题目

肺细胞中的let－7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let－7基因导入肺癌细胞实现了在细胞内表达。该基因工程技术基本流程如图1。请回答：(1)获取let－7基因后可采用____________技术进行扩增，进行过程①时，将let－7基因与载体重组，需要的两类酶是____________________和______________。载体上RNA聚合酶识别和结合的部位称为__________。 (2)进行过程②时，如出现贴壁生长现象，可用__________酶处理，以利于传代培养。(3)从细胞水平上，研究人员知道let－7基因成功表达的依据是__________________。(4)进一步研究发现，let－7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可通过______________________________方法 ，以直接检测let－7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中____________(填“RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。 答案：【答案】PCR 限制性核酸内切酶(或限制酶) DNA连接酶 启动子 胰蛋白 发现肺癌细胞的增殖受到抑制 从细胞中提取RNA进行分子杂交 RAS蛋白 【解析】根据题意和图示分析可知：图2表示let-7基因影响癌基因RAS的表达的原理，let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS-mRNA结合，使RAS基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制。（1）目的基因扩增常采用PCR技术，其依据的原理是DNA双链复制。过程①为基因表达载体的构建过程，基因表达载体构建过程中需使用限制酶切割目的基因和运载体，然后用DNA连接酶形成重组DNA。启动子是一段有特殊碱基序列的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。故载体上RNA聚合酶识别和结合的部位称为启动子。（2）动物细胞培养时如出现贴壁生长现象，可用胰蛋白酶处理形成单个细胞，以利于传代培养。（3）let－7基因成功表达的含义是形成let－7蛋白，根据“肺细胞中的let－7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌”，可知let－7基因成功表达会抑制癌细胞的增殖，故从细胞水平分析，let－7基因成功表达的依据是发现肺癌细胞的增殖受到抑制。（4）根据图示分析，可从细胞中提取RNA进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。let-7转录形成的RNA可与RASmRNA形成双链，从而阻止RAS蛋白的表达过程，故肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中RAS蛋白含量减少引起的。

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