基因工程的基本工具（详细）知识点题库

下列有关基因工程中限制酶的描述中，错误的是 ( )

A . 一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B . 限制酶的活性受温度的影响 C . 限制酶能识别和切割RNA D . 限制酶可从原核生物中提取

关于图示DNA分子的说法，不正确的是(　　)

A . 限制性核酸内切酶可作用于①部位，解旋酶作用于部位③ B . ②处碱基对的缺失会导致染色体结构变异，且可以遗传 C . 把此DNA放在含¹⁵N的培养液中复制两代，子代中含¹⁵N的DNA占100% D . 若该DNA中A为p个，占全部碱基的n/m(m＞2n)，则G的个数为(pm/2n)－

对下图所示黏性末端的说法正确的是

A . 甲、乙、丙黏性末端是由两种限制性核酸内切酶作用产生的 B . 图乙中的酶切位点在A与G之间 C . 如果甲中的G发生突变，限制性核酸内切酶可能不能识别该切割位点 D . 构建重组DNA分子所用限制性核酸内切酶和DNA连接酶分别作用于a处和b处

根据高中教材中的相关知识分析，下列有关酶功能的叙述正确的是（）

A . 蛋白酶的主要作用是破坏肽键，从而使蛋白质变性失活 B . DNA连接酶能够将单个脱氧核苷酸连接成DNA片段 C . DNA聚合酶能够催化DNA的转录 D . 限制性核酸内切酶将特定核苷酸序列中的磷酸二酯键切割

下面是3种限制性核酸内切酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图(箭头表示切点,切出的断面为粘性末端)。下列叙述不正确的是（）
限制酶1：——↓GATC——；
限制酶2：——CCGC↓GG——；
限制酶3：——G↓GATCC——

A . 不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点 B . 扩增目的基因时，PCR仪中要加入DNA连接酶 C . 限制性酶1和酶3剪出的粘性末端相同 D . 限制酶2和3识别的序列都包含6个碱基对

治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义。流程如下：

（1）过程①采用的是细胞工程中的技术，过程②采用的是胚胎工程中的技术。

（2）体细胞进行体外培养时，所需气体主要有O₂和CO₂ ，其中CO₂的作用是维持培养液的。

（3）如果克隆过程中需进行基因改造，在构建基因表达载体（重组载体）时必须使用和两种工具酶。基因表达载体上除目的基因外，还需有基因，以便选出成功导入基因表达载体的细胞。

（4）胚胎干细胞可以来自于囊胚中的。在一定条件下，胚胎干细胞可以分化形成不同的组织器官。若将图中获得的组织器官移植给个体 (填“A”或“B”)，则不会发生免疫排斥反应。

单克隆抗体可用于疾病的诊断和治疗，制备H7N9病毒单克隆抗体的流程如下：

（1）过程②代表基因工程操作步骤中的，进行过程③前须先构建．

（2）H7N9抗原基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是，可采用技术进行检测．

（3）细胞Ⅰ是细胞，细胞Ⅱ应具有的特点是．

（4）若要预防H7N9禽流感，可用图中的作疫苗，对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的进行特异性结合检测．

如图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图．复制原点是质粒能正常复制的必需组成．图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度．请据图回答：

（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是

（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到酶．如果是两两重组，可能有种长度的重组结果．

（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤．现运用EcoRⅠ酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为和，或者和的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功．

（4）若选择自身不含lacZ基因并对抗生素敏感的大肠杆菌作为受体细胞，则在筛选导入成功的受体细胞时应如何操作？

（5）下列关于质粒运载体的说法正确的是（多选）．

A．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解

B．质粒运载体只能在与目的基因重组后进入细胞

C．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的

D．质粒运载体的复制和表达也遵循中心法则

E．质粒运载体只有把目的基因整合到受体细胞的DNA中才能表达

F．没有限制酶就无法使用质粒运载体．

限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是﹣C↓AATTG﹣和﹣G↓AATTC﹣．如图表示四种质粒和目的基因，其中，箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因．适于作为图示目的基因运载体的质粒是（　　）

A .

B .

C .

D .

回答利用农杆菌转化法培育转基因植物的相关问题：

（1）培育转基因植物过程的核心步骤是构建基因表达载体，其目的是使目的基因在受体细胞中，并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用．
（2）构建基因表达载体时，可利用酶连接被限制酶切开的键．
（3）组成基因表达载体的单体是．基因表达载体中的启动子是识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过（填过程）合成mRNA．目的基因表达的翻译过程的终止信号是．
（4）用两种限制酶Xba I和Sac I（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．若利用该片段构建基因表达载体，应选用图中的何种Ti质粒？．

下列关于如图所示DNA分子片段的说法，正确的( )

A . 限制酶可作用于①部位，解旋酶作用于③部位 B . 限制酶可作用于③部位，解旋酶作用于①部位 C . 作用于①部位的限制酶同时也可以作用于④部位 D . 作用于①部位的限制酶与作用于⑤部位的限制酶的碱基识别顺序相反

白僵菌和绿僵菌是两种寄生在昆虫体内的真菌，现广泛应用于农林害虫的防治。科研人员利用基因工程术将绿僵菌的毒力蛋白相关基因M导入白僵菌细胞内，发现白僵菌杀虫能力大幅提高。请回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增M基因前，首先需获得绿僵菌的再根据序列设计2种特异性引物。科研人员还在2种引物上加入了不同的限制酶切位点，主要目的是便于目的基因与运载体连接及。在PCR反应体系中除了加入模板DNA，还需要添加（答出2点）。
（2）若要使M基因在受体细胞中稳定表达，需要，而不能将目的基因直接导入受体细胞。
（3）为检验M基因是否在白僵菌细胞内稳定存在，可提取连续培养3代的白僵菌基因组DNA，与进行分子杂交。若要检测M基因是否成功表达，需要提取白僵菌中的进行抗原抗体杂交。

人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：下图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）

回答下列问题：

（1）已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板链碱基序列为ACA，而丝氨酸的密码子为UCU，因此改造后的基因决定第84位丝氨酸的模板链的碱基序列应设计为。
（2）若t-PA改良基因的粘性末端如图所示，那么需选用限制酶和切开质粒pCLY11，才能与t-PA改良基因高效连接，在连接时需要用到酶。
（3）应选择（能／不能）在加入新霉素的培养基中生存并形成菌落的大肠杆菌作为受体细胞，目的是。在加入新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，需选择呈色的菌落，进一步培养、检测和鉴定，以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
（4）以上制造性能优异的改良t-PA蛋白的过程称为工程。

抗虫的转基因植物，含有Bt蛋白，也叫毒蛋白，Bt蛋白本身其实没有任何毒性，但是鳞翅目幼虫的肠道壁上有一种特别的蛋白，喜欢与Bt蛋白结合，引起肠道壁穿孔，导致幼虫死亡。

（1）抗虫植物的抗虫效果与Bt蛋白的表达量直接相关，可通过制备作为特异探针对Bt蛋白表达量进行检测。
（2）将Bt蛋白基因导入植物细胞的的方法有农杆菌转化法和等。在农杆菌转化过程中，防止农杆菌过度生长是转基因成败的重要环节。因此植物材料和农杆菌共同培养结束后，转化组织需要处理，选择合适的抗生素和浓度很关键。光电比色法可用于细菌细胞密度的测定，OD₆₀₀指的是某种溶液在600nm波长处的吸光值。吸光值与溶液中吸光物质的浓度呈正比，通常用于细菌细胞密度（OD₆₀₀）测量，在测量过程中，要保持溶液中的细菌处于状态。由图可知，对农杆菌有很好的抑制效果；当浓度为300mg/L时，OD₆₀₀降为0，说明。

注：Cef（头孢霉素），Carb（羧苄青霉索）
（3）转基因食品的安全一直为人们所担忧但大量的研究表明该抗虫的转基因植物对人体并没有任何伤害，原因是。

图为某DNA分子片段，有关叙述正确的是（）

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A . ③处代表胸腺嘧啶 B . DNA连接酶可作用于部位① C . 限制酶可作用于部位② D . DNA中任意两互补碱基之和占碱基总数的一半

玉米是世界上的第三大粮食作物，广泛种植于世界各地。研究表明，转基因抗虫玉米中的细菌BT基因能表达一种毒蛋白，这种毒蛋白能有效杀死玉米螟（一种农业害虫）。请回答下列问题：

（1） BT基因在基因工程中称为。在基因表达载体中，除了要有BT基因外，还必须有启动子、终止子和。若将BT基因插入到Ti质粒的上，通过农杆菌的转化作用，就可以使其导入玉米细胞并将其插入到玉米细胞中的染色体上。
（2） PCR是利用的原理，在利用PCR技术扩增BT基因时，需要提供模板、原料、引物、等条件，将模板DNA加热至90〜95℃ 的目的是。
（3） BT基因与载体结合过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。若某限制酶的识别序列和切点是，请画出目的基因被限制酶切割后所形成的黏性末端。DNA连接酶对所连接的两端碱基序列(填“有”或“没有”）专一性要求，定性地检测BT基因的“表达”产物可采用的方法。
（4）为了防止抗虫玉米通过花粉传播带来的生态学问题，科研小组考虑将抗虫基因导入到玉米根尖细胞的中以防止基因污染，同时在大规模种植的抗虫玉米田中设置一个或多个避难所种植普通玉米，目的是。

基因工程需要特定的工具，下列叙述错误的是（）

A . 基因工程所需载体有质粒、细菌拟核DNA等 B . 载体均需有一个或多个限制酶识别位点 C . 限制酶、DNA连接酶和Taq酶作用的化学键都相同 D . 基因工程需要的工具中只有载体具有自我复制的能力

关于基因工程的叙述，正确的是（）

A . 基因工程获得的新品种可以直接投放到环境中不会影响生态环境 B . 细菌质粒是基因工程常用的运载体 C . 通常用一种限制酶处理含目的基因的DNA，用另一种处理运载体DNA D . 为培养成抗除草剂的农作物新品种导入的抗除草剂的基因只能以受精卵为载体

有3种限制酶对DNA分子的识别序列和剪切位点（图中箭头所示）依次为：限制酶1：﹣﹣↓GATC﹣﹣；限制酶2：﹣﹣CCGC↓GG﹣﹣；限制酶3：﹣﹣G↓GATCC﹣﹣。下列叙述错误的是（）

A . 不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点 B . 限制酶2和限制酶3识别的序列都包含6个碱基对 C . 限制酶1和限制酶3剪出的黏性末端相同 D . 能够识别和切割RNA分子的酶只有限制酶2

在基因工程中，常用的工具酶是（）

A . DNA解旋酶、DNA连接酶、限制酶 B . DNA聚合酶、DNA解旋酶、DNA连接酶、限制酶、运载体 C . DNA连接酶、限制酶 D . DNA连接酶、限制酶、运载体

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