基因工程的基本工具（详细）知识点题库

下列黏性末端属于同一种限制性内切酶切割的是（）

A . ①② B . ①③ C . ②④ D . ③④

下面是3种限制性核酸内切酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图(箭头表示切点,切出的断面为粘性末端)。下列叙述错误的是（）
限制酶1：—↓GATC—；限制酶2：—CCGC↓GG—；限制酶3：—G↓GATCC—

A . 不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点,体现了酶的专一性 B . 限制酶2和3识别的序列都包含6个碱基对 C . 限制性酶1和酶3剪出的粘性末端相同 D . 能够识别和切割RNA分子内一小段核苷酸序列的酶只有限制酶2

关于下列黏性末端的描述，正确的是

A . ①与③的黏性末端相同，必定是由相同的限制性核酸内切酶切出 B . ①和④是不同种限制性核酸内切酶处理后得到的两个DNA片段 C . DNA连接酶与DNA聚合酶均能作用于上述黏性末端 D . 形成④需要脱去2个水分子

某研究所利用基因工程、胚胎工程等技术获得能产生人凝血因子的转基因山羊．回答下列问题：

（1）基因工程的基本操作流程中，当获取目的基因后，在将其中导入受体细胞前需要进行一个重要的操作步骤，即构建，该步骤使用的两种工具酶分别是．

（2）从公羊体内采集的精子需经过处理，才能在体外与卵细胞结合形成受精卵．常用法将目的基因导入受精卵中，受精卵在体外培养至阶段时再移植到母羊子宫中．

（3）利用分子杂交技术可检测转基因山羊细胞中的人凝血因子是否转录出了（填“tRNA”、“mRNA”或“rRNA”）；利用针对的抗体进行抗原﹣抗体杂交，可检测目的基因是否翻译．

基因疫苗指的是DNA疫苗，是将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导人人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答．回答下列问题：

（1）要获得编码抗原的基因，首先要提取出病原体的DNA或RNA，并将RNA ，要大量获得表达特异抗原的基因，可采用方法．

（2）将抗原基因插入质粒的过程，即构建基因表达载体的过程，通常一个基因表达载体的组成，除了抗原基因（目的基因）外，还有

（3）一般将重组质粒利用的方法送人受体细胞，进入细胞核并表达抗原蛋白．

（4）与传统疫苗相比，基因疫苗不仅能在宿主体内较长时间存在，还可以诱导产生（填“体液免疫”“细胞免疫”或“体液免疫和细胞免疫”）．

（5）一个质粒载体可插人多个抗原基因组成多价疫苗，导人这样的疫苗可达到的目的．

（6）基因疫苗是在基因治疗技术的基础上发展而来的．基因治疗是把导入病人体内，使该基因表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的．

p53基因是人体内一种抑癌基因．该基因编码的p53蛋白可对癌变前的DNA损伤进行修复，使其恢复正常，或诱导其进入休眠状态或细胞凋亡，阻止细胞癌变．“今又生”是我国首创的基因治疗药物之一，是世界首个获准上市的基因治疗药物，其核心成分是利用腺病毒和人p53基因拼装得到的重组病毒．“今又生”药物中的腺病毒经基因工程改造后，在宿主细胞内不能复制，不能整合到染色体上．请回答下列问题：

（1）将p53基因与腺病毒拼装成重组病毒，需要用到的工具酶有．常用的基因工程载体除动植物病毒外，还有．

（2）限制酶能将特定序列的核苷酸之间的键切开，形成末端．

（3）在“今义生”的生产中，科学家选择性地放弃了一般载体都应该具有的，以获得更高的安全性能．p53基因应插入载体的之间，以便于基因的表达．

（4）p53基因的大量扩增可以采用PCR技术，该技术中需使用的一种特殊的酶是．如图是需要扩增的p53基因在DNA中的位置示意图，扩增过程需要种引物．n次循环之后，只含目的基因的片段占所有扩增产物的比例为　　．

下表为常用的限制性核酸内切酶及其识别序列和切割位点，有关说法正确的是

限制性核酸内切酶	识别序列和切割位点	限制性核酸内切酶	识别序列和切割位点
BamHⅠ	G↓GATCC	KpnⅠ	GGTAC↓C
EcoRⅠ	G↓AATTC	Sau3AⅠ	↓GATC
HindⅡ	GTY↓RAC	SmaⅠ	CCC↓GGG

（注：Y表示C或T，R表示A或G）（）

A . 限制性核酸内切酶的切点位于识别序列的内部 B . 限制性核酸内切酶切割后不一定形成黏性末端 C . 一种限制性核酸内切酶只能识别一种脱氧核苷酸序列 D . 不同限制性核酸内切酶切割后一定形成不同的黏性末端

如图所示限制酶切割基因分子的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列和切点是（）

A . CTTAAG，切点在C和T之间 B . CTTAAG，切点在G和A之间 C . GAATTC，切点在G和A之间 D . GAATTC，切点在C和T之间

已知限制性核酸内切酶BglⅡ和BamHⅠ的识别序列和切割位点分别为A↓GATCT和G↓GATCC．下列有关叙述，不正确的是（　　）

A . 这两种酶的识别序列都为6个脱氧核苷酸对 B . 用这两种酶切割质粒和含目的基因的DNA分子所产生的黏性末端可形成重组DNA分子 C . 用酶BglⅡ切出的目的基因与酶BamHⅠ切割的质粒重组后，仍可以被这两种酶切开 D . 这两种限制酶识别的序列都为回文序列

下列关于人体有机物的叙述，正确的是（）

	物质	合成细胞	作用
A	载体蛋白	各细胞	协助蛋白质等大分子的跨膜运输
B	抗HIV抗体	B细胞	与T细胞内的HIV结合，发挥免疫作用
C	ATP	各细胞	为绝大多数需要能量的生命活动直接提供能量
D	DNA连接酶	增殖的细胞	将互补的碱基通过氢键连接起来

A . A B . B C . C D . D

胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一．如图是该方法所用的基因表达载体，请回答下列问题：

（1）图中基因表达载体中没有标注出来的基本结构是．
（2）图中启动子是酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是．
（3）构建基因表达载体时必需的工具酶有．
（4） β﹣半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于．
（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且β﹣半乳糖苷酶被切成多个肽段，其原因可能是．

下图所示限制酶切割某DNA分子的过程，从图中可以知道，该酶能识别的碱基序列及切点是（）

A . CTTAAG，切点在C和T之间 B . CTTAAG，切点在G和A之间 C . GAATTC，切点在G和A 之间 D . GAATTC，切点在C和T之间

下列关于各种酶作用的叙述,不正确的是（）

A . DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接 B . RNA聚合酶能与基因的特定位点结合,催化遗传信息的转录 C . 限制酶和DNA连接酶作用的化学键相同 D . DNA连接酶对“缝合”序列进行特异性识别，具有能专一性催化的特点

如图所示为农杆菌转化法示意图。请回答以下问题：

（1）图中①过程用到的工具酶的特点是。下列所示的黏性末端是由种限制性核酸内切酶作用产生的。
（2）图中②过程用到的工具酶是，该过程是基因工程最核心的步骤，即。
（3）图中④过程的原理是。
（4）检验基因工程是否成功。首先应检测，这是外源基因能否在真核细胞内的关键；其次，利用法检测目的基因是否转录出相应的mRNA；最后，利用抗原一抗体杂交法检测目的基因是否翻译成蛋白质。

将外源基因导入受体细胞时，常用的运载体不包括（）

A . 质粒 B . 噬菌体 C . 动植物病毒 D . 大肠杆菌

下表为常用的限制酶及其识别序列和切割位点,由此推断的以下说法中,正确的是(　　)

限制酶名称	识别序列和切割位点	限制酶名称	识别序列和切割位点
BamH Ⅰ	5'-G^↓GATCC-3'	KpnⅠ	5'-GGTAC^↓C-3'
EcoRⅠ	5'-G^↓AATTC-3'	Sau3AⅠ	5' GATC-3'
HindⅡ	5'-GTY^↓RAC-3'	SmaⅠ	5'-CCC^↓GGG-3'

(注 Y=C或T,R=A或G)

A . 一种限制酶可能识别2种核苷酸序列 B . 限制酶切割后一定形成黏性末端 C . 不同的限制酶切割DNA分子形成的黏性末端一定不同 D . 限制酶的切割位点在识别序列内部

某线性DNA分子含有5 000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。两种限制酶的识别序列和切割位点如下图所示。下列有关说法不正确的是(　　)

酶a切割产物(bp)

之后酶b切割产物(bp)

2 100；1 400；

1 000；500

1 900；200；800；600；1 000；

500

A . 在该DNA分子中，酶a与酶b的识别序列分别有3个和2个 B . 酶a与酶b切出的黏性末端不能相互连接 C . 酶a与酶b切断的化学键不相同 D . 用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，

序列会明显增多

人乳铁蛋白（hLF）对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如下图。RT-PCR过程需先进行逆转录合成DNA，然后再进行PCR。图中Ase I、Nhe I、Sal I、BamH I代表相关限制酶切点，neo^r为新霉素抗性基因，BLG基因为B乳球蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答：

（1）过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR，是因为。在RT-PCR过程中，加入的引物需在端添加两种限制酶的识别序列，以便于hLF基因插入pEB中。
（2）过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是。
（3）将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，能够存活的细胞应该是导入的细胞，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中，以筛选出转染成功的细胞。
（4）科研过程中，也可以用PCR技术检测受体细胞是否成功转入了目的基因。提取转染后的细胞的全部DNA分子，用目的基因的引物扩增后进行DNA电泳，结果如图所示：1号泳道为标准（Marker），2号泳道为阳性对照（提纯的目的基因片段），3号泳道为实验组。请问，标准（Marker）的实质为，3号泳道的杂带出现的原因一般有（在下列选项中选择）。
①模板受到污染 ②引物的特异性不强 ③退火温度偏低温度偏高

定点突变技术是指通过PCR等方法改变DNA片段特定位点的碱基，从而获得突变基因的操作技术。研究者将酿酒酵母S288c的APA1基因与EGFP（增强型绿色荧光蛋白）基因构成融合基因，并进一步构建表达载体，以该载体为模板，再通过PCR介导的定点突变技术向APAl基因中分别引人APA1-1/2/3/4四个突变位点，分别转化酿酒酵母YS59．回答下列问题：

（1）构建APA1基因与EGFP基因的融合基因时，需借助的工具酶是，使APA1基因与EGFP基因首尾相连，处在同一、等调控序列的控制之下；EGFP基因的作用是。
（2）上述PCR介导的定点诱变过程中，除以载体为模板外，还需要加入四种，两种根据的序列设计合成且含有突变位点的互补的引物。
（3）若在荧光显微镜下观察到受体细胞有绿色荧光，表明。
（4）若将定点突变的基因导人植物细胞，在一定（答出2点）等条件下，转基因细胞经过脱分化形成，进一步诱导其，可以发育成转基因植株。

在重组DNA技术中，将外源基因送入受体细胞的载体可以是（）

A . 大肠杆菌 B . 动物病毒 C . 植物病毒 D . 噬菌体

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