第2节基因工程的基本操作程序知识点题库

应用PCR技术扩增DNA，需要的条件是 ( )
①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等 ⑤mRNA ⑥核糖体

A . ①②③④ B . ②③④⑤ C . ①③④⑤ D . ①②③⑥

采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的方法正确的是（）
①将毒蛋白注射到棉花受精卵中
②将编码毒蛋白的DNA序列注射到棉花受精卵中
③将编码毒蛋白的DNA序列与质粒重组导入农杆菌，用该细菌感染棉花体细胞，再进行组织培养
④将编码毒蛋白的DNA序列与细菌质粒重组，借助花粉管通道进入受精卵

A . ①② B . ③④ C . ②③ D . ①④

根据mRNA的信息推出获取目的基因的方法是（）

A . 用PCR技术扩增mRNA B . 用DNA探针测出目的基因 C . mRNA探针测出目的基因 D . 用mRNA反转录形成目的基因

糖尿病目前的治疗途径之一是注射胰岛素，胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一．图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白A、B分别表示β﹣半乳糖苷酶与胰岛素 A、B链融合的蛋白）．请回答下列问题：

（1）根据图1，基因表达载体中没有标注出来的基本结构是．
（2）图1中启动子是酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达，氨苄青霉素抗性基因的作用是．
（3）人胰岛素由A、B两条肽链组成，可裉据组成肽链的氨基酸序列，确定编码胰岛素基因的碱基序列，再通过方法获得目的基因．
（4） β﹣半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肱链上蛋白醅的切割位点隐藏在内部，其意义在于．
（5） β﹣半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，而胰岛素A、B链中不含甲硫氨酸，溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白的目的是．

CRISPR/Cas9系统作为新一代基因编辑工具，具有操作简便、效率高、成本低的特点．该系统由Cas9和单导向RNA（sgRNA）构成．Cas9是一种核酸内切酶，它和sgRNA构成的复合体能与DNA分子上的特定序列结合，并在PAM序列（几乎存在于所有基因）上游切断DNA双链（如图所示）．DNA被切断后，细胞会启动DNA损伤修复机制．在此基础上如果为细胞提供一个修复模板，细胞就会按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变，从而实现基因的编辑．

（1）真核细胞中没有编码Cas9的基因，可利用基因工程的方法构建，将Cas9基因导入真核细胞．Cas9是在细胞中的合成的，而sgRNA的合成需要酶的催化．
（2）如图所示，CRISPR/Cas9系统发挥作用时，sgRNA分子的序列与基因组DNA中特定碱基序列因为所以能结合在一起，然后由Cas9催化水解，从而使DNA分子断裂．
（3）一般来说，在使用CRISPR/Cas9系统对不同基因进行编辑时，应使用Cas9和（填“相同”或“不同”）的sgRNA进行基因的相关编辑．
（4）通过上述介绍，你认为基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术在等方面有广阔的应用前景．（至少答出两点）

干旱会影响农作物产量，科学家们对此进行了研究．如图为用探针检验某一抗旱植物基因型的原理，相关基因用R和r表示．

（1）在利用PCR技术扩增R或r基因的过程中，利用可寻找抗旱基因的位置并进行扩增．
（2）若被检植株发生A现象，不发生B、C现象，则被检植物的基因型为．
（3）用从基因文库中获取目的基因的方法获取抗旱基因时需要用到限制酶，限制酶能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的断开．
（4）经检测，抗旱基因已经导入到烟草细胞，但未检测出抗旱基因转录出的mRNA，从构建基因表达载体的角度推测，最可能的原因是．
（5）要快速繁殖转基因抗旱烟草植株，目前常用的技术是，该技术的基本过程是：将离体的烟草细胞诱导脱分化形成，然后再分化出根和芽并发育成小植株．该技术在作物新品种的培育方面两个最主要的应用是：突变体的利用和．

小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因（目的基因）后再重组表达．下列相关叙述正确的是（　　）

A . 设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列 B . 用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 C . PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶 D . 不要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞

研究人员利用生物工程技术，探究猪bmp15基因在不同组织细胞中的特异性表达．该工程技术基本流程如图（EGFP基因控制合成增强型绿色荧光蛋白；过程②表示表达载体2成功导入各组织细胞）．请回答：

（1）过程①中，需利用限制酶处理表达载体1．为了大量获得猪bmp基因，可用技术，该技术需要用到的酶是．
（2）目前对动物细胞培养所需的营养条件还没完全研究清楚，培养受体细胞时往往需要添加等天然成分．同时还需在培养液中添加一定量的，以防污染．
（3）在实验结果的基础上，提取上述猪肌肉细胞的（mRNA/DNA），利用标记的EGFP基因作探针，进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因．
（4）据实验结果推测，猪bmp15基因在细胞特异性表达．

目的基因与载体结合所需的条件一般有（　　）

①同种限制酶 ②具有抗性基因的质粒 ③RNA聚合酶 ④目的基因 ⑤DNA连接酶 ⑥四种脱氧核苷酸．

A . ①②③④⑤⑥ B . ①②④⑤⑥③ C . ①②③④⑤ D . ①②④⑤

根据基因工程的有关知识回答下列问题．

（1）利用PCR技术扩增目的基因时，需要加入两种引物，原因是，引物I延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制的DNA序列，一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有个．
（2）基因工程的核心步骤是．其目的是使目的基因在受体细胞中，并可遗传给下代．
（3）大肠杆菌作为受体细胞最常用的转化方法是：首先用Ca²⁺处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为细胞．
（4）检测目的基因是否发挥功能作用的第一步是．

植物的抗旱机制很大程度上依赖植物激素脱落酸.2016年2月，中、美两国科学家宣布发现了PYL9蛋白（脱落酸的一种受体蛋白），利用转基因技术实现了启动子pRD29A控制PYL9过量表达，让水稻自身产生大量PYL9蛋白，显著提高了其抗旱性．请回答：

（1）已知PYL9蛋白的氨基酸序列，培育转基因抗旱水稻可用法来获得PYL9基因．
（2）一个PYL9基因进行扩增最简便的方法是使用技术，如果这个过程中消耗了引物62个，则进行了轮的DNA复制．
（3）科学家通过农杆菌转化法成功培育了该转基因水稻．构建的基因表达载体上除了图示标注外，还必须含有，所填充的这些序列（需要/不需要）全部转入到农杆菌Ti质粒的T﹣DNA区域．
（4）导入目的基因的重组细胞可通过技术培育成完整植株．
（5）检测水稻细胞是否含有PYL9基因的分子工具是．从个体水平上检测转基因水稻是否有抗性及抗性程度的方法是．

利用基因工程技术培育马铃薯新品种，目前已经取得丰硕成果．请根据教材所学知识回答下列问题：

（1）马铃薯易患多种疾病，导致其产量不高．通过导入抗病基因并使其表达可以提高马钤薯产量，基因工程中使用最多的抗病基因是和病毒的复制酶基因．
（2）马铃薯是双子叶植物，常用（方法）将目的基因导入马铃薯受体细胞中．构建好的基因表达载体基本结构包括目的基因、标记基因、、、等五部分．
（3）科学家还培育出抗除草剂的转基因马铃薯，其设计方法：修饰除草剂作用的靶蛋白，使其对除草剂（填“敏感”或“不敏感”），或使靶蛋白过量表达，植物吸收除草剂后仍能．
（4）将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因植物进行．

编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A，B，C，D，E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示．

回答下列问题：

（1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT…CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是．
（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为，加入了作为合成DNA的原料．
（3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2．
①由图2可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是．细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是．
②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果．

多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中正确的是（）

A . 变性过程中破坏的是DNA分子内磷酸二酯键 B . 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 C . 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 D . PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度相同

下列关于基因表达载体导入微生物细胞的叙述中，不正确的是( )

A . 常用原核生物作为受体细胞，是因为原核生物繁殖快，且多为单细胞，遗传物质相对较少 B . 受体细胞所处的一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态称为感受态 C . 感受态细胞吸收DNA分子需要适宜的温度和酸碱度 D . 感受态细胞吸收重组表达载体DNA分子的液体只要调节适宜的pH即可，没必要用缓冲液

以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是（）

A . 催化①过程的酶是RNA聚合酶 B . 催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温 C . ④过程发生的变化是引物与单链 DNA 结合 D . 如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的 40%，则一个双链DNA中，A与 G之和也占该 DNA 碱基含量的40%

科研人员通过PCR获得肝细胞特异性启动子﹣﹣白蛋白启动子，将该启动子与Cre重组酶基因结合构建表达载体，培育出在肝细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠。下列叙述正确的是（）

A . 将该表达载体导入肝细胞以获得转基因小鼠 B . PCR获得白蛋白启动子需设计特异性的引物 C . 构建该表达载体需要内切酶和DNA连接酶 D . 通过核酸分子杂交技术检测目的基因是否完成表达

接种疫苗是预防传染病的重要措施。下图为一种以人复制缺陷腺病毒（缺失El基因）为载体的某埃博拉病毒病疫苗研制流程示意图。相关叙述错误的是（）

A . 构建含GP基因的质粒时，需要使用限制酶和DNA连接酶 B . 在重组腺病毒中，GP基因上游必须有启动子以驱动其复制和表达 C . 疫苗在人体内发挥作用的过程中，腺病毒起载体作用 D . 疫苗中的重组腺病毒在人体内不能复制，对接种者比较安全

研究人员仿照制备乳腺生物反应器的思路，制备了一种膀胱生物反应器，用其获得人体特殊功能蛋白W的基本过程如下图所示。下列有关叙述正确的是（）

A . 步骤①和②所代表的操作分别是显微注射、早期胚胎培养 B . 步骤③时一般选择发育良好、形态正常的桑葚胚或原肠胚 C . 转基因动物乳腺上皮细胞与膀胱上皮细胞的遗传信息不同 D . 膀胱生物反应器将会受到转基因动物的性别和年龄的限制

研究人员将GNA基因和ACA基因连接成融合基因后再与pBH₂1质粒载体结合并导入玉米细胞，最终获得了抗蚜虫玉米新品种，部分操作如图所示。下列相关叙述错误的是（）

A . 提取GNA基因和ACA基因至少需要两种限制酶，①②过程均需要使用DNA连接酶 B . 为了保证基因转录方向正确，需要用限制酶KpnI和XhoI处理融合基因和载体 C . 只要检测出玉米细胞中含有融合基因，就说明抗蚜虫玉米培育成功 D . 在加入了卡那霉素的培养基上存活下来的玉米细胞可能成功导入了重组载体

第2节 基因工程的基本操作程序 知识点题库

第2节基因工程的基本操作程序知识点题库