胰岛素 A、B 链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。 图 1 是该方法所用的基因表达载体,图2 表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B 分别表示-半乳糖苷酶与胰岛素 A、B链融合的蛋白)。 请回答下列问题:


-半乳糖苷酶被切成多个肽段,这是因为 。
(1)过程③和④分别表示 和 .
(2)在培养过程中,除了提供水分、无机盐、糖类、维生素及氨基酸外,还需要在培养基中加入 . 同时,在培养过程中,除必需的温度、光照和氧气等外界条件外,成功的另一个关键是操作过程必须保证 .
(3)在植物组织培养的过程中,可以对 进行化学或物理的诱变处理,促使其发生突变,再通过诱导分化形成植株,从中选育出优良品种.这种作物新品种的培育方法属于 .
(4)若将兰花的茎尖细胞换成兰花的花粉粒,经组织培养形成植株,再进行染色体加倍,这种育种方法称为 ,其突出优点是


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①选用酶将载体P切开,再用(填“T4DNA或“E·coli81DNA”)连接酶将MT基因与载体P相连,构成重组载体P′。
②载体P′不具有表达MT基因的和。选用酶组合对载体P′和载体E进行酶切,将切下的MT基因和载体E用DA连接酶进行连接,将得到的混合物导入到用离子处理的大肠杆菌,筛出MT工程菌。

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限制酶 |
BamHⅠ |
HindⅢ |
EcoRⅠ |
SmaⅠ |
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识别序列及切割位点 |
↓ GGATCC CCTAGG ↑ |
↓ AAGCTT TTCGAA ↑ |
↓ GAATTC CTTAAG ↑ |
↓ CCCGGG GGGCCC ↑ |
