题目

图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tetr)和氨苄青霉素抗性基因（ampr）。请回答下列问题： （1） EcoR V酶切位点为 ，EcoR V酶切出来的线性载体P1为末端。 （2） 用Taq DNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在酶作用下，形成重组质粒P3。 （3） 为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“+”代表生长，“﹣”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是（填表中字母）类，另外两类菌落质粒导入情况分别是、。 菌落类型平板类型 A B C 无抗生素 ﹢ ﹢ ﹢ 氨苄青霉素 ﹢ ﹢ ﹣ 四环素 ﹢ ﹣ ﹣ 氨苄青霉素+四环素 ﹢ ﹣ ﹣ （4） 为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400 bp片段，原因是。 答案： 【1】平 【1】胸腺嘧啶（T）【2】DNA连接 【1】B【2】A类菌落含有P0【3】C类菌落未转入质粒 【1】乙丙【2】目的基因反向连接

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