题目

凝乳酶能够使乳汁中的蛋白质凝聚形成奶酪，主要来源为未断奶的小牛胃粘膜。随着社会发展，传统来源的凝乳酶已不能满足生产需要。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌，从而获得足够的凝乳酶。回答下列问题：(1)利用PCR技术扩增目的基因的前提条件是要有____________用来合成引物。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含ATP和Mg2+)、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和_____________。(2)利用PCR技术扩增目的基因后需要构建基因表达载体，其目的是___________。构建的基因表达载体中通常含有标记基因，其作用是__________________。(3)分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是___________________。(4)工业生产过程中，使用酵母菌作为受体，而不选用大肠杆菌的原因是_____________________________________。 答案：【答案】一段已知目的基因的核苷酸序列TaqDNA 聚合酶（Taq 酶、热稳定性 DNA 聚合酶）使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用鉴定受体细胞是否含有目的基因并筛选DNA 分子杂交大肠杆菌不含内质网和高尔基体，不能对蛋白质进行加工和修饰【解析】分析题文描述可知：本题综合考查学生对基因工程的基本操作程序等相关知识的识记和理解能力。(1) 利用PCR技术扩增目的基因的前提条件是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。利用PCR扩增目的基因的过程由高温变性（90～95℃）、低温复性（55～60℃）、适温延伸（70～75℃）三个步骤构成一个循环，在扩增过程中离不开Taq酶（热稳定性DNA聚合酶）的催化。 (2) 基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心，其目的是：使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等，其中标记基因的作用是：鉴定受体细胞是否含有目的基因并筛选。(3) 在分子水平上，检测目的基因是否成功导入酵母菌细胞的基因组中，可采用DNA分子杂交技术。(4) 凝乳酶属于分泌蛋白，在核糖体中合成后，需要内质网和高尔基体对其进行加工和修饰后，才具有生物活性，而大肠杆菌是原核生物，不含内质网和高尔基体，不能对蛋白质进行加工和修饰，因此在工业生产过程中，不能选用大肠杆菌作为受体细胞。

查看本题答案和解析