第3章 基因工程 知识点题库

（1） ①利用PCR技术扩增目的基因的过程中，反应体系内要加入，PCR的全称是，第次复制的产物中才开始出现目的基因．

（2） 过程②构建基因表达载体时选用EcoRI和XhoI双酶切的优点是，目的基因与质粒连接形成重组DNA后含有个游离的磷酸基团．

（3） 基因表达载体A的组成除了目的基因外，还必须有，过程③VP40基因进入大肠杆菌细胞，并在大肠杆菌内维持稳定和表达，该过程可称为．

（4） 检测过程④是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是．

（1） 在基因表达载体中，目的基因的首端必须含有启动子，它是识别和结合位点．

（2） 请写出一种将目的基因导入油料植物细胞可以采用的方法：．

（3） 若要检测（2）中获得的植物细胞染色体上是否含有目的基因，可采用技术．若利用蛋白质工程继续提高油料植物的出油率，其设计流程应从预期的蛋白质功能出发，设计预期的结构，推测出应有的序列，然后找到相对应的序列，再用转基因技术改变现有性状．我国在种植转基因油料植物的同时仍保留原来非转基因油料植物等其他原有品种，这是依据生态工程中的原理．

（1） 实验步骤：

①；

②．

（2） 实验分析及基因在染色体上的位置：

①若后代中的烟草全部表现为抗花叶病，则基因在染色体上的位置可表示为 ．

②若，则基因在染色体上的位置可表示为 ．

③若，则基因在染色体上的位置可表示为 ．

（1） 科研人员常用人工合成的方法获得胰岛素基因，所用的模板mRNA一般取自细胞。

（2） 提供①的山羊的性别是，①经酶处理可以得到③。一般情况下，②是发育到（时期）的细胞。

（3） 将含有④的基因表达载体导入⑤常用的方法是。

（4） 一般情况下，胚胎⑥需培养到时期才能进行胚胎分割。如果胰岛素基因仅仅整合到某一对同源染色体中的一条上，且基因得以成功表达，那么，由胚胎⑦和⑧发育而成的两只山羊是否都能产生人的胰岛素？，为什么？

（1） 该“水泡粪养猪技术”工程体现了（答出2点即可）等生态工程的基本原理。稻气袖中的微生物通过（填生理过程）将有机物分解。从物质和能量的角度分析，该生态系统实现了。

（2） 为获得抗虫农作物（如抗虫玉米），将抗血基因导人受体细胞后，可通过技术得到植株.从个体生物学水平鉴定该植株能否抗虫时采用的方法是。

（3） 为大量繁殖良种缝，可先给良种母猪注射，使其超数排卵，并进行体外受精，将受精卵培育成早期胚胎后移植到本地母猪体内。受体母猪对移入子宫的外来胚胎基本上不会发生反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能。

（1） 与繁育良种动物的一般方式相比较，胚胎移植的优势是。为提高良种奶牛的繁殖能力，在获取卵细胞之前，需用促性腺激素对奶牛进行处理，目的是。a过程中卵细胞受精的标志是。

（2） “转基因牛”D培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是。

（3） 图中数字标号①代表的结构为，c→d过程需对其均等分割的目的是。

（4） 在培育良种牛的过程中，运用了动物细胞培养技术，在动物细胞培养过程中，为防止杂菌污染，需要加入一定量的。

（1） 利用基因工程制造Con-InsC1这种速效胰岛素过程中，构建基因表达的载体一般包括目的基因、启动子、标记基因和。启动子的作用是，标记基因的作用是。

（2） 为了获得目的基因可以通过提取分析Con-InsGl毒蛋白中的序列推知毒蛋白基因的核苷酸序列，再用DNA合成仪直接大量合成。基因工程中需要DNA连接酶，根据酶的来源不同分为两类。

（3） 将人工合成的目的基因导入大肠杆菌体内，一般先用药物处理大肠杆菌使之成为细胞。再将重组DNA溶于中与该类细胞融合，在一定温度下促进细胞吸收重组DNA分子完成转化过程。

（4） 经过目的基因的检测和表达，获得的Con-InsC1毒蛋白活性未能达到期待的“速效胰岛素”的生物活性，导致这种差异的原因可能是。

（1） 对获取的目的基因可以通过 技术进行扩增。

（2） 将目的基因导入植物细胞常采用的方法是 ，该方法的主要优点是其运载体上含有片段，可将目的基因插入到受体细胞染色体的 DNA 上。检测目的基因是否插入成功的方法 是，该方法应该用 作为探针。检测目的基因是否翻译成了相应蛋白质，利用的技 术是 。

（3） 将导入目的基因的受体细胞培育成转基因植株涉及的细胞工程技术是，该技术的原 理是。

（1） 图1中为获取大量的去核卵母细胞，往往需对相应母牛使用处理，使其超数排卵，收集并选取处在时期的卵母细胞，通过显微操作去除细胞核。供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代以内的细胞，其原因是。

（2） 胚胎移植时，为使代孕母牛能处于适合的生理状态，需要用激素对其进行处理。为获得更多转基因母牛，可在胚胎移植前对胚胎进行。

（3） SRY-PCR法性别鉴定的基本程序是：提取牛胎儿成纤维细胞的DNA，经PCR反应体系扩增SRY基因（Y染色体上特有的性别决定基因）片段，然后对扩增产物进行检测。

①PCR反应体系中通常含有模板DNA，引物、Taq酶、、缓冲液等。根据SRY基因序列设计的引物长度一般为20~24个核苷酸，其不宜过短的原因主要是，两种引物中G+C的含量相差不宜过大，原因主要是。

②PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、和延伸三步。在循环之前，常要进行一次预变性，其目的是。

③细胞核内DNA的复制过程如图2所示，其中有一条子链是先合成短的脱氧核苷酸链片段（称为冈崎片段），再形成较长的分子，而在PCR过程中无冈崎片段形成的原因是。

④若扩增产物含大量SRY基因片段，则该种牛胎儿成纤维细胞（填“能”或“不能”用作技术流程中转化过程的受体细胞。

（1） 利用抗病性强的植株获得抗病目的基因有多种方法。现已获得纯度高的抗病蛋白（可作为抗原），可通过单克隆抗体技术获得特异性抗体探针，并将基因文库中的所有基因进行表达，利用探针进行检测，找出表达产物，进而获得与之对应的目的基因。该方法的原理是。

（2） 将含某标记基因的载体用EcoRⅠ酶切，会产生末端。为防止载体与目的基因反向连接并减少自连，可选用与EcoRⅠ酶切后产生的末端（填“相同”或“不同”）的另一种限制酶同时切割。

（3） 将目的基因导入双子叶植物常利用农杆菌转化法，其主要原理是插入有目的基因的农杆菌的可转移至植物伤口处的细胞，并完成转化。

（4） 利用动物细胞培养生产转基因产物时，为保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境，可进行的操作有（写出2点即可）。

（1） 转基因技术能按照人们的愿望，赋予生物新的，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，转基因技术是在分子水平上进行的设计和施工，其核心步骤是。

（2） 叶绿体转基因技术是将外源基因整合到叶绿体基因组中，以实现改良叶绿体功能、创造新品种的目的。叶绿体转基因技术不能阻止外源基因通过（填“花粉”或“种子”）传播，原因是。

（3） “终结者”种子技术是通过植入“终结者基因”，阻滞种子胚胎后期发育，最后得到成熟但不育的种子。“终结者”种子技术在一定程度上解决了转基因技术存在的问题，但危害到了农民自行留种的权利，也不能消除人们对转基因食品安全性的担忧。

（4） “外源基因清除”技术将“外源基因清除”调控组件与基因表达载体的必备组件重组后构建出新的基因表达载体转入受体细胞中表达，待外源基因完成相应的功能后，“外源基因清除”调控组件将全部外源基因从花粉、种子和果实等特定器官中彻底清除。“外源基因淸除”调控组件由“特定器官特异启动子、重组酶（FLP）基因和融合识别位点（LF）”构成，LF是利用噬菌体的Cre/LoxP系统和酵母的FLP/FRT系统创造出的融合识别位点。FLP基因在适当的时间和空间表达后，重组酶FLP可识别融合识别位点LF并在L与F之间完成切割，从而将两个融合识别位点之间的序列在特定时期从特定植物器官的细胞基因组中全部清除。其技术原理如下图所示：

①图中基因表达载体的必备组件包括。通过插入不同的，以决定在不同器官中表达重组酶，从而将相应器官中的某些基因序列从基因组中彻底清除，按需获得不含外基因的种子、果实等。请在答题卡方框中填写重组酶发挥清除作用后剩余的序列组合。

②农民播种经“外源基因清除”技术处理的转基因作物种子（填“能”或“不能”）获得收成，该种子播种后获得的作物（填“具有”或“不具有”）转基因形状。

③科学家将RNAi—FLP基因（FLP基因的RNA干扰系统）插入到外源基因清除系统中，通过喷施诱导剂激活RNAi—FLP基因从而留存转基因种子，试分析该方式留存转基因种子的原理是。