题目

GDNF是一种神经营养因子．对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答： （1） 在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 ． （2） 构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的限制酶进行酶切． （3） 经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示．图中第泳道显示所鉴定的载体是正向连接的． （4） 将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的与提取的蛋白质杂交．当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验． 答案： 【1】使细胞分散开 【1】XhoⅠ 【1】② 【1】抗体【2】传代

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