题目

欲研究细胞在培养瓶中培养适当时间后，产生的细胞总数、集落数与原培养细胞浓度的关系（集落是指贴壁生长的细胞增殖6代以上形成的细胞群体，肉眼可见），请完善实验思路，预测实验结果并进行分析与讨论。村料与用具：未知浓度的X细胞悬液，动物细胞培养液，培养瓶若干，C02培养箱，血细胞计数板，显微镜，移液器，胰蛋白酶，染色剂等。（要求与说明：细胞和集落计数、染色等具体过程不作要求，所用试剂的剂量不作要求，营养均满足要求，各种条件适宜） （1） 完善实验思路：①；②据思路①，用动物细胞培养液稀释获得1000个/5mL、800个/5mL、600个/5mL、400个/5mL、200个/5mL、100个/5mL6种浓度的X细胞悬液；③分别取5mL上述配制的6种浓度的X细胞悬液加到培养瓶中，每种浓度设若干重复样品，放入CO2培养箱中培养3周后，去除培养液并染色；④；⑤；⑥。 （2） 预测实验结果：若已知200个/5mL至800个/5mL浓度间，产生的集落数与原培养细胞浓度呈线性关系，但低于200个/5mL或高于800个/5mL的浓度将会偏离，请建立一个坐标系并画出集落数与原培养细胞浓度关系曲线。 （3） 分析与讨论：①高于800个/5mL的浓度会偏离线性关系的原因是。②低于200个/5mL会偏离线性关系的原因是，欲解决这种情况，可预先在培养瓶中制备一层细胞，以支持生长来提高效率。 答案： 【1】①用血细胞计数板和显微镜对X细胞悬液计数，确定其浓度【2】对每个培养瓶的集落进行计数，记录数据（并取平均值）【3】各培养瓶（或另取培养瓶）用胰蛋白酶液处理（集落）并稀释，再用血细胞计数板和显微镜计数【4】对所得数据进行统计和处理 【1】多个细胞共同形成集落/集落有重叠【2】浓度太低，有些细胞死亡/不能存活/不能贴壁，不能培养形成集落【3】滋养/饲养层/(胚胎）成纤维

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