一微生物的基本培养技术知识点题库

现有一种能生产甲硫氨酸的M菌，但产量很低，而且当培养液中甲硫氨酸的含量达到最大值后，继续培养，甲硫氨酸含量会迅速下降。这是由于甲硫氨酸的积累反过来抑制了其合成。用紫外线照射可选育得到能抗甲硫氨酸抑制的高产新菌株。下列有关选育过程的表述，不正确的是

A . 这种新菌株的选育方法属于用物理因素诱导的诱变育种 B . M菌培养液中甲硫氨酸的含量达到最大值后又不断减少是反馈调节的结果 C . 用紫外线照射M菌的同时，还应在其培养基中添加甲硫氨酸 D . 该选育过程中采用的培养基是液体培养基

氢气是一种清洁能源，可由产氢菌群无氧发酵产生．科研人员从厌氧活性污泥中获得产氢菌群，并利用硫酸纤维素钠和聚二甲基二烯丙基氯化铵能形成中空微胶囊的特性将其固定化．在此基础上比较固定化产氢菌和游离产氢菌的菌体浓度随时间的变化、不同温度下条件下氢气产率的变化，结果如下图．请分析回答：

（1）本实验中，固定化产氢菌采用的方法称为．
（2）由图1可知，与游离的产氢菌相比，固定化的产氢菌培养后菌体浓度增加较，其主要原因是．
（3）由图2可知，固定化产氢菌生产氢气的优势表现在氢气产率高、．
（4）实验中使用的发酵培养液成分如下表：
培养液成分
葡萄糖
蛋白胨
牛肉膏
酵母汁
NaCl
K₂HPO₄
半胱氨酸
微量元素
含量（g/L）
20
4
2
1
2
1.5
0.5
适量
其中为产氢菌群提供氮源的成分有．培养基配制时，培养基灭菌采用的最适方法是，灭菌与调pH的先后顺序是．
（5）在生产实践中，为了充分发挥固定化产氢菌的优势，除了探究固定化产氢菌发酵所需的适宜条件外，还需探究．

农业生产上有一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解，长期使用会污染土壤。为修复被污染的土壤，可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌。已知该除草剂(含氮有机物)在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。

（1）微生物接种是微生物学研究中最常用的基本操作技术，该技术的核心是，应该在旁完成。图中B、C所示操作的目的是将聚集的菌种逐步。
（2）在选育过程中，应将土壤浸出液接种于以为唯一氮源的固体培养基上。为了筛选出高效的目的菌，可比较单菌落周围透明圈的大小。实验结果如图2显示的A～E五种菌株中，是最理想菌株。
（3）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是。对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目，原因是。

根据微生物的分离和培养的知识，回答下列问题：

（1）分离纯化大肠杆菌的关键步骤是；该步骤常用的方法有两种：和，其中一种方法是将菌液进行一系列的，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。
（2）在微生物的实验室培养过程中，获得纯净培养物的关键是，因此需要对培养基和培养皿进行处理，操作者的双手需要进行清洁和。
（3）分离分解尿素的细菌的培养基中要以尿素为唯一(填“碳源”或“氮源”)。

根癌农杆菌感染葡萄等果树，会引起根细胞增殖产生根瘤，危害极大。研究发现黑曲霉对根癌农杆菌有抑制作用。请回答下列问题。

（1）根癌农杆菌能引起葡萄产生根瘤，根瘤菌也会引起豆科植物产生根瘤，它们的种间关系分别是。
（2）研究发现，改变培养基中某一营养物质后，黑曲霉所产生的抑菌物质对根癌农杆菌抑制效果不同，实验结果如图。

①实验中改变的营养物质属于，除该物质外，培养黑曲霉还需要的营养物质一般还有。

②实验中先将黑曲霉接种于液体培养基中摇瓶培养5天，进行摇瓶操作的目的是（答出1点即可）；再利用黑曲霉培养基的滤液进行抑菌实验，结果表明组的抑菌效果最好，可能的原因是（答出1点即可）
（3）研究发现，黑曲霉分泌的酶可用于果汁、果酒等的深加工，提高产品的产量和质量。将黑曲霉细胞固定化常用的方法是，采用该方法时，如果海藻酸钠浓度过低会影响实验效果，原因是。

某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题。

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（1）培养基中加入化合物A的目的是，这种培养基属于培养基。
（2） “目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的。实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的呼吸作用类型是。
（3）转为固体培养基时，常采用平板划线的方法进行接种，此过程中所用的接种工具是，操作时采用灭菌的方法。
（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是。
（5）某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用10^-4、10^-5、10^-6稀释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是，此对照实验的目的是证明过程中是否被杂菌污染。

如图表示培养和分离某种细菌的部分操作步骤，下列叙述正确的是（　　）

A . 步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置 B . 步骤②接种环火焰上灼烧后迅速蘸取菌液后划线 C . 步骤③三个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落 D . 步骤④恒温培养箱培养后可用来对大肠杆菌进行计数

菌种 M 和菌种 N 在发酵工程应用上具有不同的优越性，为了获得具有它们共同优良性状的融合菌，进行了下图所示的实验。已知菌种M 为组氨酸依赖（组氨酸合成相关基因突变为B-），菌种 N 为色氨酸依赖（色氨酸合成相关基因突变为 A-），下列分析错误的是（）

A . 菌种M 和N 可通过人工诱变和选择性培养筛选获得 B . 用 PEG 诱导融合之前需要去除菌种 M 和N 的细胞壁 C . 在培养基X 中添加组氨酸和色氨酸以筛选出杂种融合菌 D . 从培养基X 中分离出的杂种融合菌P 对两种氨基酸均不依赖

下列有关微生物培养的叙述正确的是（）

A . 通常使用液体培养基分离获得细菌单菌落 B . 若培养基需要调节pH，应该在灭菌后进行 C . 用显微镜直接计数固体培养基中微生物数量 D . 倒置平板可防止培养基被滴落的冷凝水污染

下表是一种细菌培养基配方，请回答下列问题：

（1）该培养基的葡萄糖为微生物的生长繁殖主要提供。
（2）该培养基属于______________培养基。

A . 液体 B . 固体 C . 鉴定 D . 选择 E . 天然
（3）如果要对培养基的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行。
（4）制备培养基的操作步骤是_________________。（用下列字母排序）
a.倒平板 b.计算 c.溶化 d.称量 e.灭菌

A . a→b→c→d→e B . e→b→d→c→a C . b→d→c→a→e D . b→d→c→e→a
（5）某同学用稀释涂布平板法测定一个土壤样品中的细菌数（取10克该土壤加90mL无菌水制成稀释液）。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中统计3个平板上的菌落数分别为：121、212、256，则每克该土壤样品中的菌落数为。
（6）分离土壤中分解尿素的微生物的实验流程包括：土壤取样、、样品涂布到培养基上、挑选。

某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。

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回答下列问题：

（1）实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是。甲、乙培养基均属于培养基。
（2）实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×10⁷个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释倍。
（3）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是（答出1点即可）。
（4）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤。
（5）上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即。

新冠肺炎疫情警示人们要养成良好的生活习惯，提高公共卫生安全意识。下列相关叙述，错误的是（）

A . 发现新冠肺炎病人及时隔离可有效预防疾病传播 B . 戴口罩、勤洗手可降低感染风险 C . 用酒精擦拭桌面的目的是防止新冠病毒在体外增殖 D . 煮沸可杀死新冠病毒

关于平板划线法和稀释涂布平板法的叙述错误的是（　　）

A . 只能用于固体培养基接种 B . 都可以用于微生物的计数 C . 接种培养后均可获得单菌落 D . 接种用具都需进行严格灭菌

微生物培养过程中消毒和灭菌环节非常重要，以下灭菌或消毒方法不正确的是（）

选项	A	B	C	D
仪器或试剂	固体培养基	接种环（针）	菌种稀释液	滴管
消毒或灭菌方法	高压蒸汽灭菌	火焰灼烧	紫外光照射	酒精消毒

A . A B . B C . C D . D

科研人员研究调控蔗糖转移酶基因（SUC2）的两种蛋白质Snf1和Snf2之间的相互作用的原理如下：真核细胞起始基因转录需要有转录激活因子的参与。酵母转录因子GAL4在结构上是组件式的，由DNA结构功能域（BD）和转录激活结构域（AD）组成。两个结构域分开时不能激活转录，只有当两者空间上接近时，才具有GAL4转录因子活性。BD与基因上游激活序列UAS结合后，激活AD与启动子结合，使启动子下游基因转录。如图为研究相互作用的X蛋白和Y蛋白的机制模式图。

（1）操作中，需要用酶将目的基因分别插入到酵母表达载体中，得到两种融合表达载体（如下图）。酶切时通常选用两种不同的酶，这样做的目的是
（2）酵母染色体上能被GAL4激活转录，显示两种蛋白质相互作用的基因称为报告基因。若用AUR1-C（抗生素AbA抗性基因）和HIS3（组氨酸合成基因）作为报告基因，那么作为被转化的酵母细胞在抗生素抗性和营养需求上应满足的条件是。转化后需要在添加的培养基上培养筛选。除此之外，还要将酵母的GAL4基因敲除，原因是。
（3） LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色；否则菌落为白色。科研人员采用LacZ作为报告基因，根据上述原理，验证了蛋白质Snf1和Snf2之间存在相互作用。写出实验思路并预期结果及推论。

回答下列(1)、(2)小题：

（1）红曲霉合成的红曲色素是可食用的天然色素，具有防腐、降脂等功能。研究者进行了红曲色素的提取及红色素的含量测定实验，流程如下：

Ⅰ.取红曲霉菌种斜面，加适量洗下菌苔。制成菌悬液并培养，解除休眠获得菌种。经液体发酵，收集红曲霉菌丝体，红曲霉菌丝体与70%乙醇溶液混合，经浸提、，获得的上清液即为红曲色素提取液。为了进一步提高红曲色素得率，可将红曲霉细胞进行处理。

Ⅱ.红曲色素包括红色素、黄色素和橙黄色素等，红色素在390nm、20nm和505nm波长处均有较大吸收峰，用光电比色法测定红曲色素提取中的红色素含量时，通常选用505nm波长测定的原因是。测定时需用作空白对照。

Ⅲ.生产上提取红曲色素后的残渣，经处理后作为饲料添加剂或有机肥，这属于废弃物的无害化和

处理。
（2）我国在新冠疫情防控方面取得了显著的成绩，但全球疫情形势仍然非常严峻，尤其是病毒出现了新变异株——德尔塔、奥密克戎，更是威胁着全人类的生命健康。
Ⅰ.新冠病毒核酸定性检测原理是：以新冠病毒的单链RNA为模板，利用酶合成DNA，经PCR扩增，然后在扩增产物中加入特异的，如果检测到特异的杂交分子则核酸检测为阳性。

Ⅱ.接种疫苗是遏制新冠疫情蔓延的重要手段。腺病毒疫苗的制备技术要点是：将腺病毒的复制基因敲除；以新冠病毒的基因为模板合成的DNA插入腺病毒基因组，构建重组腺病毒。重组腺病毒在人体细胞内表达产生新冠病毒抗原，从而引发特异性免疫反应。在此过程中，腺病毒的作用是作为基因工程中目的基因的。将腺病毒复制基因敲除的目的是。

Ⅲ.单克隆抗体有望用于治疗新冠肺炎。单克隆抗体的制备原理是：取免疫阳性小鼠的细胞与骨髓瘤细胞混合培养，使其融合，最后筛选出能产生特特定抗体的杂交瘤细胞。与植物组织培养相比，杂交瘤细胞扩大培养需要特殊的成分，如胰岛素和。

红枣有“天然维生素丸”的美誉。利用红枣制作的红枣酒、红枣醋受到大家的喜爱。下图是红枣汁、枣酒、枣醋的生产流程。请回答下列问题：

（1）红枣果汁制作过程中，加入果胶酶的目的是；调配好的果汁要加热到70~80℃，保持15分钟，然后迅速装罐并封好罐口。该过程不用高压蒸汽灭菌法的原因主要是。
（2）大规模生产果酒时，要向发酵罐中加入活化的；为了提高生产效率，发酵初期应在（填“有氧”或“无氧”）条件下进行，目的是。
（3）过程④中要使果酒变成果醋，需要改变的条件有（答出3点）。

某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在了一起。圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能。青霉素不会影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。该同学设计下面的实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。材料用具：略。

（1）圆褐固氮菌和酵母菌在结构上的主要区别是。
（2）该同学设计的实验步骤如下：
①制备两种培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标号A、a和B、b；

②分别在A、B培养基上接种微生物，并在25℃条件下培养3～4天；

③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，在适宜条件下培养3～4天。
（3）回答下列问题：
①培养基中一般含有。本实验中，配制的分离用的培养基的成分特点：若A、a是无氮培养基，则B、b是培养基，根据上述原理配制的这两种培养基属于培养基。

②实验步骤中第③步分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，这样做的目的是。

③青霉素会抑制圆褐固氮菌等细菌的生长繁殖，但不会影响酵母菌等真菌的生长繁殖。青霉素抑制圆褐固氮菌的作用机理是破坏或抑制其细胞壁的形成。据此推测出现这种差异的原因是。

我国生活饮用水水质标准（GB5749—85）中规定生活饮用水中大肠杆菌不得大于3个/L。某兴趣小组使用EMB培养基从某种水中分离和鉴定大肠杆菌。回答下列问题。

（1）在实验室中对培养基进行灭菌时，常采用的方法是。该方法与干热灭菌相比，特殊之处在于。
（2） EMB培养基的配方（见下表）中，乳糖的作用是。在该培养基上生长的大肠杆菌菌落呈色。
蛋白胨
乳糖
K₂HPO₄
2%伊红水溶液
0.5%美蓝水溶液
pH
琼脂
10g
10g
2g
20mL
13mL
7.4
25g
将上述物质溶解后，添加无菌水，定容至1000mL
（3）在接种前，为了检测培养基灭菌是否彻底，应如何处理?。
（4）该组同学用滤膜法检测大肠杆菌数，大致流程如图所示。该流程一共过滤了10L水，最后在平板上形成了17个大肠杆菌的单菌落。
①单菌落指的是。该方法所统计样品中含大肠杆菌数往往偏低的原因是。
②该种水（填“符合”或“不符合”）我国生活饮用水水质标准（GB5749—85）中对大肠杆菌的规定

木质纤维素类生物质是地球上最丰富的可再生资源，既可以转化为能源燃料，也能通过生物方法获得各种可再生的生物基材料。研究人员拟从大熊猫粪便中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：

（1）常规微生物实验中，下表中物品及其灭菌方法错误的是（填序号）。配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是。
序号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
干热灭菌
灼烧灭菌
灼烧灭菌
高压蒸汽灭菌
（2）为筛选纤维素分解菌，研究人员将大熊猫的新鲜粪便样品接种在以为唯一碳源的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于培养基。单个细菌在平板上会形成菌落，通常可根据来初步区分不同种类的微生物。
（3）用平板培养纤维素分解菌时，一般需要将平板（填“倒置”或“正置”）。若要测定大熊猫粪便中纤维素分解菌的数量，请写出主要实验步骤：。

培养液成分	葡萄糖	蛋白胨	牛肉膏	酵母汁	NaCl	K₂HPO₄	半胱氨酸	微量元素
含量（g/L）	20	4	2	1	2	1.5	0.5	适量

蛋白胨	乳糖	K₂HPO₄	2%伊红水溶液	0.5%美蓝水溶液	pH	琼脂
10g	10g	2g	20mL	13mL	7.4	25g
将上述物质溶解后，添加无菌水，定容至1000mL

序号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	培养皿	涂布器
灭菌方法	干热灭菌	灼烧灭菌	灼烧灭菌	高压蒸汽灭菌

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