题目

pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3 666 bp（bp表示碱基对），其结构如下图所示。图中PRPL是启动子，rrB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ等为各种限制性内切酶。请据图回答下列有关问题： （1） 基因工程的核心步骤是。 （2） 从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有、。 （3） 该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割。单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500 bp和1个2 666 bp片段，B和C同时切割得2个250 bp和1个3 166 bp片段。若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为，C的两个切割位点与A点的最短距离分别为、 （4） PR和PL都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是。温控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活。促进工程菌目的基因表达的诱导温度为。 答案： 【1】构建目的基因的表达载体 【1】多个限制性内切酶的切割位点【2】标记基因 【1】750 bp【2】500 bp【3】1 000 bp 【1】保证目的基因的高水平表达（高效转录）【2】42℃

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