题目

根据以下植物基因工程的操作步骤，回答有关问题。 （1） 利用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因（基因序列未知），需根据相应蛋白质的氨基酸序列设计多种引物，原因是，基因表达载体中目的基因上游的是RNA聚合酶的识别位点。 （2） 将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是。 （3） 下图是利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入植物受体细胞的示意图。图中质粒含CRISPR基因和Cas9基因，CRISPR基因转录的sgRNA可以特异性识别细胞核DNA分子中的特定序列，Cas9基因表达的Cas9酶能切割被sgRNA识别的DNA序列。重组片段中的目的基因，能通过DNA损伤修复和被切割的DNA序列连接。 sgRNA通过特异性识别细胞核DNA分子中的有关序列，sgRNA，Cas9酶和基因工程中的基本工具作用相似。不同基因工程中利用的CRISPR/Cas9质粒有差异，这些质粒中所含的CRISPR基因通常是（填“相同”或“不同”）的，所含的Cas9基因通常是（填“相同”或“不同”）的。 （4） 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将目的基因导入受体细胞与“（2）”中使用的方法相比，优点是。 答案： 【1】一种氨基酸可能有多种密码子，对应的DNA碱基序列有多种【2】启动子 【1】农杆菌转化法 【1】与目标DNA的部分碱基序列配对【2】限制性核酸内切酶（或限制酶）【3】不同【4】不同 【1】使目的基因精确定点敲入，实验操作更加精准、高效

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