第2节 基因工程的基本操作程序 知识点题库

GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：

① 稳定的缓冲液环境   ② DNA模板 ③ 合成引物      ④ 四种脱氧核苷酸

⑤ DNA聚合酶    ⑥ DNA解旋酶  ⑦ 限制性核酸内切酶  ⑧ 温控设备

为实现目的基因与运载体结合，以便在大肠杆菌中大量表达相应的蛋白质，研究人员进行了如图所示操作．请分析回答下列问题：

（1）图表示用BamH I切割含目的基因的 ，质粒经相同限制酶处理后，经 的作用获得a，a称作 ．将a与感受态大肠杆菌混合后，混合物应接种在含有的培养基上．质粒中抗氨苄青霉素基因称为 ，在筛选过程起作用．若要证明培养基是否符合实验要求，培养基上需接种 的感受态大肠杆菌，培养后不出现菌落则培养基合格．

（2）DNA分子中，一条链中的两个核苷酸通过 相连，已知碱性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸，构建a的过程中用该酶处理质粒，但目的基因不用碱性磷酸酶处理，这样做的目的是 ． 如果要检测目的基因 是否成功表达，须提取培养后大肠杆菌的 ， 用相应抗体检测．

（1）基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性．利用基因工程等技术培育转基因生物时，基因工程的四步骤如下：

第一步：目的基因的获取．获取方法有 （写出两种即可）．

第二步：基因表达载体的构建．该步骤常用的工具酶是 ．完整的重组载体应具备 种特殊DNA片段．

第三步：将目的基因导人受体细胞．如受体细胞为动物的 ，则常用的方法是显微注射法；如受体细胞为微生物细胞，则用 处理细胞，使其处于感受态，然后在一定温度下重组表达载体与缓冲液混合完成转化．

第四步： ．

（2）胚胎工程主要是对哺乳动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让它继续发育，获得人们所需要的成体动物的新技术．

①体外受精：对精于进行获能处理的方法有 ．获能的精于与成熟的卵子需在 中完成受精作用．

②早起胚胎的发育：受精卵不断增殖的过程，细胞分化最先出现在 期．

③胚胎移植：适合移植的胚胎是 ．

请据图回答：

（1）获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在 酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在 作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的 序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的 序列，再通过化学方法合成所需基因．

（2）利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有 、 、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成．

（3）由A和载体B拼接形成的C通常称为 ．

（4）在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是 ．

回答下列问题：