示接种方法统计的菌落常常比活菌的实际数目．其理由是．
（3）运用图丙方法计数时，已知每个计数室由25×16个小格组成，容纳液体的总体积为0.4mm³ ，观察到图中计数室所示a、b、c、d、e 5个中格共有目的菌80个，则1mL样液中约有目的菌个．

生物技术实践在实际生产生活中有着多种应用。请冋答下列有关问题：

（1）泡菜发酵过程会产生少量的亚硝酸盐，若泡菜中的亚硝酸盐总量达到一定值，则会引起中毒，故需要检测泡菜中亚硝酸盐的含量，测定亚硝酸盐含量的常用方法是。
（2）微生物的接种方法存多种，常用于统计活菌数目的接种方法是，使用该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目偏低，原因是。统计微生物数目的方法除利用菌落进行活菌计数外，还有法。
（3）精油在日常生活中有着广泛的应用，不同精油的制备过程不同，这与其原料的性质等有关。柚皮在水中蒸馏时容易焦糊，宜采用法提取柚皮精油；玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，常选择法进行提取。
（4）天然胡萝卜素具有使癌细胞恢复成正常细胞的功能。根据胡萝卜素具有易溶于有机溶剂的特点，常采用法提取胡萝卜素；提取的胡萝卜素粗产品可通过法进行鉴定。

在划线分离操作中，错误的是(　　)

A . 将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 B . 将烧红的接种环在火焰旁边冷却 C . 接种环在平板上的划线位置是随机的 D . 在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰

酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：

（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的，及时对培养基进行分装，并进行灭菌。
（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约（在25 ℃、50 ℃或80 ℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有。
a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
（4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上色细胞的个数应不少于，才能达到每毫升3×10⁹个活细胞的预期密度。

氮元素是农作物生长必不可少的一种元素能提高农作物产量。如何提高土壤中的氮肥含量成为现代农业研究的热点之一。

（1）尿素是农业生产中主要的氮肥，尿素（能或不能）被农作物直接吸收利用。
（2）在分离土壤中分解尿素的细菌实验中常用到选择培养基，该选择培养基的选择原理为。
（3）称取5g土壤，加入95mL无菌水，搅匀；从中取出1mL菌液加入9mL无菌水，摇匀；再重复上述步骤3次，取最后稀释得到的菌液0.1 mL稀释涂布平板，得平均菌落数为48，则每克土壤样品中的细菌数量为。
（4）自生固氮菌的利用也是提高土壤肥力的方法，自生固氮菌是指在土壤中能够独立进行固氮的细菌，将氮气转变为氨。筛选自生固氮菌的培养基配方如下：甘露醇10g、KH₂PO₄ 0.2g、MgSO₄·7H₂O 0.2g、NaCl 0.2g、CaSO₄·2H₂O 0.1g、CaCO₃5g、琼脂20g、水1000mL。筛选的自生固氮菌同化作用类型为，氮源为。
（5）自生固氮菌能够固氮是因为其可以产生固氮酶，研究人员想获得自主固氮的农作物，可通过育种方法培育，该育种方法的突出优点为。
（6）对于需要长期保存的菌种，可以采用的方法保存。

土壤中的细菌数量多、分布广，包括自养细菌和异养细菌。自养细菌能直接利用光能或无机物氧化时所释放的化学能同化CO₂合成有机物（例如硝化细菌），异养细菌从有机物中获得能源和碳源（例如纤维素分解菌），人类根据需要从土壤中分离提纯各种细菌。回答下列相关问题：

（1）对培养基灭菌的方法是。
（2）若要筛选硝化细菌，培养基中不应该加入，从功能上分，该培养基属于培养基。
（3）若要鉴别所分离的细菌是否为纤维素分解菌，则应该在培养基中加入，观察培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养。培养时需要振荡，其主要目的是。
（4）纯化菌种时，为了得到单菌落，常用的接种方法是和。
（5）细菌计数，根据培养基上出现的菌落数目和稀释倍数计算得出的数目往往比实际数目低，原因是

为纯化菌种，在鉴别培养基上接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（　　）

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A . 倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整 B . 接种过程中接种环共需四次灼烧处理 C . 可选择Ⅲ区的单菌落数在30～300的平板进行计数 D . Ⅲ区菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色

金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病微生物，能够产生肠毒素，引发食物中毒。该菌耐高盐，可在盐浓度接近8%的环境中生长。哥伦比亚血平板的主要成分是蛋白胨、淀粉、葡萄糖、无菌脱纤维羊血、维生素、酵母粉等。金黄色葡萄球菌在血平板上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，因此在光下观察菌落会发现周围产生了透明的溶血圈。如图为检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答下列问题。

（1）由于金黄色葡萄球菌具有的特性，因此7.5%aCl肉汤培养基适合金黄色葡萄球菌生长繁殖，而不利于其他多种微生物生长繁殖，从功能上看该培养基属于培养基。
（2）从培养过程分析，振荡培养的目的是①②提高培养液中的氧气含量。
（3）在配制哥伦比亚血平板时，添加无菌脱纤维羊血是在高压蒸汽灭菌（填“之前”或“之后”），原因是。
（4）图中血平板上的接种方法是。多次规范操作、重复实验，血平板上均出现的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌。

社会上流传着一些与生物学有关的说法，有些有一定的科学依据，有些则违反生物学原理。下列说法中有科学依据的是（）

A . 转基因抗虫棉能杀死害虫就一定对人有害 B . 消毒液能杀菌，可用来清除人体内的新冠病毒 C . 如果孩子的血型和父母都不一样，则肯定不是亲生的 D . 近亲结婚者的后代，遗传病发病率可能会增加

野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型菌株由于发生基因突变而无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，数字代表培养基，ABC表示操作步骤。有关说法错误的是（）

A . ①②为完全培养基，③④为基本培养基 B . A操作的目的是提高突变菌株的浓度 C . B操作可用涂布器蘸取菌液均匀的涂布在②表面 D . 经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养

如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1→2→3→4→5，下列说法正确的是（）

A . 操作前要将接种环用酒精消毒 B . 划线操作须在酒精灯火焰上方进行 C . 只有在5区才可以得到所需菌落 D . 在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌

下列有关微生物实验的叙述，错误的是（）

A . 获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 B . 平板划线法可用于微生物的分离和计数 C . 分离不同的微生物要采用不同的稀释度 D . 观察菌落的特征可以用来进行菌种的鉴定

金黄色葡萄球菌（SAU）是细菌性肺炎的病原体之一。细菌性肺炎一般需要注射或口服抗生素进行治疗，当细菌出现耐药性时疗效下降。A、B、C、D四种抗生素均可治疗SAU引起的肺炎。为选出最佳疗效的抗生素，研究者分别将含等剂量抗生素A、B、C、D的四张大小相同的滤纸片a、b、c、d置于SAU均匀分布的平板培养基上，在适宜条件下培养48h，结果如图。下列相关叙述错误的是（）

A . A、B、C、D四种抗生素，抑菌效果最佳的是抗生素A B . 配制培养基时应将培养基的pH调至中性或弱碱性 C . 对培养基可以采用干热灭菌的方法灭菌 D . 滤纸片b周围透明圈中出现一菌落，可能是该菌落发生了基因突变

使用日益广泛的手机，在方便人们通讯联络的同时也成为细菌等病原体传播的途径。为了解手机上细菌的情况，某兴趣小组进行了如下实验，请回答相关问题：

（1）取附着在手机上细菌进行取样培养后，对菌液进行系列梯度稀释的目的是。

（2） A平板上生长的菌落有多种形态，说明附着在手机细菌有种。若要使菌落能在A平板上生长，下列培养基组分中最合理的是(选填 “甲、乙、丙”) ，原因是。可采取来检测培养基A制备是否合格。

培养基编号	培养基组分
甲	蔗糖、NaCl、琼脂、水
乙	牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、水
丙	蛋白胨、NaCl、蔗糖、水

（3）初筛后将平板B的菌落通过“影印”方法接种到C培养基上培养，使C培养基对应位置上出现相同菌落。然后用伊红-美蓝染液对C进行染色，根据染色后D中出现的结果，可判断平板B中 ( 选填图中数字)是大肠杆菌的菌落。
（4）某同学采用平板划线法进一步纯化大肠杆菌，接种培养一段时间后，发现第一划线区不间断长满菌落，第二划线区上几乎无菌落，产生此情况的可能原因。

	甲菌	乙菌	丙菌	丁菌
菌量（个/mL）	2.1×10⁵	2.5×10⁵	1.8×10⁵	2.0×10⁵
含氮量（K）	3.32	4.38	5.34	5.32

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