题目

华蟾素注射液是将蟾蜍的全皮阴干后，提炼而成的中药复方制剂，是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌HepG-2细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据题中信息回答下列问题。Ⅰ.肝癌HepG-2细胞的培养： （1） 培养肝癌HepG-2细胞时，在培养基中加入适量的以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入。此外，每48h更换1次培养液，目的是。同时还要提供适宜的温度、、氧气和二氧化碳等环境条件。 （2） 用不同浓度的华蟾素注射液分别处理HepG-2细胞12h、24h和48h，测定华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响，结果如下图。由图甲可知，华蟾素能有效地肝癌HepG-2细胞增殖，且与呈正相关。图乙的结果进一步表明，华蟾素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响体现在。 （3） DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录、重组及形成正确的染色体结构、染色体分离、浓缩等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理HepG-2细胞48h后，采用RT-PCR技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如图丙。①RT-PCR即逆转录-聚合酶链反应。其主要原理是：提取HepG-2细胞中的总RNA， 以一段作为引物，在酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行。②由图丙可知，华蟾素注射液在基因水平上影响肝癌HepG-2细胞的机理是。 答案： 【1】血清（血浆）【2】抗生素【3】防止代谢物积累对细胞自身造成危害（补充细胞所需营养物质）【4】pHⅡ.探究华蟾素药效作用机理的实验： 【1】抑制【2】作用时间和浓度【3】将癌细胞阻滞在S期 【1】与TopoⅡmRNA互补的单链DNA【2】逆转录【3】PCR扩增【4】抑制TopoⅡ基因的转录/表达，最终导致TopoⅡ含量降低

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