第二节 基因工程的应用价值 知识点题库

（1） 获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的

序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的

序列，再通过化学方法合成所需基因。

（2） 利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有、、4种脱氧核苷三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

（3） 由A和载体B拼接形成的C通常称为。

（4） 在基因工程中，常用Ca^2＋处理D，其目的是。

（1） 早熟基因和抗除草剂基因位于 （填“同源”、“非同源”）染色体上．植株M的一个细胞中最多含有 个抗除草剂基因．

（2） 抗除草剂基因在表达时，　 与DNA分子的某一启动部位相结合，以其中的一条链为模板并通过 聚合成与该片段DNA相对应的RNA分子．

（3） 亲本中不抗除草剂早熟森林草莓的基因型有 种，抗除草剂晚熟森林草莓的基因型是 ．F₂抗除草剂晚熟中纯合子的概率为　 　．

（4） 让植株M与不抗除草剂晚熟森林草莓进行一次杂交，请预测杂交结果，并用遗传图解说明． 

（1） 理论上基因组文库含有某种生物的 基因，若要从供体羊中获得目的基因，应先建立该供体羊的基因组文库，再从中 出所需的基因．

（2） 将重组表达载体导入成纤维细胞的方法是 ，为了获得母羊，移植前需对已经成功导入目的基因的胚胎进行 ， 也可取（雄或雌）羊皮肤细胞组织块的成纤维细胞做目的基因的受体．

（3） 从卵巢中吸取的卵母细胞，一般要培养到 阶段才能用于实验，实验中要用微型吸管吸出第一极体与卵母细胞的 ．

（4） 当胚胎发育到阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内．

（1） 人防御素基因HBD3导入牛乳腺上皮细胞前还需在基因前加上牛乳蛋白启动子序列，目的是。

（2） 该奶牛培育过程中涉及的技术有。

（3） 通常选用（填时期）卵母细胞作受体细胞，这个时期的卵母细胞可以从中直接获取。

（4） ①过程常使用电脉冲等方法激活重组细胞使其完成。

（5） ②过程中培养液成分除无机盐、有机盐、维生素、激素等营养物质外，还需特别添加等物质。③过程的早期胚胎一般要发育到阶段才进行移植。

（1） 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A(有内含子)可以表达出某种特定蛋白(简称蛋白A)。回答下列问题

①某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是。

②若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用作为载体，其原因是  。 

③若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有，（答出两点即可）等优点。

④若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是 (填蛋白A的基因”或蛋白A的抗体”)。

⑤艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是。

（2） 某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Amp^r或Tet^r中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉索抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因，有人将此质粒载体用BamH Ⅰ酶切后，与用 BamHⅠ酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题

①质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。

②如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是： ，并且和的细胞也是不能区分的，其原因是。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有的固体培养基。

③基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于。

（1） 回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：

①制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。为了获得优良的乳酸菌菌种，分离前将泡菜汁用稀释后制成较稀浓度的悬液，这样做的目的是在培养时有利于获得。 

②在MRS 乳酸菌专用培养基（含CaCO₃）上会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，实验结果见下表。

 

菌种	菌落直径：C(mm)	透明圈直径：H（mm）	H/C
I	5.1	11.2	2.2
II	8.1	13.0	1.6

有关本实验的叙述，错误的是。

A．应选择细菌I 进一步纯化   B．筛选乳酸菌时，菌液应稀释后划线

C．以上两种细菌均能将乳酸分泌至细胞外   D．H/C 值反映了两种细菌产生乳酸能力的差异

③泡菜腌制过程中会产生对人体有害的亚硝酸盐，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取滤液，加入氢氧化钠和硫酸锌溶液产生白色沉淀，经后过滤备用。

④亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与偶联，形成紫红色产物。然后将样品液用光程为 1cm 的比色杯，在 550nm 光波下测定光密度值。若所测得的光密度值过大应采取的措施是或者。

（2） 利用基因编辑技术将病毒外壳蛋白基因导入猪细胞中，然后通过核移植技术培育基因编辑猪， 可用于生产基因工程疫苗。下图为基因编辑猪培育流程，请回答下列问题：

①对 1 号猪使用促性腺激素处理，使其超数排卵，用定位取卵。    

②采集 2 号猪的组织块，用胰蛋白酶处理获得分散的成纤维细胞，放置于 37℃的 CO₂ 培养箱中进行培养，其中 CO₂ 的作用是。

③为提高重组卵发育的成功率，实验过程中可采取的措施有： ①在核移植前对成纤维细胞进行培养处理； ②采用了技术刺激重组卵。

④在 进 行 基 因 编 辑 操 作 时 ， 需 要 用 到 的 工 具 酶 有。

⑤为检测病毒外壳蛋白基因是否在 4 号猪体内正常表达，可采用的方法是 。

（1） 构建透明质酸酶基因表达载体时，使用的载体往往有特殊的标记基因，其作用是；所用的DNA连接酶将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的，对所连接的DNA两端碱基序列（有/没有）专一性要求。早期用大肠杆菌作为受体细胞，后来发现毛霉或酵母菌更具优势，最可能的原因是。

（2） 透明质酸酶基因上的一段核苷酸序列为“—ATCTCGAGCGGG—”，则对应该段核苷酸序列进行剪切的XhoⅠ酶识别的核苷酸序列（6个核苷酸）为。

（3） 人体细胞间质有基膜粘连蛋白、多糖（如透明质酸）、蛋白多糖等成分。链球菌等致病菌在侵染人体时，可产生透明质酸酶。试分析透明质酸酶在链球菌侵染过程中的作用是，其意义可能是。

（1） 通常把目的基因转入雄原核而不是雌原核，从两者形态差异上分析，原因是。

（2） 把桑椹胚植入假孕母鼠子宫前，需要对胚胎进行性别鉴定，目前最有效的方法是SRY-PCR法。操作的基本程序是：先从被测胚胎中取出几个细胞，提取DNA，然后用位于Y染色体的性别决定基因，即SRY基因的一段碱基设计，以胚胎细胞中的DNA作为模板，进行PCR扩增，最后用SRY特异性探针检测扩增产物。出现阳性反应者，胚胎为；出现阴性反应者，胚胎为。

（3） 若目的基因的表达产物是某种特定的蛋白质，检测目的基因在子代转基因小鼠中是否成功表达，常用的分子检测方法是，检测的基本思路是。

（1） 改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力。以的方式获得目的基因，再利用PCR技术扩增，并将其中某些基因(不包括表面抗原基因)内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列。与改造前的基因相比，改造后的基因表达时不能合成完整长度的，因此不能产生子代病毒。将该、等其他基因分别构建重组质粒，并保存。

（2） 构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。设计合成一种特殊tRNA的基因，其产物的反密码子能与（1）中的终止密码子配对结合，并可携带一个非天然氨基酸(Uaa)。将该基因的表达载体导入宿主细胞。提取宿主细胞的总RNA进行分子杂交鉴定，筛选获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞。

利用转基因宿主细胞制备疫苗。将(1)中的导入（2）中的转基因宿主细胞，并在补加的培养基中进行培养，则该宿主细胞能利用上述特殊tRNA，翻译出改造病毒基因的完整蛋白，产生大量子代病毒，用于制备疫苗。特殊tRNA基因转录时，识别其启动子的酶是。

（3） 因上述子代病毒，所以对宿主没有致病性，因此不经灭活或减毒即可制成疫苗。

（4） 治疗甲型流感病毒适宜选用（抗生素类或是干扰素类）药物，它的化学本质是。

（1） 提取抗马拉硫磷小菜蛾总RNA，经①过程获得总cDNA，利用PCR技术可以选择性扩增CarE基因的cDNA，原因是。

（2） 与从基因组文库中获得的基因相比，经①②得到的CarE基因不能直接用于构建基因表达载体，原因是。在③过程中，要用CaCl₂处理大肠杆菌，使其变成细胞；得到大肠杆菌工程菌后，若要检验CarE基因是否成功表达，可以采用技术，若没有出现相应的杂交带，则需要用作探针检验目的基因是否转录出mRNA．

（3） 若经以上过程得到的CarE制剂效果不理想，则可以用蛋白质技术，通过，间接实现对CarE的改造，以满足生产和生活的需求。假如请你为CarE（羧酸酯酶）制剂设计产品说明书，你认为在保存以及使用上应注意哪些事项？（写出1点，合理即可）。

（1） 研究发现T﹣DNA的RB序列相当保守，是由于该序列的突变类型在过程中被淘汰。

（2） T﹣DNA转移至植物细胞可使植物患“肿瘤”，研究发现“肿瘤”的发生与植物激素有关，据此推测T﹣DNA中致瘤基因tmr、tms 可能与等植物激素的合成有关。

（3） 为防止植物形成“肿瘤”，研究人员按如图构建了双元载体系统。图中过程①需先用限制酶处理Ti质粒以去除致瘤基因，再用酶将经过处理的固氮基因接入Ti质粒，以构建重组质粒；过程②用限制酶处理重组质粒，获得含vir基因的DNA片段和含固氮基因的T﹣DNA，再经过程③、④分别构建Ti辅助质粒和T﹣DNA给体质粒。图中过程④可以实现的原因是 。

（4） 科研人员用限制酶EcoRI和Sau3AI处理T﹣DNA给体质粒，完全酶切后可以得到含条带的凝胶电泳图谱。

（5） 将构建的Ti辅助质粒和T﹣DNA给体质粒导入通过方法处理的土壤农杆菌内，选择在含有的培养基上能形成菌落的土壤农杆菌去感染小麦细胞。该过程中T﹣DNA给体质粒并不含有vir基因，但仍能将转化成功的原因是。

（6） 种植转基因固氮小麦，在环境保护上的重要意义有。（答出一点即可）