动物细胞培养技术知识点题库

根据培养基的物理性质划分，植物组织培养和动物细胞培养所常用的培养基分别是( )

A . 固体培养基、固体培养基 B . 固体培养基、液体培养基 C . 液体培养基、固体培养基 D . 液体培养基、液体培养基

某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备用某种培养液对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。下列说法正确的是（）

A . 在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理 B . 细胞培养应在含5%CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的作用是刺激细胞的呼吸 C . 甲、乙细胞在持续的原代培养过程中，乙会出现停止增殖的现象 D . 仅用该培养液也能用来培养乙肝病毒

阅读如下材料，回答问题：

材料1：某研究小组对小鼠的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行培养．

材料2：基因敲除是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术．

（1）材料1属于工程范畴．制备肝细胞悬浮液时剪碎肝组织，再用处理，肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO₂中，其主要作用是．为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的．
（2）材料2属于基因工程的范畴．将某基因插入到基因表达载体的目的基因中，使目的基因，通过技术导入ES细胞中．观察基因敲除前后生物体性状的变化，可以研究目的基因（敲除基因）的；敲除抗原决定基因，还可获得适合人体移植的其他动物器官，减弱或消除．

下列关于生物工程中酶的作用不正确的是（）

A . 纤维素酶可用于植物体细胞杂交 B . 胰蛋白酶可用于动物细胞培养 C . 限制性核酸内切酶只用于提取目的基因 D . 顶体酶可将透明带溶出一条孔道

在25℃的实验条件下可顺利完成的是（）

A . 大鼠神经细胞的培养 B . 用斐林试剂鉴定还原糖 C . 观察线粒体的形态和分布 D . 荧光标记的哺乳动物细胞融合实验

关于动物细胞培养的叙述错误的是（）

A . 用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织 B . 将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞 C . 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱落，制成细胞悬液 D . 动物细胞只能传至50代左右，所培育的细胞都会衰老凋亡

实验小鼠皮肤细胞培养的基本过程如图所示。下列叙述错误的是（）

A . 甲过程需要在无菌条件下进行 B . 乙过程需要将获得的皮肤细胞制成细胞悬液 C . 丙过程是原代培养出现接触抑制现象 D . 丁过程是传代培养，细胞不能保持二倍体核型

腐乳是我国传统的发酵豆制品，已有近千年的历史。腐乳的生产过程一般分为前酵期（培菌）和后酵期（装瓶后常温条件下放置，自然发酵 3 个月），采集各时段腐乳坯样品，测定相关物质含量如图 1 所示。回答下列问题：

（1）豆腐为毛霉的生长提供的基本营养物质有碳源、。毛霉产生的酶能将酪蛋白分解而产生透明圈，将三种纯化的毛霉菌种接种在酪蛋白培养基中得到三种单菌落甲、乙、丙，其菌落直径平均值分别为 3.2cm、2.8cm、2.9cm，菌落与透明圈一起的直径平均值分别为 3.7cm、3.5cm、3.3cm。应选择菌落（填“甲”、“乙”或“丙”）作为产蛋白酶活力高的毛霉候选菌。
（2）装瓶腌制腐乳时，在接近瓶口的表面要将盐铺厚一点，原因是。
卤水中的香辛料和料酒（食用酒）的作用是。
（3）据图 1 分析从“白块”到“晾晒2d”，腐乳坯中游离氨基酸含量变化的最主要原因是；加盐腌制（腌坯）之后，腐乳坯中的游离氨基酸含量下降的原因（答出两点）。请预测后酵期发酵瓶中的游离氨基酸的变化是。
（4）科学家常用法将 CRISPR—Cas9 基因编辑系统导入猕猴细胞，编辑系统利用 sgRNA 来识别靶基因 DNA，并引导 Cas9 蛋白剪切 DNA，使靶基因发生改变，实现基因敲除。sgRNA 能识别靶基因 DNA 的原因是。
（5）在体外培养猕猴体细胞时，需要一定比例的 O₂和 CO₂ ，故通常采用或（填实验器材），将其置于 CO₂ 培养箱中进行培养。所使用的培养基属于（填“合成”或“天然”）培养基，培养基除了灭菌外，还需要通过来保证无菌无毒环境。
（6）进行体细胞克隆选择去核卵母细胞作为受体细胞，可能原因是（答出两点）。
（7）克隆猴被用于人类疾病研究与治疗中所具有的突出优点是。（答出一点）

如图表示核移植与克隆动物的相关图解，有关叙述中不正确的是（）

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A . 图示过程说明高度分化的动物细胞仍具有发育的全能性 B . 用于核移植的供体细胞①一般都选用传代10代以内的细胞 C . 采集的卵母细胞培养到的②时期表示减数第二次分裂中期 D . 选用去核卵母细胞的主要原因是其细胞质可使体细胞核的全能性表达

下列关于动物细胞培养的叙述，错误的是(　　)

A . 用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织 B . 将所取的组织先用胰蛋白酶等处理使其分散成单个细胞 C . 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成细胞悬液 D . 动物细胞培养只能传至50代左右，所培养的细胞都会衰老死亡

在一定剂量范围内苜蓿中的黄酮对动物乳腺上皮细胞增殖具有一定促进作用。为研究不同浓度苜蓿黄酮对乳腺上皮细胞的增殖及其对乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响，科研人员用MTT法以细胞悬液OD值为观测指标测定细胞增殖能力，进行了相关实验研究。请完善实验思路，并根据实验结果进行分析。

实验材料与仪器：

用二甲基亚砜（DMSO）配置的浓度为25、50、75和100µ/mL苜蓿黄酮溶液、用动物细胞培养液配制的一定密度的动物乳腺上皮细胞悬液、光电比色计、MTT法细胞增殖测定仪器等

（要求与说明：MTT法测定细胞增殖具体操作不作要求；乳酸脱氢酶（LDH）活性检测不作要求；在一定细胞数范围内，OD值与细胞数成正比；培养过程中培养液变化忽略不计；实验条件适宜）

（1）完善实验思路
①取若干培养瓶，各加入998mL的细胞悬液，分为5组，编号甲~戊，每组5个重复。

②甲组：加入2mL二甲基亚矾；。

③。

④实验第5天，。

⑤。

（2）结果分析与结论

苜蓿黄酮对某动物乳腺上皮细胞增殖及其乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响

项目	时间/d	甲组	乙组25µg/mL	丙组50μg/mL	丁组75μg/mL	戊组100µg/mL
细胞增殖	3	0.37	0.38	0.38.	0.37	0.37
细胞增殖	5	0.39	0.39	0.41*	0.46*	0.40*
乳酸脱氢酶活性	5	1078.80	675.60*	573.21*	1138.04	796.89*

注：表中*表示与对照组比较有统计学上的显著差异，不带*数据表示与对照组无显著差异；（单位：略）

根据上表可得实验结论：

结论一：作用时间较短时（3天），苜蓿黄酮对细胞增殖无明显作用；

结论二：；

结论三：。

（3）实验分析
细胞呼吸中，乳酸脱氢酶（LDH）催化的反应（填“产生”或“不产生”）ATP，这一催化反应发生在（填“需氧”或“厌氧”）呼吸中。本实验中还可用细胞培养上清液中LDH的浓度代表细胞的受损程度的原因是。为减少微生物对实验结果带来的干扰，实验中的动物细胞培养基中添加的胎牛血清可采用（方法）去除杂菌。

下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（）

A . 培养至细胞发生接触抑制时，瓶壁上的细胞呈双层分布 B . 在细胞的传代培养过程中，有部分细胞的基因型会发生改变 C . 骨髓瘤细胞的传代培养次数通常不是无限的 D . 传代培养时，无需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理

下列事例中不属于克隆的是（）

A . 通过PCR获取目的基因 B . 用液体培养基扩大培养大肠杆菌 C . 花生种子发育成完整植株 D . 通过动物细胞培养得到相应的细胞

下表为动物细胞培养技术与植物组织培养技术的比较，错误的是（）

比较项目	原理	培养基区别	结果	培养目的
植物组织培养	细胞的全能性	需加植物激素	一般培育成植株	快速繁殖，培育无病毒植株等
动物细胞培养	细胞膜的流动性	需加动物血清	培育成相应的细胞	获得细胞或细胞的产物等

A . 原理 B . 培养基区别 C . 结果 D . 培养目的

小鼠胚胎干细胞经定向诱导可获得多种功能细胞，制备流程如下图所示。下列叙述错误的是（）

A . 为获得更多的囊胚，采用激素注射促进雌鼠排出更多的卵母细胞 B . 用胰蛋白酶将细胞a的膜蛋白消化后可获得分散的胚胎干细胞 C . 胚胎干细胞和诱导出的各种细胞都需在CO₂培养箱中进行培养 D . 细胞a和细胞b因分化程度不同，所以全能性高低不同

人的血清白蛋白（HAS）在临床上需求量很大，通常从血液中提取，成本较高。如果将人的血清白蛋白基因导入奶牛细胞中，利用奶牛乳汁来生产血清白蛋白，能够极大地降低成本，且安全高效。下图是利用奶牛乳汁生产HAS的过程图，下列叙述正确的是（）

A . 在①进入③之前，必须构建基因表达载体 B . 在⑤的囊胚阶段可以取内细胞团细胞做DNA分析，进行性别鉴定 C . 该过程综合利用了体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等细胞工程技术 D . 血清白蛋白基因只在奶牛的乳腺细胞中表达与是否有起始密码有关

下图 1 表示利用生物技术制备抗羊红细胞的单克隆抗体的过程；图 2 表示培育试管牛的生产流程。请据图回答下列问题：

（1）图 1 所示过程诱导动物细胞融合所特有的方法是使用诱导细胞融合。融合后的细胞至少要进行两次筛选，一次是通过培养基，筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过检测，筛选出能分泌抗羊红细胞的单克隆抗体的杂交瘤细胞。
（2）杂交瘤细胞体外培养过程中，为避免细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，常采取的措施是，提供气体条件 CO₂ 的作用。
（3）图 2 中①过程表示（填技术名称）。通常母牛每次只排出一枚卵母细胞，可用激素对其进行超数排卵处理。
（4）从母牛体内获得的卵母细胞需要到（时期）才能与精子结合。胚胎培养液成
分除无机盐和有机盐类外，还需添加等营养成分以及血清等物质。移植后的胚胎能在受体子宫中存活，这与受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生有关。

下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（）

A . 胰蛋白酶能消化细胞中的胶原纤维和其他成分，获得细胞悬液 B . 细胞进行一次传代培养所需时间等于一个细胞周期的时间 C . 培养基中添加胎牛血清有助于提高动物细胞克隆形成率 D . 动物细胞只能贴壁生长，不能进行悬浮培养

科学家尝试利用生物工程技术培育转基因奶牛，并设想从奶牛乳腺细胞分泌的乳汁中提取人胰岛素，其操作的基本过程是：PCR扩增胰岛素基因→导入牛的受精卵→早期胚胎培养→胚胎植人受体母牛子宫→分娩产下转基因奶牛。回答下列问题：

（1）上述转基因奶牛的培育过程应用了基因工程、等生物工程技术，其中基因工程中最核心的步骤是。
（2）对精子．卵细胞或受精卵的体外培养有严格要求，除了满足无菌、无毒的环境外，还需要一定的营养物质，以及和气体等条件，该气体条件是指。
（3）通常选用时期的胚胎进行移植，不选用原肠胚进行胚胎移植的原因是。
（4）为保证分娩产下的是转基因奶牛，需要对导入目的基因之后的早期胚胎进行。待转基因奶牛成年后，从其分泌的乳汁中提取相应的蛋白质进行实验，可确定其乳汁中是否含有人胰岛素。

下图是利用体细胞核移植技术获得克隆奶牛的流程图。相关叙述错误的是（）

A . 过程①需要提供95%空气和5% CO₂的无菌混合气体 B . 过程①和过程③所使用的培养基成分不完全相同 C . 可用电刺激使供体细胞和去核的次级卵母细胞融合 D . 乙牛和代孕丙牛需要用促性腺激素进行同期发情处理

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