第2节 微生物的培养技术及应用 知识点题库

尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用．土壤中的某些微生物对尿素具有有分解作用，请就图1所示土壤中的尿素分解菌的分离与计数实验分析回答．

（1）分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O．若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述 成分，并加入 物质，以补充 源．

（2）同学甲一个平板经培养后，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是 ，应当怎样操作才可避免此种现象？ ． 同学乙一个平板经培养后的菌落分布如图2所示．推测该同学接种时可能的操作失误是 

（3）四位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量．在对应稀释倍数为10⁵的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是 

A．一个平板，统计的菌落数是23

B．两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24

C．三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26

D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25

（4）同学丙在稀释倍数为10⁵的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL） 

（5）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量 ，因为 ．

（6）同学丁从上图稀释10⁵倍的培养基中筛选出150个菌落，远高于其他同学的结果，如果他们测定的是同一土壤样品，则可能的原因是 ，请你通过设置对照来确定该原因 ．

如图是某同学制作果酒和果醋的实验流程图以及预分离土壤中能分解尿素的细菌的培养基配方，请回答有关问题．

（1）图中方框内应该填写的实验步骤是 ，此步骤中起主要作用的微生物是 ，其发酵时 （需要/不需要）氧气，适宜的发酵温度范围是 ．

（2）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？（能/不能），原因是 

（3）如果想进一步对初步筛选得到的菌株进行纯化并计数，可采用的接种方法是 ．通常鉴定分解尿素的细菌的方法是在培养基中加入 指示剂．

①可以用相同的培养基           ②都要使用接种针进行接种

⑧都需要在火焰旁进行接种        ④都可以用来计数活菌．

Ⅰ．细菌常被应用于生产生活中，如有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染．某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的细菌．

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上．为筛选出高效菌株，可比较单菌落周围清晰区域的大小．一般情况下，如图中清晰区域越大说明 ．

Ⅱ．另一同学将第一步筛选得到的甲、乙、丙三种细菌分别接种到A、B、C三种培养液中，经培养后分别测得它们繁殖一代所需的时间，结果如表所示：

注：“﹣”表示细菌没有生长．

（2）在A培养基中增殖较快的细菌是 ． 丙细菌可以在C培养液中繁殖却无法在B培养液中繁殖，原因是 

（3）由于微生物的营养类型复杂，不同的微生物对营养物质的需求是不同的．如果培养能进行光合作用的微生物，培养基中的营养物质是 （多选题），

A．碳源    B．氮源    C．生长因子    D．无机盐     E．水

Ⅲ．下面是有关某细菌G的四项实验：

实验1：将G接种于一般培养基上，结果出现菌落．

实验2：用一定剂量的紫外线处理G，产生突变种g1．将g1接种于一般培养基后，不出现菌落；但在培养基内添加营养物质甲后，就出现菌落．

实验3：用另一剂量的紫外线处理G，得突变种g2，将g2接种于一般培养基后，也不出现菌落；但在培养基内添加营养物质乙后，就出现菌落．

实验4：将g1和g2一起接种于一般培养基上，数日后出现菌落．

（4）细菌g1和g2分别接种于一般培养基，均不能生长．其原因是用紫外线处理导致细菌G发生了 ，从而缺乏合成营养物质甲或乙的酶．

A．基因突变     B．基因重组     C．染色体畸变     D．不可遗传变异

（5）实验1至3表明，物质甲和乙均是细菌G在代谢过程中产生的代谢产物．在实验2和3 中，它们是作为 加入一般培养基的．

A．碳源     B．氮源        C．生长因子      D．无机盐

（6）实验4中出现菌落的原因可能是 ．

井冈霉素是我国目前防治水稻纹枯病的主导农药，由于多年的单一使用，部分地区纹枯病菌对其产生了不同程度的抗药性，迫切需要研发有类似效果的新型替代生物农药．从细菌M18中提取的申嗪霉素能有效抑制水稻纹枯菌，与其它农药相比对人体和动物安全性高．为了开发更稳定、高产的新型菌株，科研人员进行了以下研究．请回答下列问题：

（1）筛选菌株选择 （健康/患纹枯病）的水稻植株的根切成小段放入液体培养基中培养24h后，取适量培养液涂布于琼脂平板上，培养5天后，挑选形态不同的  ， 对其进行编号．然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上，培养3天后，观察纹枯菌的生长，根据 选出编号为P12的理想菌株．

（2）鉴定菌株P12所属的细菌类型提取P12基因组DNA，扩增其16S rDNA（能体现不同菌属之间的差异），扩增过程需要的酶有 ，还需要特定的  ． 对其测序后确定该菌株所属细菌类型．

（3）检测P12的细胞毒性

用人肺癌细胞系A549作为指示株系，在37℃恒温培养箱中培养．通入的空气应含 ，培养液中含少量胎牛血清，目的是 .2h后分别将相同浓度的P12、M18和DH5α（人体肠道内共生的大肠杆菌）菌液5μL加入A549细胞培养液中，4h后测定吸光值，以表示乳酸脱氢酶（LDH）的释放量．LDH是活细胞内含有的酶，当细胞受到细菌攻击时，细胞膜的 改变，LDH释放至细胞外．测定结果显示，P12对A549细胞的毒性

（4）部分地区的纹枯菌对井冈霉素产生抗药性的原因，是由于 对细菌进行长期的选择，使细菌的 发生了改变的结果．

首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行高温灭菌。再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上培养。

回答下列问题：