第二章 细胞工程 知识点题库

（1） 现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT…CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是．

（2） 某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为，加入了作为合成DNA的原料．

（3） 现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2．

①由图2可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是．细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是．

②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果．

（1） 从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为；为防止细菌感染，培养液中通常添加适量的。

（2） 图中2－细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得，该过程称为，也可从灰鼠体内取出卵子， 通过后进行早期胚胎培养获得。

（3） 图中重组囊胚通过技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用方法保存。

（4） 小鼠胚胎干细胞(ES)可由囊胚的分离培养获得。iPS与ES细胞同样具有发育全能性，有望在对人类iPS细胞进行定向后用于疾病的细胞治疗。

（1） 用ICAM-1作为抗原间隔多次免疫若干只小鼠，几周后取这些免疫小鼠的血清，分别加入多孔培养板的不同孔中，多孔培养板中需加入以检测这些小鼠产生的抗体。依据反应结果，选出反应最强的培养孔所对应的小鼠M。

（2） 实验用骨髓瘤细胞置于恒温培养箱中37℃培养，融合前将部分培养细胞置于含HAT的选择培养基中培养，一段时间后培养基中（填“有”或“无”）骨髓瘤细胞生长，说明培养基符合实验要求。

（3） 取小鼠M的脾脏细胞制备成细胞悬液，与实验用骨髓瘤细胞进行融合，用选择培养基筛选得到具有能力的细胞。将获得的上述细胞在多孔培养板上培养，用ICAM-1检测，从中选择的杂交瘤细胞，植入小鼠腹腔中培养，一段时间后从小鼠腹水中提取实验用抗体。

（4） 若进一步比较实验用抗体和¹³¹I对GD模型小鼠的治疗作用，可将若干GD模型小鼠等分为三组，请补充下表中的实验设计。

对照组（A）	131I治疗组（B）	单克隆抗体治疗组（C）
给GD模型小鼠腹腔注射0.1mL无菌生理盐水	给GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL无菌生理盐水的131I

（1） 用体细胞克隆动物是通过核移植来实现的，哺乳动物核移植包括体细胞核移植和，前者核移植的难度明显高于后者，原因是。

（2） 体细胞核移植的过程中，需要将采集到的卵母细胞在体外培养到期时，用微型吸管将吸出。再通过电刺激使两细胞融合，以构建重组胚胎。为使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致，需要对供、受体母猴用激素进行处理。

（3） 为提高胚胎的利用率，可采用胚胎分割技术，操作时一般选用发育至期的胚胎进行分割。分割后的胚胎经培养、移植后能发育成多个新个体，这是因为内细胞团的细胞在发育上具有。

（1） 图中抗原X是指，由此激发小鼠产生特异性免疫反应，通常从小鼠的中采集淋巴细胞，该细胞因为不能，所以不能产生大量抗体。

（2） 在制备骨硬化蛋白单克隆抗体的过程中，有筛选的过程，但目的不同：第一次筛选的目的是，进一步筛选的目的是。

（3） 经过筛选后获得所需细胞要继续进行培养，如果采用体外培养的方法，除了需要一定的营养物质这一条件外，还需要的条件有、、。

（4） 以上单克隆抗体制备依据的免疫学基本原理是。

（5） 以上方法制备的单克隆抗体的优点是 。

（1） 采样：在附近采集活性污泥，加入适量的，通入氧气，促进微生物的以备使用。

（2） 菌种筛选：取活性染料配置成500mg/L的培养基分装于5个锥形瓶，经后分别加入1mL的含菌种的污泥，置于中培养一段时间后，选择的锥形瓶中的微生物进一步分离提纯。

（3） 纯种分离：配置相应浓度的活性染料固体培养基后，若要操作简便，可利用法筛选得到纯的菌种。

（4） 菌种保存：分离得到的菌种可接种到培养基，置于4℃冰箱保存。

（5） （二）2018年非洲猪瘟病毒传至我国并对养猪业构成严重威胁，该病毒是一种双链DNA病毒，可编码多种蛋白质。非洲猪瘟病毒表面的主要结构蛋白p22蛋白，可以诱导猪产生抗体。工业上可利用转基因技术生产p22蛋白疫苗，并制备相应的单克隆抗体。请回答下列有关问题：
p22蛋白疫苗的制备和鉴定。与p22蛋白基因及质粒有关的限制酶切位点如下图所示，已知不同种限制酶切割出的黏性末端不同。

       

（LacZ基因能表达出β-半乳糖苷酶，使无色的半乳糖苷分解，进而使菌落呈现蓝色）

①根据p22蛋白基因的序列设计一对引物，通过技术扩增特定的DNA以获取目的基因；②构建重组DNA，利用酶（写出酶的名称）分别切割目的基因和质粒，以减少连接产物的种类并避免目的基因与质粒反向连接；③用重组质粒转化感受态细胞，并将受体细胞涂布在含氨苄青霉素的LB固体平板上，在37℃恒温培养箱培养12h，挑取的单菌落，将其转移至液体培养基扩大培养。一段时间后离心收集细胞，超声破碎后离心取上清液制备样品，利用的方法对p22蛋白进行鉴定。

（6） 抗p22蛋白的单克隆抗体制备及鉴定。p22蛋白可作为对小鼠进行多次注射后，分离出小鼠脾细胞，利用的仙台病毒促进该细胞与体外培养的骨髓瘤细胞融合；融合细胞经过多次筛选后得到的杂交瘤细胞具有的特点是；将选出的杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔，待小鼠腹部膨胀明显，采集，分离提取出单克隆抗体。