第二节 发酵工程的无菌技术 知识点题库

（1） 图中选择培养基应以为唯一氮源；鉴别培养基还需添作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色。

（2） 在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较。

（3） 现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。突变基因转录的mRNA中，终止密码为，突变基因表达的蛋白质含个氨基酸。

（1） 不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从环境采集。

（2） 富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择的培养基，并在条件下培养。

（3） 下面两组图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，

请分析接种的具体方法。

获得图A效果的接种方法是，获得图B效果的接种方法是。

（4） 配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行，接种前要进行，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在条件下进行。

（1） 土壤中的有些细菌能分解尿素，是因为其能合成。 

（2） 选取土样后进行一系列稀释，吸取0.1 mL的10⁶倍稀释的菌液在灭菌板上进行接种，采用该种接种方法的目的是。该实验过程中，还设置了一个空白平板，空白平板可起作用。实验结果显示：平板上的菌落数为123、119、130，则每毫升土样溶液中的活菌数为个。 

（3） 其他同学认为小明的实验结果偏大，可能原因是操作出现错误。为了排除其他同学的质疑，你给小明的建议是。 

（4） 为了鉴定分离出来的菌种是否为尿素分解菌，需要在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，根据颜色是否变来鉴定。 

（1） 实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是。甲、乙培养基均属于培养基。

（2） 实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×10⁷ 个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释倍。

（3） 在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是（答出1点即可）。

（4） 若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤。

（5） 上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即。

（1） 常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是（填编号）。

编号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	培养皿	涂布器
灭菌方法	高压蒸汽	火焰灼烧	干热	臭氧

（2） 称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1 mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌个。

（3） 为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。

（4） 在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如下图。据图分析，应选择菌株进行后续相关研究，理由是。

（1） 为保持干燥，培养皿用法灭菌；待培养基冷却到℃(填“20”“30”“50”或“80”)左右时，在酒精灯附近倒平板；待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止，防止造成污染。

（2） 根据培养基的成分判断，该同学不能分离出土壤中分解尿素的细菌，原因是。

（3） 该同学采用稀释涂布平板法检测样液中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后，将1mL样液稀释l00倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出每升样液中的活菌数为。

（1） 新冠病毒主要侵染人体肺部细胞，对机体其他部位细胞侵染能力较弱，根本原因是：。

（2） 某科学团队利用体外培养的人肝癌细胞分离出新型冠状病毒毒株。体外培养人肝癌细胞时，应满足所需要的的环境、一定的温度和pH、气体环境和等条件，若使用合成培养基还需要添加等一些天然成分。

（3） RT-PCR是指以病毒的RNA为模板合成CDNA，并对CDNA进行PCR扩增的过程。在此过程中，需要用到的酶有酶和酶等。

（4） 利用RT-PCR试剂盒对新型冠状病毒进行检测时，除借助上述RT-PCR技术外，还需要用特异性探针。利用该探针对新型冠状病毒进行检测的原理是。基因探针之所以能检测新型冠状病毒是因为其上含有。

（1） 从发臭的生活污水中分离到产硫化氢的微生物的依据是。为了解某生活污水中微生物的种类和数量，应采用法进行接种，接种前培养基用（方法）进行灭菌。在普通培养基上加入硫酸亚铁铵，采用（固体／液体）培养基培养，根据即可鉴定分离得到的微生物能否产生硫化氢。

（2） 某同学取0.1ml稀释的污水进行接种，在10³倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为450、542和361，经计算得每克污水中微生物的数量为4.51×10⁶个。请评价该同学统计得到的数据结果是否准确，。

（3） 用穿刺接种的方法将产硫化氢的两种菌分别接种在甲、乙两个培养基内，如图所示。请推测出现图中甲、乙两种菌落分布差异的原因是。

（1） 筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品，接种到以为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属。

（2） 微生物的纯培养操作方法有两种，如图是法。该操作方法在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线。

（3） 若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数。若用法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是。

（4） 将1mL酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为个/L。

（1） EMB培养基中为细菌提供碳源的是，添加的X是，大肠杆菌在含有X的培养基表面长出的菌落呈黑色，从功能上看，EMB培养基属于培养基。

（2） 待测水样过滤完之后，还有部分细菌吸附在滤杯杯壁上，将这部分细菌也尽可能集中到滤膜上的操作为：在无菌条件下，用冲洗滤杯，并再次过滤水样。

（3） 取10mL待测水样加入90mL无菌水稀释，稀释后取10mL菌液通过滤膜法测得三个平板上的黑色菌落数分别为13、15、17，推测1L待测水样中的大肠杆菌数目为个。

（4） 在培养过程中，发现空白对照组的平板上检测到少许菌落，请分析最可能的原因是。

（5） 如果在实验组的培养基上添加了青霉素再进行相同的操作，预测检测的大肠杆菌菌落数（填“会”或“不会”）变化，原因是。